参黄颈康片镇痛抗炎作用及对炎症因子影响研究

刘新宇， 刘春娜， 张晓妍， 杨 菁

（1.辽宁医学院附属第一医院，辽宁 锦州121001；2.辽宁医学院药理学教研室，辽宁锦州 121001）

参黄颈康片镇痛抗炎作用及对炎症因子影响研究

刘新宇1， 刘春娜2*， 张晓妍1， 杨 菁2

（1.辽宁医学院附属第一医院，辽宁 锦州121001；2.辽宁医学院药理学教研室，辽宁锦州 121001）

目的 该实验通过观察受试抗颈椎病药物（参黄颈康片）对抗炎、消肿、镇痛的药效学作用，探讨参黄颈康片的药理作用及相关机制。方法 该实验采用小鼠耳廓肿胀模型、大鼠肉芽肿模型、大鼠足跖肿胀动物模型，观察给予不同剂量参黄颈康片（小鼠为600、1 200、2 400 mg/kg；大鼠为500、1 000、2 000 mg/kg）的抗炎、消肿的药理作用，另外选择物理及化学法，进一步研究参黄颈康片的镇痛作用，同时应用大鼠肉芽肿模型，测定血清中白介素-6（IL-1β）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平。结果 参黄颈康片能明显降低小鼠耳廓肿胀的肿胀率、大鼠肉芽肿的质量、足跖肿胀程度，能提高小鼠痛阈值及降低其扭体反射，并能降低大鼠肉芽肿模型中炎症介质的表达。结论 参黄颈康片通过抑制炎症介质表达有较好的抗炎、镇痛作用。

肿瘤坏死因子-α；白介素-1β；足跖肿胀；肉芽肿

颈椎病是中老年常见的多发病，该病有着椎间盘变性、髓核突出病变的个体，特别是髓核对机体组织的致炎反应现象。椎间盘周围组织水肿，纤维蛋白沉积，大量的炎性细胞浸润，单核细胞趋化蛋白、巨噬细胞炎性蛋白等化学激动因子存在过度表达现象，导致了在椎间盘局部形成了炎症、增生及肿胀［1-3］。而颈椎病的治疗目前没有较好疗效的药物。参黄颈康片是由丹参、黄芪、白术、姜黄、当归、煅牡蛎等中药组成的复方制剂，拟用于治疗颈椎病。为进一步阐明其疗效，本实验主要观察给予不同剂量参黄颈康片对小鼠耳廓肿胀模型、大鼠肉芽肿模型、大鼠足跖肿胀动物模型的影响，观察其抗炎、镇痛的药理作用，并对其机制进一步研究，为临床治疗颈椎病提供可靠的理论依据［4-5］。

1 材料

1.1 动物 取昆明种小白鼠160只，体质量18～22 g。Sprague-Dawley大鼠120只，体质量180～220 g。动物合格证号：SCXK（辽）2003-0007。

1.2 试验药品 参黄颈康片（辽宁医学院新药研究所自制，为棕黄色粉末，0.35 g/片，1 g 相当于应用生药 1.429 g）；阳性对照药品：阿司匹林（湖南新汇制药有限公司提供）。

2 方法

2.1 实验动物分组 实验随机分为6组，Ⅰ组为空白对照组；Ⅱ组为模型组；Ⅲ组至Ⅴ组分别为低、中、高剂量参黄颈康片组（小鼠为 600、1 200、2 400 mg/kg；大鼠为 500、1 000、2 000 mg/kg）；Ⅵ组为阳性药物对照组，灌胃给予阿司匹林（100 mg/kg）。

2.2 测定项目

2.2.1 参黄颈康片对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响 取健康小鼠60只，每日灌胃给药1次，灌胃体积为0.1 mL/10 g，连续给药3 d，空白对照组灌胃等体积的生理盐水。末次给药后1.5 h将30 μL二甲苯涂于小鼠右耳廓前后两面致炎（除空白对照组），左耳廓作为自身对照。致炎后30 min将各组试验小鼠处死，用直径9 mm打孔器在相同的部位取下左、右耳片，称定质量，计算左、右耳片质量差为肿胀度或抑制率（%）。

2.2.2 参黄颈康片对大鼠足跖肿胀的影响 取健康雄性大鼠60只，按2.1项进行分组。每日灌胃给药1次，体积0.5 mL，连续给药3 d，空白对照组灌胃等体积的生理盐水。末次给药1 h后，各组试验动物（除空白对照组）右踝关节皮下注射10%鸡蛋清0.1 mL，致炎，分别用软皮尺测量踝关节周长，以给药前、致炎后1 h、2 h、3 h踝关节周长差值作为肿胀度。

2.2.3 参黄颈康片对大鼠棉球肉芽肿及炎症介质的影响取雄性大鼠60只，除空白对照组实验动物外，其余50只大鼠用乙醚浅麻醉，无菌条件下，下腹正中切口，各鼠右侧腹股沟皮下各置入一无菌棉球（30 mg）。术后随机按2.1项进行分组。于手术当天开始灌胃，连续7 d，灌胃体积0.5 mL，肉芽肿模型组给等体积生理盐水，第8天处死动物，解剖并剥离棉球，60℃烘烤12 h称定质量，计算肉芽质量（肉芽质量=带肉芽组织的棉球质量－棉球原始质量）。实验结束后，上述实验动物，颈动脉取血2 mL，3 000 r/min，离心5 min，取上清，用ELISA法测定血清白介素-1（IL-1β）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）。

2.2.4 用热板法观察参黄颈康片的镇痛作用 采用Woolf氏热板法。于电热恒温水浴箱温度保持在（55±0.5）℃的范围。将筛选后的小白鼠50只称定质量，按2.1项分组，测每只小鼠的痛阈值一次，作为该鼠给药前的痛阈值。各组试验小鼠给药前及给药后30 min各测定小白鼠痛阈值一次。痛阈提高百分率=（用药后痛阈值－用药前痛阈值）/用药前痛阈值%

2.2.5 用扭体法观察抗颈椎病药物参黄颈康片的镇痛作用取50只小鼠称定质量后，按上述分组情况，灌胃给予不同受试药物30 min后，腹腔注射0.6%的醋酸0.2 mL/只，记录15 min内各组“扭体”反应阳性的动物数，及15 min内出现“扭体反应”的次数。

3 结果

3.1 参黄颈康片抗炎、消肿作用结果 实验结果见表1，2。表明应用不同剂量参黄颈康片，能明显降低小耳廓肿胀度、减轻大鼠足跖肿胀，降低大鼠棉球肉芽肿质量，与模型组相比具有显著性差异（P＜0.05），提示参黄颈康片有一定抗炎、消肿作用。

不同剂量参黄颈康片受试药物组与空白对照组相比，试验动物15 min内出现扭体反射的次数明显减小，具有显著性差异（P＜0.05）。另外，参黄颈康片能明显提高小鼠痛阈值，结果表明，参黄颈康片对化学法及物理法所致的疼痛有较明显的镇痛作用（见表1）。

表1 小鼠耳廓肿胀实验结果（x ± s，n=10）

表2 大鼠足跖肿胀实验结果（x ± s，n=10）

3.2 参黄颈康片对炎症介质影响实验结果 见表3。大鼠肉芽肿模型组实验动物血清中IL-1β及TNF-α明显升高，而应用不同剂量参黄颈康片，上述实验结果显著下降，与模型组相比，具有显著性差异（P＜0.05）。上述实验结果提示，参黄颈康片能明显降低血清中炎症介质IL-1β及TNF-α的水平。

表3 参黄颈康片对炎症介质影响实验结果（x ± s，n=10）

与足跖肿胀模型组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

4 讨论

颈椎病时，大量促进炎症介质释放的细胞因子表达升高，保护性细胞因子表达降低，炎症介质大量释放，凋亡相关蛋白表达异常，导致椎间盘不断退变，进而导致颈椎病的病程发展［6］。本实验受试药品——参黄颈康片是中药复方制剂，临床拟用于治疗颈椎病。其中，丹参、黄芪能有效地改善微循环，纠正椎基底动脉供血不足，抗脂质氧化等作用；白术、姜黄具有抑菌、抗炎、镇痛、抑制血小板聚集及血栓形成、改善血液流变学、增加脑血流量作用；牡蛎有增强免疫力等多种功效。这些药物对于颈椎病的治疗均有较好的疗效［7-9］。

本实验结果显示，参黄颈康片对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀、大鼠足肿胀及大鼠棉球肉芽肿3种急、慢性试验性炎症均有非常显著的抑制作用。另外，实验结果也表明，参黄颈康片可显著减少醋酸所致小鼠扭体次数、增高痛阈值，有非常显著的抗炎、消肿、镇痛作用。可使颈椎病人的疼痛症状缓解，从而使紧张或痉挛的肌肉松弛，以减轻肌肉对局部病灶处的牵拉，有利于局部损伤病灶的修复［10-12］。

另外，实验中发现，应用不同剂量参黄颈康片能明显降低炎症介质IL-1β及TNF-α。提示参黄颈康片可能通过减少炎症介质等产生，在颈椎病中发挥治疗及保护作用。

综上所述，参黄颈康片主要通过其抗炎、镇痛、活血化瘀作用，来改善颈椎病人的多种症状，实验结果与该药消肿止痛、活血通络的功能亦相吻合，为该药在临床上治疗颈椎病症提供了一定的理论依据。

［1］丁文清，江怡珊，乔 薇.颈痛灵胶囊对化学、物理方法致痛小鼠的镇痛作用实验观察［J］.上海中医药杂志，2003，37（12）：37-38.

［2］解砚英，牟艳玲，朱 燕，等.颈舒胶囊抗炎镇痛作用的实验研究［J］.中国新药杂志，2005，14（10）：1169-1172.

［3］曾万玲，隋艳华，董学新，等.颈椎温通胶囊对颈神经根炎大鼠体感诱发电位、行为学及病理学影响的研究［J］.中成药，2009，31（12）：1820-1821.

［4］赵传喜，吴 淮，刘 欣，等.丹参川芎嗪注射液治疗椎动脉型颈椎病的临床研究［J］.河南中医学院学报，2009，24（7）：48-49.

［5］张爱平，许书亮，陈弘修，等.颈痛宁主要药效学试验研究［J］.福建中医学院学报，2001，11（3）：21-22.

［6］刘新宇，刘春娜，武红梅，等.参黄颈康片对颈椎病的防治作用及机制研究［J］.中成药，2010，32（4）：554-557.

［7］周红海，韦 坚，陈耀宇.益气化瘀补肾法对颈椎病模型动物椎间盘炎症介质的影响［J］.广西中医学院学报，2003，6（1）：6-8.

［8］吴茂文.中药治疗颈椎病的临床概况［J］.天津药学，2002，14（6）：22-23.

［9］邵文全.加味瓜蒌桂枝汤治疗颈椎病实验观察［J］.时珍国医国药，2007，18（6）：1347-1348.

［10］陈宏贤，赵新梅.李俊岐.灯盏细辛注射液治疗椎动脉型颈椎病29例［J］.广东医学，2008，29（2）：325-326.

［11］邹燕燕.颈痛汤合β-七叶皂甙钠治疗神经根型颈椎病40例疗效观察［J］.河北中医，2009，31（8）：1181-1182.

［12］李 宁，谢兴文.脊髓型颈椎病动物模型及其功能测定研究进展［J］.中国中医骨伤科杂志，2007，15（2）：71-72.

R285.5

B

1001-1528（2011）07-1223-03

2010-10-16

辽宁省教育厅创新团队项目（LT2010065）；辽宁省自然科学基金项目（20102139）

刘新宇（1976—），男，主治医师，硕士学位，研究方向：药理学及新药开发。Tel：（0416）4197208

*通信作者：刘春娜（1977—），女，副教授，博士学位，主要从事中药药理工作。E-mail：springnana@tom.com