银杏叶提取物对肺纤维化大鼠模型血清PDGF及TGF-β1的影响

丁明桥，许朝霞，陈 瑞，王 鹏

(1.武汉市第五医院，湖北 武汉 430050；2.上海中医药大学基础医学院，上海 201203；3.华中科技大学附属协和医院 中医科，湖北 武汉 430000；4.湖北中医药大学，湖北 武汉 430060)

在肺纤维化的发病机制研究中，各种细胞因子的作用越来越为学者所重视，已提出细胞因子网络的概念。已有研究[1]表明,多种生长因子参与肺炎症反应及肺纤维化过程,其中转化生长因子β1(TGF-β1)和血小板源性生长因子(PDGF)等对调控肺成纤维细胞分裂、增殖及胶原蛋白的合成与降解起十分重要的作用。TGF-β1是使细胞外基质积聚最关键的细胞因子，是肺纤维化治疗的靶点，PDGF对成纤维细胞具有趋化和增殖作用，促进成纤维细胞介导的组织基质的收缩作用[2],在肺间质纤维化病变中起着重要作用。本实验以PDGF和TGF-β1为研究指标，观察银杏叶提取物对肺纤维化大鼠模型血清PDGF及TGF-β1含量的影响，探讨其对肺纤维化发生和病理进程的影响。

1 材料与方法

1.1 实验药物 博莱霉素(商品名：平阳霉素，Bleomycin A5，BLMA5。批号：040601，天津太河制药有限公司生产)，每支8 mg，用1 mL生理盐水配置备用。醋酸强的松片(广东华南制药厂生产，批号041201)，在使用时用蒸馏水溶解，配成0.32 g/L混悬液备用。银杏叶提取物选用依康宁片(扬子江集团有限公司生产，批号：05012801，每粒含总黄酮醇苷19.2 mg，萜类内酯4.8 mg，剂量按照总黄酮醇苷与萜类内酯总剂量计算)，用蒸馏水溶解制成0.675 g/L混悬液备用。

1.2 试剂与仪器 Rat PDGF ELISA试剂盒(批号2004091025)购自Takata公司；TGF-β1 ELISA试剂盒(批号：0507227)购自上海森雄科技实业有限公司；Bio-Tek ELX8000自动酶标仪、离心机、可调式恒温水浴箱。

1.3 实验动物与分组 96只健康清洁级Wistar大鼠，雌雄不限，体质量(180±20)g，于实验前1周1次性购自华中科技大学同济医学院实验动物中心，合格证号TJLA[2005]011，随机分为正常对照组(A组)、模型组(B组)、强的松组(C组)和银杏叶提取物干预组(D组)，每组各24只。

1.4 建立模型 按Szapiel[3]法建立模型。10%的水合氯醛麻醉大鼠，将其仰卧固定于大鼠实验台上，消毒后切开颈部皮肤，逐层分离，充分暴露气管，B、C、D组用1 mL注射器缓慢注入稀释的博莱霉素注射液，剂量为5 mg /(kg·bw)，A组注入等容生理盐水，注药后将动物直立并旋转，使药物均匀散布于双肺内，之后缝合皮肤，创口消毒，置动物于实验室内保温喂养，待其自行苏醒，实验期间动物自由饮水和进食。

1.5 给药方法 于造模第2天起A、B组用生理盐水10 mL/(kg·bw)灌胃，C组用醋酸强的松混悬液0.56 mg/kg灌胃，D组用银杏叶提取物，浓度0.675 g/L，剂量10 mL/(kg·bw)灌胃。均1次/d。

1.6 标本采集及处理 各组动物分别于第7、14、28天随机选取8只，用10%的水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，固定，暴露腹腔，用普通注射器于腹主动脉取血4 mL，静置1h后，离心机离心15 min，分离血清，供实验检测。

1.7 检测方法 PDGF采用ELISA法进行检测，将样本血清稀释50 000倍，严格按照试剂盒说明书操作步骤进行反应，终止反应后用酶标仪在450 nm处测吸光值(OD)，结果与标准曲线比较确定PDGF含量。TGF-β1采用双抗夹心ABC-ELISA法检测，根据试剂盒提供方法进行反应，终止反应后用酶标仪在492 nm处测吸光值(OD)，结果与标准曲线比较确定TGF-β1含量。

2 结果

2.1 各实验组大鼠血清在不同时间点的PDGF含量 见表1。

表1 各实验组大鼠血清在不同时间点的PDGF含量

2.2 各实验组大鼠血清在不同时间点的TGF-β1含量 见表2。

表2 各实验组大鼠血清在不同时间点TGF-β1含量

3 讨论

3.1 PDGF、TGF-β1与肺间质纤维化 PDGF[1-6]和TGF-β1[7-8]是参与肺纤维化的细胞因子网络中比较重要的两个因子，二者之间的关系非常密切。吴浩等[9]的研究表明，PDGF的主要来源是巨噬细胞，在肺纤维化的早、中期发挥重要作用，而TGF-β1主要由间质细胞自身产生，在肺纤维化的中、后期发挥重要作用，促细胞外基质合成，使肺纤维化进行性进展。张桂才等[10]的研究也表明，通过抑制TGF-β1mRNA的表达，能够减少胶原沉积，使纤维化病变减轻。

3.2 银杏叶提取物对肺纤维化大鼠模型血清PDGF及TGF-β1的影响 本研究观察到，在生理状态下，大鼠血清PDGF和TGF-β1的表达在各时间点变动不大，博莱霉素造模后，第7天时，PDGF含量达到峰值，第14、28天时虽有所降低，但仍处于高水平；第7天时TGF-β1的表达开始显著升高，第14、28天时仍有所上升，提示PDGF和TGF-β1在博莱霉素致肺纤维化过程中具有重要作用，通过干预来抑制PDGF和TGF-β1的表达可以预防和减轻肺纤维化的程度，这可能是防治肺纤维化的途径之一。

实验结果表明，银杏叶提取物在各时间点上均能有效降低血清中PDGF和TGF-β1的水平，对博莱霉素所致肺损伤和纤维化具有防治作用，提示降低参与肺纤维化的PDGF和TGF-β1等细胞因子水平可能是银杏叶提取物防治肺纤维化的机制之一。

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[10]张桂才，周贤梅，仇中叶.虎芪活血煎对肺纤维化大鼠肺组织HYP含量及TGFβ1mRNA表达的影响[J].吉林中医药，2007,27(11)：49-51.