高效液相色谱法测定天麻胶囊中天麻素的含量

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(1.解放军第二○八医院461临床部，吉林 长春 130051，2.长春中医药大学药学院，吉林 长春 130117)

天麻胶囊由天麻、羌活、独活、盐杜仲、牛膝、粉萆 、附子(制)、当归、生地黄、玄参等10味组成。具有祛风除湿，舒筋通络，活血止痛之功效。用于肢体拘挛，手足麻木，腰腿酸痛等症。天麻为方中主要药味，对其质量控制十分重要，因此建立了以高效液相色谱法测定天麻素含量的方法，为该制剂的质量标准制定提供依据。

1 仪器与试药

仪器：Agilent 1200 series高效液相色谱仪，天麻素对照品，由中国药品生物制品检定所提供(批号:0807-200205，供含量测定用)。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex Luna C18(4.6×250 mm,5 μm)；流动相为乙腈-水(2∶98)；检测波长220 nm；柱温35 ℃；流速1 mL/min。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取80 ℃减压干燥1 h的天麻素对照品，加流动相制成每1 mL含20 μg的溶液，即得。

2.3 阴性对照试验 为进一步考察试验的合理性，取不含淫羊藿的阴性对照品，依法进行测定。结果阴性对照品色谱在与天麻素峰相应的保留时间附近无干扰峰检出，从而证明本方法是合理可行的。

2.4 供试品溶液的制备 取本品20粒内容物，研细，取2 g，精密称定，精密加甲醇50 mL，称定重量，加热回流1 h,取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，置水浴上蒸干，残渣加流动相溶解，并转移至25 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.5 标准曲线制备 分别精密吸取天麻素对照品溶液(0.040 8 mg/mL)1、3、5、7、9 μL测定，以对照品进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y=1 862.21X-4.830 4(r=0.999 9)，结果表明天麻素在0.04～0.36 μg范围内,进样量与峰面积呈线性关系，符合外标法定量测定的要求。

2.6 精密度试验 精密吸取供试品溶液10 μL,注入液相色谱仪，重复6次，测定其色谱峰面积值，结果其天麻素峰面积积分值的RSD为0.64%，表明仪器进样精密度良好。

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别与0、3、6、24、48 h按正文色谱条件测定,结果，供试品溶液在48 h内基本稳定。RSD=0.5%。

2.8 重现性试验 取同一供试品(吉林本草堂药业 批号：2008010)依正文方法独立测定6次，结果表明本法重复性良好，见表1。

表1 重复性试验结果

2.9 回收率试验 采取半量加样回收法，精密量取天麻素对照品的甲醇溶液(12.61 mg/25 mL)2 mL,共6分，分别置具塞锥形瓶中，挥干溶剂，再分别精密加入已知含量的供试品(吉林本草堂药业提供，批号:20080101，含天麻素1.121 mg/g)1 g，依法测定回收率，结果测得天麻素的平均回收率为100.33%,RSD=1.59%。见表2。

表2 回收率试验结果

2.10 样品测定 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定,结果见表3。

表3 10批样品中天麻素含量测定结果

由于原标准中无天麻素的含量测定项，从以上测定结果看，各厂家产品的天麻素的含量差异较大。根据《中国药典》2005年版一部天麻项下天麻素的含量测定限度规定，和该处方中天麻的量，理论上得出本品每粒含天麻素最低不得少于0.113 mg,考虑到生产中的损失，暂定本品每粒含天麻以天麻素(C20H22O9)计，不得少于0.10 mg。

3 小结

天麻主要含天麻素、香荚兰醛、香荚兰醇、琥珀酸、甙类、生物碱、黏液质和天麻多糖等。具有平肝息风止痉的功效；用于头痛眩晕，肢体麻木，小儿惊风，癫痫抽搐，破伤风等方面有明显的效果。参照《中国药典》[1]2010年版一部天麻项下含量测定方法，采用反相高效液相色谱法测定天麻中天麻素的含量。以天麻素作为指标性成分，控制天麻胶囊的内在质量，具有合理性，且方法易于操作，结果准确，重现性良好。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：化学工业出版社，2010:97.