硬脂酸透明法对免疫组化制片的影响与对策

顾文贤

(南京医科大学附属常州第二人民医院病理科,江苏常州,213003)

目前,在常规石蜡切片工作中,普遍采用二甲苯作为透明剂。但二甲苯属有毒物质,其毒性主要是对中枢神经和植物神经的麻醉及粘膜的刺激作用[1]。使用硬脂酸做透明剂,无毒无味,不污染工作环境。国内有报道用其来做包埋剂[2]。硬脂酸对组织有软化作用,对质地较硬、较韧的组织更容易切片,不会出现二甲苯所致的组织收缩,变脆情况[3]。有不逊色于二甲苯的组织处理效果[4]。但是,作者在应用硬脂酸透明的工作中发现使用硬脂酸较二甲苯容易脱片,尤其在免疫组化工作中,虽然不影响免疫组化的结果[5],但有较高的掉片率,给免疫组化制片带来了一定的困难。针对这一问题,作者进行了技术实验。其结果如下。

1 材料与方法

本实验标本均为本科免疫组化蜡块。包括胃癌,肠癌,甲状腺组织,子宫内膜癌,乳腺癌,前列腺等等。实验分组:对照组,质量控制前免疫组化制片,35例,427张切片;实验组,质量控制后免疫组化制片,37例,324张切片。

对照组:常规组织固定取材后脱水,硬脂酸石蜡混合液3:2 500 mL透明8 h,免疫组化石蜡切片3μm,45℃水温裱片,70℃烤片,烤片60 min。二甲苯脱蜡,梯度酒精清洗,入蒸馏水,入PBS液缓冲液。视一抗要求抗原修复,煮沸15 min,自然冷却。一抗试剂共有74种。冰箱4℃过夜。采用Envision两步法免疫组化标记。苏木精淡染细胞核,常规脱水透明封固。实验组 与对照组相比,更换了新的浸蜡的纯石蜡1和2两缸。

结果:对照组质量控制前的免疫组化切片掉片严重。切片完整率常规法为88.33%,抗原修复法为72.33%。实验组,常规法为99.2%,抗原修复法为92.12%。免疫组化切片完整率在浸蜡石蜡质量控制前后有明显差异(P<0.05)。

2 讨 论

作者观察发现,免疫组化标记的切片完整率与硬脂酸透明后的浸蜡石蜡质量(浓度和纯度)有密切相关性。即蜡块中硬脂酸含量越高组织脱片率也越大。硬脂酸在硬脂酸透明蜡液中的含量呈梯度递减状况,与脱水透明标本数量及应用次数有关。同样在浸蜡石蜡缸1中随着浸蜡标本数量和应用次数增加,此缸中硬脂酸的含量呈梯度递增状况。在浸蜡石蜡缸2中,硬脂酸含量也呈梯度递增状况。硬脂酸粘附力差,如果最后一缸浸蜡蜡液中硬脂酸含量过高,极易造成制片过程中的脱片现象。在免疫组化标记制片过程中,这是硬脂酸透明最显著的缺陷。所以有人提议在用硬脂酸透明时,采用低浓度硬脂酸[6],可使脱片率明显下降。但浓度过低会导致透明不彻底,切片困难[7]。

作者采用硬脂酸石蜡混合液透明时,硬脂酸:石蜡为3:2的浓度,针对高浓度的硬脂酸导致脱片问题,采取了保证浸蜡的石蜡缸1和2的石蜡纯度方法,从按标本量定期更换到按质量更换,切片完整率得到显著的提高,具有明显的使用效益。常规染色鲜艳,免疫组化切片标记效果好背景清晰,阳性表达好,染色鲜艳。并且硬脂酸透明对抗原的表达无特别影响[8],这与二甲苯处理的组织是一致的。

[1] 刘镜愉.现代职业病诊疗手册[M].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1997:142.

[2] 王伯云.病理学技术[M].北京:人民卫生出版社,2000:78.

[3] 龚志锦.病理组织制片和染色技术[M].上海:上海科学技术出版社,1994:18.

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[5] 胡小安,卢 静,张 润.改良硬脂酸石蜡切片的免疫组化染色效果观察[J].诊断病理学杂志,2004,12:439.

[6] 古 伟,张国宾.硬脂酸替代二甲苯后组织脱片的预防[J].诊断病理学杂志,1995,2:240.

[7] 吴叶菊,秦 梅.硬脂酸浸蜡方法的应用[J].实用医技杂志,2006,13(7):1105.

[8] 汤金梁,叶明福.硬脂酸硬蜡混合液及硬蜡二步浸蜡法在石蜡切片中的应用[J].第三军医大学学报,2003,25(19):1727.