六神栓对小鼠白念珠菌阴道炎治疗作用的实验研究

邢艳芳,将红心,周晓霞,廖建春,朱网娣,乔 明,李 蓉,庞树华,苏佩清

(1.扬州大学临床医学院,江苏扬州,225001;2.扬州市中医院,江苏扬州,225002)

阴道念珠菌病(VVC),是由白念珠菌引起的一种条件性黏膜感染性疾病,是妇科常见病。患者中复发率5%～10%。NwokoLo等[1]报道,估计有75%的妇女在其一生中经历过至少1次念珠菌阴道炎发作。其病原菌以白念珠菌(Candida albicans)居多(90.4%)[2],但也可能是其它菌种,如:热带念珠菌(C.tropicalis)、光滑念珠菌[C.(tarulopsis)glabr-ata]、克柔念珠菌(C.krusei)、近平滑念珠菌(C.parapsiLosis)、假热带念珠菌(C.pseudotropicalis)等。一般来说,白念珠菌及热带念珠菌致病力较强。近几年来,随着抗生素及皮质类固醇药物的普遍应用,其发病率在世界各地呈明显上升趋势,严重影响妇女的工作及性生活,给妇女造成精神上的痛苦。六神栓是在传统六神丸(雷氏六神丸)原方配比的前提下,进行剂型改革,自制的阴道栓,临床报道可用于霉菌性阴道炎的治疗[3]。本实验对其进行了动物在体的药效学研究,结果表明六神栓对小鼠白念珠菌性阴道炎有明显的治疗作用。

1 材料与方法

1.1 药品

阴道用鸭嘴型六神栓,自制;保妇康栓,1.74 g/枚,由海南碧凯药业有限公司生产,批号070131。

1.2 白色念珠菌

白念珠菌临床分离菌株(科玛嘉实验鉴定),由苏北人民医院检验科提供。

1.3 动物

清洁级 ICR小鼠 6～8周龄,雌性,体重 22～25 g:均购自扬州大学医学院动物实验中心。室温,普通级颗粒饲料喂养,分笼饲养,实验时以随机数字排列表法分组。

1.4 方法

六神栓的制备:取明胶加适量纯化水,使浸润溶胀,放入适温的水浴中加热搅拌蒸去多余的水分,再加甘油搅拌均匀,另准确称取六神药粉适量,加适量甘油搅拌使混合均匀,合并入基质中,混匀后置恒温箱中,恒温脱泡2 h,取出后灌注于事先涂有液状石蜡的阴道栓模具中[4],待凝固好,脱模,包装,即得 。

实验造模及给药:首先建立小鼠白念珠菌阴道炎模型,再分组给药。清洁级6周龄雌性ICR小鼠 45只,于接种前6d开始隔日皮下注射2 mg/mL苯甲酸雌二醇油剂0.1 mL,使小鼠处于假发情状态,直至实验结束为止[5]。在接种日,将密度为2.5×106cfu/mL的菌悬液20 μ L(即白念珠菌孢子接种量为5×104cfu),灌注入所有小鼠阴道内,于接种后第四天作阴道图片,结果白色念珠菌镜检为阳性,证明造模成功。将上述小鼠随机分为5组,即模型组,低剂量六神栓组(11.3 mg/只),中剂量六神栓组(22.5 mg/只)高剂量六神栓组(45 mg/只),保妇康栓组(8.8 mg/只)。模型组每天阴道灌注20 μ L生理盐水,其余各组每天阴道给药1次,连续7 d。分别于治疗 0、5、7及 12 d后用50 μ L PBS液灌洗阴道 8～ 10次 ,收集灌洗液于清洁无菌管中。

1.5 指标测定

阴道灌洗液摇匀后,进行10倍系列稀释。照此方法稀释成10-2及10-3的稀释液。用20 μ L微量加样器滴种于改良沙堡培养基平皿上,自高稀释度滴种,每个稀释度滴3滴。37℃培养48 h,计数菌落形成单位(CFU)。

计数培养基平面上生长的菌落数(CFU),选择菌落中适中的稀释度,计算出同一稀释度平均菌落数X。CFU/mL标本=X×1/0.020×稀释度×1/标本体积

2 结 果

各组小鼠在试验过程中毛色光滑,进食正常,体重均有所增加。

2.1 阴道局部病变肉眼观察

小鼠于接种白色念珠菌后,阴道充血,水肿,分泌物增加,严重者外阴红肿,有白色凝乳状阴道分泌物阻塞阴道口。给药后,用药各组阴道充血,水肿等病变比模型组明显好转。

2.2 菌落计数结果

用药7 d后,A组、B组、C组、D组及 E组小鼠阴道灌洗液菌落计数分别为(6.13±0.25)、(5.96±0.13)、(5.55±0.24)、(5.17 ±0.0 8)、(5.04±0.10)。不同剂量的六神栓均能降低阴道灌洗液菌落计数均数,与生理盐水组比较有显著性差异(P<0.05)。随着六神栓治疗剂量的增高,阴道灌洗液菌落计数逐渐下降,且差异有显著性(P<0.05)。说明六神栓对小鼠白念珠菌阴道炎具有一定的治疗作用。

3 讨 论

雷氏六神丸是治疗五官科炎性疾患的特效药,具有清热解毒、利咽散肿等作用,在临床上广泛应用于烂喉丹痧,喉风乳蛾,咽喉肿痛,咽下困难,痈疽疮疖等症。该方以牛黄、麝香为主药,清热解毒,消肿散结,疗热毒郁结、咽喉肿痛腐烂及痈疮疔毒;辅以冰片加强清热、化腐之功,配以蟾酥加强解毒消肿之效,并有极强的止痛作用;佐以珍珠解毒化腐生肌,雄黄解毒。诸药相合,共奏解毒、消炎、止痒之功效。

霉菌性阴道炎是由白色念珠菌所致,属祖国医学“阴痒”、“带下”范畴。证属湿热型,治宜燥湿解毒、化瘀消肿、祛腐生肌。鉴于六神丸具有清热解毒、消肿散结、化腐生肌等作用,我们将其剂型进行改革,扩大临床治疗范围,制成鸭嘴型阴道栓剂(院内制剂),用于治疗妇科炎症疾病,前期的临床研究证实,六神栓对各型妇科炎症,均有较好的治疗效果。

如上所述,本课题组前期有关六神栓的研究,主要是临床疗效观察的研究报道,按照中药新药开发的要求,在临床观察疗效肯定的前提下,必须要进一步做在体动物实验,按照国家中药新药的审批标准,进一步确证六神栓的各项指标,本课题进行了六神栓对小鼠白念珠菌阴道炎治疗作用的实验研究,结果表明,与生理盐水组比较,各个剂量六神栓组的阴道灌洗液载菌量显著减少(P<0.05),表明六神栓局部外用对小鼠白念珠菌阴道炎具有一定的治疗作用。同时本实验发现六神栓高剂量组比低剂量组更加显著的减少了阴道灌洗液载菌量,说明低剂量局部外用治疗小鼠白念珠菌阴道炎可能呈剂量相关性,高剂量的六神栓治疗效更好。此外,实验结果发现与各个剂量的六神栓比较,高剂量六神栓与保妇康栓的杀菌量无显著性差异。这说明六神栓对白念珠菌阴道炎具有明显的治疗作用,与临床报道相一致。

[1]NwokoLo N C,Boag F C.ChronicvaginaLcandidiasis[J].DrugsAging,2000,16(5):335.

[2]Garcia Heredia M,Garcia S D,Copolillo E F,et al.Prevalenceo fvagina lcandidia sisinpregnwomen:Identification of yeasts and susceptibility toantifungaL agents[J].Rev Argent Microbiol,2006,38(1):9.

[3]苏佩清,康 连,宋 雪.六神栓治疗霉菌性阴道炎临床观察[J].山东中医杂志,2001,21(7):401.

[4]黄玉杯,叶正君,朱寒根.复方蛇床子栓的制备与试用[J].中成药,1992,14(5):7.

[5]赵敬军,沈永年,陈 伟,等.白念珠菌性阴道炎动物模型的构建[J].中华皮肤科杂志,2002,35(5):346.