营养造血汤剂对再生障碍性贫血小鼠骨髓造血功能的影响*

于敬达 徐能义 马淑一 董 弘 李丽娜

（1.包头医学院医学技术学院，内蒙古包头014060；2.内蒙古妇幼保健医院遗传科，内蒙古包头014060）

再生障碍性贫血（再障）是因骨髓造血组织显著减少，引起造血功能衰竭而发生的一类贫血。针对再障的发生与骨髓造血干细胞损伤、造血微环境缺陷、免疫性造血抑制等因素有关[1]，结合医学营养学、中医学的相关理论，探讨营养造血汤剂对再生障碍性贫血的疗效。

1 材料与方法

1.1 实验动物、营养造血汤剂和主要试剂

近交系BALB/c小鼠90只，8～12周龄，雌雄各半，由大连医科大学提供。营养造血汤剂由核苷酸、精氨酸、甘氨酸、维生素C、复合维生素B、当归、白术、甘草、女贞子等组成，按原方比例配方，经水煎、超声、浓缩，配制成口服液，分装备用。促红细胞生成素（EPO）试剂盒，美国R&D systems公司；METHOCULTTM GF M3434培养基，加拿大Stem cell technologies公司；TUNEL试剂盒、Fas与Caspase-3检测试剂盒，福州迈新生物技术公司。

1.2 实验分组及流程

BALB/c小鼠90只，根据动物药理学的药品剂量（小鼠给药剂量=成人给药剂量×388/小鼠体重）和综合实验的设计分析，采用完全随机数字表法均分为：①正常对照组；②再障模型组；③营养造血汤剂治疗组[以19.76g/（kg·d）对小鼠灌胃]。苯、X射线、环磷酰胺三联应用的方法建立再障小鼠模型[1]。从第8天开始，对治疗组小鼠进行灌胃，每天1次，直至第60天，颈椎脱臼处死小鼠，采样进行检测。

表1 对照组与再障模型组小鼠外周血的相关指标数值（±s，n＝30）

表1 对照组与再障模型组小鼠外周血的相关指标数值（±s，n＝30）

注：与对照组比较具有统计学意义（*P＜0.05）；与模型组比较具有统计学意义（**P＜0.05）

EPO（pg/mL）46.64±10.06 879.53±90.92* 258.96±59.05**组别对照组模型组治疗组Hb（g/L）164.32±10.74 80.11±13.65* 150.1±14.68** RBC（×1012/L）8.99±1.15 3.35±0.97* 6.53±1.25** WBC（×109/L）8.69±1.68 2.09±1.52* 4.81±0.69** PLT（×109/L）902.36±150.35 470.8±112.09* 807.±100.03**

表2 对照组与模型组小鼠骨髓的相关指标数值（±s，n＝30）

表2 对照组与模型组小鼠骨髓的相关指标数值（±s，n＝30）

注：与对照组比较具有统计学意义（*P＜0.05）；与模型组比较具有统计学意义（**P＜0.05）

Caspase-3阳性率(%) 0.88±0.51** 6.94±0.81 4.39±0.40**组别对照组模型组治疗组BMNC（×106/根股骨）8.50±2.01 1.25±0.54* 6.87±0.58**集落数（个/2×106 BMNC）28.00±4.72 5.60±2.13* 23.3±6.2**凋亡率（%）5.23±0.28** 10.03±0.46 7.01±0.24** Fas阳性率(%) 14.90±1.78** 26.11±1.60 20.04±0.88**

1.3 指标检测

检测小鼠血红蛋白含量、红细胞、白细胞及血小板数；测定血清EPO含量。游离股骨，制备骨髓涂片、骨髓细胞悬液，继而计数单核细胞数，调整细胞浓度至 1.5×105/mL，置于METHOCULTTM GF M3434培养基中，37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养12d后进行集落计数[2]。5%硝酸溶液浸泡股骨7～12h脱钙后,常规病理制片，观察骨髓增生程度；TUNEL法免疫组化染色程序按说明书进行。细胞核或胞浆出现棕黄色颗粒为阳性细胞，随机读取100个细胞，计算阳性细胞率。

1.4 统计学处理

2 结果

详见表1～2。

3 讨论

研究表明，营养造血汤剂对改善再障小鼠骨髓抑制状态有显著促进作用，可进一步使造血干/祖细胞增殖、分化趋于正常，有利于造血支持成分的增生。其中甘氨酸为血红素的基本原料，利于造血干细胞增殖。维生素C可防止脂质过氧化，稳定正常组织中DNA分子，刺激造血祖细胞，促进集落形成[3]。B族维生素可提高细胞内微体的抗氧化防御能力，以改善骨髓造血微环境，有利于基质细胞生长。核苷酸碱基的氮氧原子能够捕获氧化过程中形成的自由基，减少由脂质过氧化引起的细胞膜及各种DNA的损伤，且具有维持免疫系统的正常功能，增强细胞免疫能力。精氨酸与赖氨酸有利于造血干细胞的基因复制，有利于EPO的分泌，刺激骨髓造血。

甘草酸是甘草的主要成分，可阻止Fas抗体介导的造血干细胞凋亡，有助于骨髓造血功能恢复。当归对造血细胞增殖、分化有显著刺激作用[4]，能降低再障小鼠骨髓细胞Fas抗原的表达，减少细胞凋亡，促进骨髓造血细胞增生。女贞子可提升外周白细胞数量，增强网状内皮系统吞噬作用，增强细胞免疫和体液免疫的作用。营养造血汤剂可减少骨髓造血细胞凋亡的发生，改善骨髓造血功能，明显改善外周血象三系减低的状况，对治疗再生障碍性贫血安全有效，对临床应用营养造血汤剂治疗再障提供了试验依据。

[1]于敬达,李得春.苯、X射线、环磷酰胺联合复制小鼠再障模型实验研究[J].包头医学院学报，2010，26（6）：25-27.

[2]Miller CL，Rebel VI，Lemieux ME，et al.Studies of W mutant mice provide evidence for alternate mechanisms capable of activating hematopoietic stem cells[J].Exp Hematol，1996，24（2）：185-194.

[3]Snyder R.Recent developments in the understanding of benzene toxicity and leukemogenesis[J].Drug Chem Toxicol，2000，23（1）：13-25.

[4]刘玉兰，孟庆勇.当归注射液对辐射损伤小鼠免疫功能的作用[J].广东医学院学报，2002，20（5）：334-335.