符晨星,贺建华*,侯德兴
(1.湖南农业大学 动物科学技术学院, 湖南 长沙410128;2.鹿儿岛大学 农学部,日本 鹿儿岛 890- 8580)
生物体内自由基的积累会导致一些疾病的发生[1-4]。目前国内外大多使用丁基羟基茴香醚(BHA)、没食子酸丙酯(PG)和2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚 (BHT)等化学合成的抗氧化剂,有研究[5]表明,这些合成抗氧化剂很有可能损害人体的酶系统,因此,对安全、无毒天然抗氧化剂的研究、开发日益受到重视。
荷叶、枳实和水皂角是分布较广、产量较高的中草药植物。荷叶具有很强的抗氧化能力,其清除自由基的主要成分是荷叶黄酮苷和槲皮素[6];枳实含有生物碱和黄酮类化合物等有效成分[7];水皂角叶中的木犀草素以及与其结构相似的多酚类物质对脂肪酶有抑制作用[8-9]。笔者对荷叶、枳实和水皂角等3种中草药植物的多酚含量进行测定,评估它们的抗氧化能力,试分析中草药植物中的多酚成分与其抗氧化能力的关系。
10∶1比例浓缩的荷叶和水皂角粗提物、粗提后含 10%辛弗林的枳实粗提物,均由湖南农业大学植物功能成分利用国家工程技术研究中心提供;DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)、没食子酸标准品为日本 NACALAI TESQUE产品;50% Folin-Ciocalteu 试剂、Trolox(6-羟基-2,5,7,8-四甲基色满-2-羧酸)标准品为美国SIGMA公司产品。
1) 样品处理。荷叶、水皂角、枳实粗提物与70%乙醇混匀,离心,取上清液,过滤,浓缩后用50%二甲基亚砜(DMSO)溶解,使样品质量浓度为300 mg/mL。
2) 多酚定量。采用Folin-Ciocalteu法[10]。分别准确在比色盘各孔中加入50% DMSO 10、8、6、4、2、0 µL,样品溶液0、2、4、6、8、10 µL,2% Na2CO3200 µL,50% Folin-Ciocalteu试剂10 µL,于595 nm波长下比色,测定吸光度。
3) DPPH自由基清除能力测定。采用分光光度计法[11]。在比色盘各孔中分别加入80%甲醇溶液10、8、6、4、2、0 µL,样品溶液0、2、4、6、8、10 µL,DPPH试剂190 µL,混匀,避光在室温下反应30 min,于490 nm波长下比色,测定吸光度。采用IC50值即反应被抑制到一半时抑制剂的浓度来衡量样品溶液清除自由基能力。IC50值越低,清除能力越强。
数据均采用Excel软件处理。
以吸光度x为横坐标,总酚质量浓度y为纵坐标建立标准曲线,曲线回归方程分别为:荷叶,y= 0.013 7x+ 0.018 9,R2= 0.990 3;枳实,y= 0.017 7x+ 0.006 3,R2= 0.998 1;水皂角,y= 0.021 1x+ 0.024 4,R2= 0.996 1。
用Folin-Ciocalteu比色法分别对荷叶、枳实和水皂角样品进行多酚定量,结果表明,枳实的多酚含量最高,为(462.5±19.28) mg/g,其次是荷叶与水皂角,含量分别为(293.8±78.57)和(270.3±28.53) mg/g。
对3种样品进行DPPH自由基清除能力测定,标准曲线回归方程分别为:荷叶,y=-0.035 6x+ 0.394 4,R2= 0.990 3;枳实,y=-0.032x+ 0.374 7,R2= 0.992 3;水皂角,y=-0.034x+ 0.381 8,R2= 0.990 3。
分别对荷叶、枳实和水皂角提取物进行清除自由基能力测定,结果表明,清除DPPH自由基能力最强的是水皂角提取物,其次是荷叶和枳实提取物,IC50值分别为(0.021±0.003)、(0.037±0.007) 和(0.061±0.010 ) mg/mL。
以上结果表明,3种中草药提取物中多酚含量最高的是枳实,水皂角最低,而清除DPPH自由基能力最强的是水皂角,最弱的则是枳实,说明3种中草药抗氧化能力的强弱与其总酚含量并不呈正相关,推测水皂角中可能含有抗氧化更强的酚类化合物或其他物质。
[1] 刘利军.生物氧化与体外化学氧化的比较[J].中国科技信息,2005(2):46.
[2] 秦卫东.天然抗氧化剂研究进展[J].中国食品添加剂,1998(4):15-19.
[3] 谷利伟,翁新楚.食用抗氧化剂研究进展[J].中国油脂,1997,22(3):37-40.
[4] 杨洋,韦小英,阮征.国内外天然食品抗氧化剂的研究进展[J].食品科学,2002(10):137-140.
[5] Ito N,Fukushima S,Tsuda H,et al.Antioxidants:Carcinogenicity and modifying activity in tumorigenesis [M].Food Toxicology:Real or Imaginary Problems.London and Philadelphia:Taylor & Francis,1985:181-189.
[6] Christian C,Frank P,John W,et al.Therapeutic opportunities for muscarinic receptors in the central Nervous System [J].J Med Chem,2000,43(23):4333-4353.
[7] 戴汉云,熊正东.化学合成枳实有效成分对羟福林和N甲基酪胺临床资料总结[J].中国药学杂志,1989(10):612-613.
[8] Shimura S,Tsuzuki W,Itoh Y,et al.Lipase inhibition inCassia mimosoidesL.var.nomameMakino[J].Nippon Nogeikagaku Kaishi,1993,67(11):1583.
[9] Shimura S,Tsuzuki W,Itoh Y,et al.Inhibition effect of tannin fraction fromCassia mimosoidesL.var.nomameMakino on lipase activity [J].Norin Suisansho Shokuhin Sogo Kenkyujo Japan Nihon Shokuhin Kogyo Gakkai,1994,41(8):561.
[10] 罗杨合,韦学丰,解庆林.可见分光光度法测定马蹄皮中总黄酮的含量[J].食品研究与开发,2009,30(6):135-138.
[11] Mellors A,Tappel A L.The inhibition of mitochondrial
peroxidation by ubiquinone and ubiquinol [J].The Jounral of Biological Chemistry,1966,241(19):4353-4356.
英文编辑:易来宾