3种单糖对大鳞副泥鳅精子活力的影响

苏应兵（长江大学动物科学学院，湖北 荆州434025）

廖咏玲（中国水产科学研究院长江水产研究所，湖北 荆州434000）

杨代勤，林 洋（长江大学动物科学学院，湖北 荆州434025）

大鳞副泥鳅 （Paramisgurnusdabryanus）属鲤形目 （Cypriniformes）鳅科 （Cobitidae）副泥鳅属（Paramisgurnus），其体型酷似泥鳅，体色多为黄色或黄褐色，鳞片较泥鳅的大。因肉质细嫩、味道鲜美、营养丰富、生长较快，目前在国内外市场广受欢迎[1]。随着养殖的发展，苗种需求量与日剧增，特别是人工繁殖的优质苗种紧缺，不能满足市场需求，为此不少学者对大鳞副泥鳅的人工繁殖进行了研究[2-8]，但至今对大鳞副泥鳅精子活力的研究报道较少。在大鳞副泥鳅的人工繁殖中还发现雄鳅的数量明显少于雌鳅，这给批量人工繁殖大鳞副泥鳅苗带来不便[2]。本研究探讨了3种单糖 （葡萄糖、半乳糖和果糖）对大鳞泥鳅精子的激活效果，以选出最佳激活剂及最适激活浓度，为规模化苗种的人工繁殖、人工授精及杂交育种提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

雄性大鳞副泥鳅来源于长江大学水产养殖基地，体长15～25cm，体重30～60g，体质健壮，腹大柔软，富有弹性，有透明感，肤色微红。

1.2 试验方法

1.2.1 试验溶液配制

各试验溶液浓度梯度设置详见表1。

表1 试验溶液浓度梯度配置

1.2.2 精子的采集

催产后杀死泥鳅，取其左侧精巢 （左精巢饱满、易捣碎，同时在等量的精液中，左精巢精子数目亦较右精巢多[9]），捣碎后用定性滤纸吸去水分和血液，用冰低温保存待用，观察试验应在20～30min内做完。

1.2.3 精子活力的测定

取干燥洁净载玻片，吸取1滴试验液于玻片上，置于10×40倍显微镜下，用洁净探针挑取少量精液均匀涂于试验液中，即刻用秒表计时。每个梯度做3次平行，取平均值作为观测数据。精子活动等级参考吴清毅等[10]的方法。本研究只观测精子快速运动时间和寿命时间。

1.3 数据处理

采用Excel 2003和SPSS 12.0软件进行统计分析。试验所得数据以平均值±标准差表示。以Duncan法进行多重比较以检验其差异显著性，显著水平为0.05。

2 结果与分析

2.1 葡萄糖溶液对大鳞副泥鳅精子活力的影响

由表2可知，葡萄糖溶液浓度从0.1%～0.8%变化时，大鳞副泥鳅精子快速运动时间呈上升趋势，在0.8%时达到最大，为62s，与其他组差异显著。浓度高于0.8%时精子快速运动时间随浓度增大而缩短。当葡萄糖浓度在3.0%时精子快速运动时间为0，若滴加不同量的蒸馏水后，一些精子被激活，出现慢速运动或原地颤动，直至死亡。精子寿命的变化趋势和精子快速运动时间基本一致，在葡萄糖溶液浓度为0.8%时达到最大，为95s，以后也随浓度增大而缩短。

2.2 半乳糖溶液对大鳞副泥鳅精子活力的影响

由表3可知，当半乳糖溶液浓度为0.1%～0.5%时，精子快速运动时间随浓度增加而上升，浓度为0.5%时大鳞副泥鳅精子快速运动时间达到最大，为70s，与其它组差异显著，大于在葡萄糖溶液中的最长快速运动时间62s。当葡萄糖浓度在3.0%时精子快速运动时间为0，若滴加不同量的蒸馏水后，一些精子被激活，出现慢速运动或原地颤动，直至死亡。精子寿命的变化趋势和精子快速运动时间基本一致，在半乳糖溶液浓度为0.5%时达到最大，为102s，以后随浓度增大而缩短。

表2 不同浓度葡萄糖溶液下大鳞副泥鳅的精子活力

表3 不同浓度半乳糖溶液下大鳞副泥鳅的精子活力

2.3 果糖溶液对大鳞副泥鳅精子活力的影响

由表4可知，果糖溶液浓度由0.1%上升到0.3%时，精子快速运动时间也由37s上升到最大，为51s。当浓度继续增加，大鳞副泥鳅精子快速运动时间表现出缓慢缩短的趋势。果糖溶液浓度为0.5%时，精子快速运动时间比0.3%浓度组有所下降，但无显著性差异。精子寿命的变化趋势和精子快速运动时间基本一致，在果糖溶液浓度为0.3%时达到最大，为88s，以后也随浓度增大而下降。当浓度在3.0%时精子活力完全被抑制，若滴加不同量的蒸馏水后，一些精子被激活，出现慢速运动或原地颤动，直至死亡。

3 讨论

精浆中的碳水化合物主要是一些单糖，如葡萄糖、果糖、半乳糖等[11]。Gardiner[12]认为，体外受精鱼类精子具有三羧酸循环代谢的能力，可以通过氧化作用利用细胞外源性碳水化合物，尤其是葡萄糖、半乳糖和果糖[13]。而且这3种单糖是精子活动存活的可选择和次级的能源[14]。已有研究发现适宜浓度的葡萄糖可以明显地延长虹鳟 （Oncorhynchusmykiss）[12]、 白斑狗鱼 （Esoxlucius）[15]、丁鱼岁 （Tincatinca）[16]、乌原鲤 （Procyprismterus）[10]、 鲤鱼（Cyprinuscarpio）[11]、 团头鲂（Megalobramaamblycephala）[11]、彩鲫（Cruciancarp）[17]、泥鳅 （Misgurnusanguillicaudatus）[18]精子活动时间；适宜浓度的葡萄糖和果糖可以明显地延长中华鲟 （AcipensersinensisGray）[19]、凹目白鲑 （Coregonusautumnalis）[20]精子运动时间。本研究结果显示，大鳞副泥鳅精子快速运动和寿命在3种单糖溶液中均表现出相似的变化趋势，即适宜浓度的葡萄糖、半乳糖、果糖可以使精子快速运动时间和寿命明显延长，说明单糖在维持精子活力中的作用非常显著，这与上述研究结果一致。本研究结果还表明，在这3种单糖溶液中，大鳞副泥鳅精子快速运动和寿命的时间均以在0.5%半乳糖溶液中为最长，说明大鳞副泥鳅精子对这3种单糖的吸收、利用存在差别。

表4 不同浓度果糖溶液下大鳞副泥鳅的精子活力

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