针灸对血管性痴呆大鼠行为学及组织内乙酰胆碱酯酶含量的影响*

杨春壮，李明秋，王 莹，夏珊珊，刘静男

(牡丹江医学院，黑龙江牡丹江157011)

血管性痴呆(Vascular Dementia，VD)属于中医“呆病”、“文痴”、“健忘”、“郁证”等的范畴。VD 在亚洲国家占老年期痴呆的68．5%，在我国也占据了老年期痴呆的首位。由于VD患者的生活能力下降，严重威胁着老年人的健康和生存质量。大量的临床实验表明，针灸治疗VD具有众多优点，针灸作为一种行之有效的治疗手段也逐渐被人们接受。本研究通过动物实验，探讨针刺百会、大椎、人中穴的获效机制。

1 材料与方法

1．1 材料和设备 健康Wistar大鼠80只，雌雄各一半，体重200～350 g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，实验动物合格证号:SCXK(黑)2008004，室内常温下配料饲养，自由饮食水。对比西药采用都可喜(法国施维雅药厂生产)，配成浓度为0.2 mg·mL－1的药液。ZH－200型大鼠光电刺激跳台(安徽省淮北正华生物仪器设备有限公司)，Multiskan MK3酶标仪(Thermo热电上海仪器有限公司)，大鼠乙酰胆碱酯酶(AChE)酶联免疫试剂盒(上海劲马生物科技有限公司)，电动玻璃匀浆仪(广州市海辉实验仪器有限公司)，G6805－2A型电针治疗仪(广州市穗鑫医疗器械有限公司)。

1．2 动物模型的制备方法 大鼠造模前禁食水12 h，以10%水合氯醛按400 mg/kg腹腔注射麻醉，仰卧位固定于手术台，颈部皮肤剪毛备皮，75%酒精消毒颈部皮肤后，颈正中切口，钝性分离暴露双侧颈总动脉，适时给以创口止血，穿线备用。硝普钠按3.5 mg/kg腹腔注射造成低血压。立即关闭双侧颈总动脉10 min，再通10 min，如此反复3次，撤线，缝合。放回笼中饲养。注意:尽量采用钝性分离，可减少手术对实验结果的影响。术中动作要轻柔，避免钳夹和过分牵拉迷走神经。注意试验中的无菌保护和术后的创口消毒。常规饲养、观察。于造模后第5天测试学习成绩，24 h重复测试，作为判断动物记忆成绩的指标，检验造模是否成功。

1．3 跳台实验方法 实验时，将大鼠放入跳台装置中适应3 min，然后通以40 V交流电，动物受电击后，其正常反应是跳到安全台躲避电击，记录通电后其跳到安全台上的时间，作为反应期，以反应期作为其学习成绩。

1．4 实验步骤

1．4．1 动物分组 将造模后的大鼠随机分为正常组、模型组、西药组和针灸组，每组各15只。

1．4．2 治疗方法 针灸组用28号1寸不锈钢毫针，头部“百会”、“人中”分别斜刺0.5寸，“大椎”直刺0.5 寸［1］，连接电针仪，施以连续波，频率 120 次/s，强度以大鼠安静耐受为度(约为2.0 mA)，每天针刺1次，留针20 min，连续30 d。西药组采用都可喜溶液灌胃，2 mg·kg－1·d－1。模型组在同等条件下饲养，不给予任何治疗。

1．4．3 实验方法 治疗30 d后，隔日测试学习成绩，24 h重复测试，作为判断动物记忆成绩的指标。测试完毕后大鼠禁食水过夜。次日尾静脉取血样。2 000 r·min－1离心 20 min，分离血清;取大脑海马组织，制成组织匀浆，酶免法测AchE。

2 结果

2．1 治疗后各组大鼠学习成绩

表1 治疗后各组大鼠学习成绩的比较(±s，单位:s)

注:与模型组比较，△P＜0.05;与正常组比较，▲P＜0.05。

组别 例数 反应期正常组15 4．65 ±9．71模型组 15 11．68 ±12．96▲西药组 15 6．76 ±11．65针灸组 15 5．91 ±10．21△

2．2 治疗后各组大鼠血和海马AchE含量的原始值比较

表2 治疗后各组大鼠血和海马AchE含量的原始值比较(±s，n=15)

表2 治疗后各组大鼠血和海马AchE含量的原始值比较(±s，n=15)

注:与模型组比较，△P＜0.05;与正常组比较，▲P＜0.05。

组别 血清 海马正常组0．674 ±0．204 0．830 ±0．036模型组 1．554±0．836▲ 1．024±0．130▲西药组 1．030 ±0．193 0．875 ±0．066△针灸组 0．847±0．183△ 0．847±0．011△

3 讨论

血管性痴呆(Vascular Dementia，VD)作为老年性痴呆这一家族的重要成员，已经得到了人们的高度重视，流行病学研究表明，在中国65岁以上老年人痴呆发病率为39%，VD发病占68.5%，居首位［2］。而近年来的针灸疗法，因其具有刺激经气、通经活络、醒脑开窍的独特作用，已经得到人们的认可。早期的针刺治疗，对语言障碍、肢体功能的改善较为明显，尤其是对肢体功能恢复期，针灸更能发挥其疏通经络、调和气血的作用。近5年来，针灸治疗血管性痴呆已经得到广大针灸工作者的广泛应用［3～4］，各种针灸治疗方法均取得了较好的疗效。《难经·二十八难》有云:“督脉者，……上致风府，入属于脑。”百会和大椎均属督脉穴位，百会为“三阳五会”，大椎为“诸阳之会”，为手足诸阳之会。督脉与脑密切相关，督脉通于脑。中医认为VD的病机为气血两亏、肝肾不足或气滞血瘀、痰阻脉络而导致气血不能上养脑窍，进而髓海失聪所致。故针刺百会、大椎可以统督醒脑，改善VD大鼠的学习记忆能力。从现代医学的角度讲，VD是指由于脑血管疾病和心血管病变的原因，因缺血性组织缺氧和出血性脑损伤所导致的认知丧失［5］。现阶段普遍认为，VD额叶皮质及海马胆碱能神经元的损伤可能是认知功能受损的形态学基础［6］，尤其脑海马组织是学习、记忆的高级神经活动中枢［7］，而脑内海马乙酰胆碱(acetyl－choline，Ach)的含量与记忆功能是密切相关的［8］。海马组织的Ach存在于胆碱能神经元囊泡中，Ach由胆碱在胆碱乙酰转移酶(choline acetyltrans－ferase，ChAT)的催化下合成，一旦由囊泡中释放便被胆碱脂酶(acetylcholinesterase，AchE)迅速水解为胆碱和醋酸。ChAT和AchE共同维持着Ach的动态平衡，也是维持哺乳动物正常进行学习记忆的必要条件。由于大鼠海马组织是对缺血最为敏感的脑组织之一，所以反复的短暂脑缺血就会对海马组织产生累计损伤效应［9］，从而使胆碱能神经元损坏，Ach被释放并被AchE分解，脑内Ach含量减少，大鼠的学习记忆能力随之下降。Tayebai等［10］的研究表明，抑制海马组织Ach的分解，即增加海马组织Ach的含量，有助于VD大鼠海马组织神经元递质的传递，从而改善大鼠的学习能力。本实验结果表明，针灸组大鼠海马及血内AchE活性低于模型组，说明经过针灸治疗后可以降低VD大鼠脑和血内AchE活性，改善胆碱能系统的功能，调节Ach生理代谢。所以针灸治疗可以改善认知功能，治疗VD。而从模型组大鼠海马及血内AchE活性明显高于正常组，脑缺血时胆碱能神经元蜕变，使Ach释出，组织中AchE活性升高，导致了Ach水平进一步降低，可以看出脑缺血是加重学习记忆功能的缺损、引起 VD 的重要原因之一［11～12］。

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