822例地中海贫血患者基因检测结果分析

蓝柳燕，王 君，林漫燕

(汕头大学医学院第二附属医院检验科，广东 汕头 515041)

据WHO估计，全世界约有4.5%的人携带有血红蛋白病致病基因，每年出生的各类重型地贫患儿数至少有20万。地中海贫血(以下简称地贫)是我国南方各省影响最大、发病率最高的遗传病之一，其主要发病机制是由于人体基因突变或缺失而导致α与β珠蛋白肽链合成速率的不平衡，从而引起的溶血性贫血。目前该病尚无理想的治疗方法，预防与监控是降低地贫发生率的有效方法。而预防与监控的关键是对婚前、育龄男女进行地贫筛查，从遗传角度来阻断地贫儿的繁殖。本地区属于地贫高发区域，我们对822例疑诊为α、β地中海贫血患者进行基因检测，结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

1.1 .1对象 自愿参加地贫筛查的新婚或育龄夫妇及来本院就诊怀疑为α、β地中海贫血患者共822例。

1.1 .2对照 阴性对照为正常人全血提取DNA、阳性对照为Markers，均由深圳亚能公司提供。每次实验均同时做阴、阳性对照。

1.2 检测方法

1.2 .1外周血DNA提取 抽取患者外周血2ml，EDTA抗凝，严格按试剂盒说明书进行，快速从抗凝全血中抽提DNA。

1.2 .2 检测试剂 用α、β地中海贫血试剂盒，由我院检验科基因诊断中心严格按照说明书统一操作和判断结果。

1.2 .3仪器 仪器采用杭州博日公司生产的Linegene扩增仪，并严格按照以下条件进行扩增：α-地贫：96℃ 15min 变性；98℃ 45s、64℃ 90s、72℃ 3min扩增 35个循环；72℃延伸 5min，取 2～8μl PCR 扩增产物+2μl 6×溴酚蓝上样缓冲液，混和均匀后经1.2%的琼脂糖凝胶于电压5V/cm电泳约60～90min，

图1 α-地中海贫血 (-SEA/aa正常对照 -a4.2/-SEA)

即可在凝胶成像仪(美国BIO-RAD生产)上扫描，结果见图 1；β-地中海贫血：50℃ 15min；95℃ 10min；94℃ 1min、55℃ 30s、72℃ 30s，共 35 个循环；72℃延伸5min。取全部扩增产物加缓冲液5ml于杂交仪上杂交，经显色判断结果，如图2。

图2 β-地中海贫血CD(654M/N正常对照)

2 结果

检测 447例 α-地中海贫血中异常 101例(22.6%)，其中静止型占15.9%、标准型占56.4%、血红蛋白H病占27.7%。β-地中海贫血375例中异常65 例(17.3%)，其中以 654M/N(38.5%)、CD41-42M/N(20.07%)为主，见表1、表2。另外α、β地中海贫血合并异常为4例：2例为-SEA/654M、1例为-a4.2/41-42M、1例-a3.7/17M。

表1 101例α-地中海贫血患者的基因类型分布

3 讨论

正常成人血红蛋白中的珠蛋白，是由四条肽链所组成的，组成珠蛋白的肽链有4种，即 α、β、γ、δ链，分别由其相应的基因编码，这些基因的缺失或点突变可造成各种肽链的合成障碍，致使血红蛋白的组分改变。地贫就是由于珠蛋白基因的缺失或点突变所致。通常将地中海贫血分为α、β、γ和δ等4种类型，其中以β和α-地中海贫血较为常见。α-地中海贫血分为最轻型、轻型、中间型及重型；β-地贫又分为轻、中、重型。大部分中间型和所有重型地贫病人要靠输血来维持生命，在精神上和经济上给社会和家庭带来极大的负担。α、β-地中海贫血携带者在长江以南各省人群中普遍存在，广东省发生率为8%～10%，广西和海南更高[1]。

表2 65例β-地贫患者的基因类型分布

本文收集了2005年1月至2010年12月至本院检查疑为α、β地中海贫血共822例，其中α-地中海贫血447例中异常101例(22.6%)，以标准型(-SEA/aa)为主、β-地中海贫血375例中异常65例(17.3%)，以CD654M/N为主，与胡志恒等的以CD41-42为主有差异[2]，这可能与区域性有关。α、β地中海贫血合并异常为4例占2.4%(4/166)。本文检测结果表明地贫占20.2%(166/822)，远高于全国平均水平(2.64%)，也高于广东省(8.3%)[3]，低于文献资料中杜娟的(38.8%)[4]及黄凌的(36.9%)[5]。这可能与本地区只有本实验室有开展地中海贫血检测，部分婚前检查、产检夫妇及外院怀疑地贫患者均来本院检查有关。

地贫是一种遗传性溶血性贫血，遗传后代不分男女，机会均等。夫妇双方都带有地中海贫血基因，即两人都是轻型地贫，他们的子女就会有25%的可能性是重型地中海贫血和50%的可能是轻型地中海贫血，只有25%的可能是正常；如果只有一方是轻型地中海贫血者，他们的子女有50%的可能是正常和50%的可能是轻型地贫，不会有重型地中海贫血小孩，对于一方已确诊携带有标准型(-SEA/aa)或β-地中海贫血基因的夫妇，另一方必须进行地贫的基因检测，以防止中重型地贫患儿出生。

目前对地贫的治疗尚无较好的办法，对重型地贫需大量输血联合去铁治疗是基本的治疗措施。造血干细胞移植手术是目前根治本病的唯一治疗方法。但不易找到配型合适的干细胞，移植手术价格昂贵，普通老百姓难以承受，所以做好婚育前地贫筛查对预防本病具有重要意义。由于诸多原因，使本地区的地贫筛查还未大规模展开，广大人民对于地中海贫血的危害性不够了解，婚前、产前地贫检查也只有少数主动要求检查。作为地贫高发区域，政府部门及广大医疗卫生工作者应该加大地贫宣传力度，建立地贫防治专项基金，以防止地贫患儿的出生，做好优生优育，使提高全民人口素质真正落到实处。

[1]杜传书.地中海贫血研究的现状与未来[J].中华医学遗传杂志,1996,13:257-258.

[2]胡志恒.地中海贫血筛查及基因检查的结果分析[J].华南国防医学杂志,2010,24(1):63-64.

[3]陈世新.地中海贫血与婚前保健[J].中国妇幼保健,2010,25;1921-1922.

[4]杜 娟.16443例地中海贫血结果分析与研究 [J].中国妇幼保健,2008，23(32):4435-4436.

[5]黄 凌.917例血红蛋白电泳检查结果分析 [J].实验与检验医学,2009,27(3):226-227.