葛根芩连汤及其拆方对UC大鼠MTL、VIP的影响*

文颖娟，苗海东，张喜德，许爱英，王 江

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)又称慢性非特异性溃疡性结肠炎，是一种病因不明的直肠和结肠炎性病变，具有病程漫长、反复发作、并发症多、预后较差等特点，临床表现为腹痛、腹泻、伴浓液黏血便、里急后重等。现代研究表明，UC主要由多种原因导致机体和肠道免疫功能紊乱，产生炎症反应，形成溃疡造成;病变限于黏膜及黏膜下层［1］。而葛根芩连汤(组成:葛根 15g，甘草 6g，黄芩 9g，黄连9g)是中药治疗腹泻的经典方剂，它早在张仲景·《伤寒论》中就用来治疗湿热所致的腹泻和痢疾。

本实验拟通过建立UC大鼠模型，观察通过葛根芩连汤及其拆方干预实验性UC大鼠结肠组织中MTL、VIP的效用，进而探讨葛根芩连汤对实验性UC大鼠MTL、VIP的影响机制，以期探索葛根芩连汤干预UC的作用机制以及君臣配伍在组方中的作用。

1 材料

1.1 药物

葛根芩连汤(组成:葛根 15g，甘草 6g，黄芩 9g，黄连 9g，葛根、甘草、黄芩、黄连的比例为 5∶2∶3∶3)、葛根芩连汤去葛根方(组成:甘草 6g，黄芩 9g，黄连9g，甘草、黄芩、黄连的比例为 2∶3∶3)、葛根芩连汤去黄连方(组成:葛根 15g，甘草 6g，黄芩9g，葛根、甘草、黄芩的比例为5∶2∶3)、葛根芩连汤去葛根和黄连方(甘草 6g，黄芩 9g，甘草、黄芩的比例为2∶3)、葛根芩连汤去黄芩方(组成:葛根 15g，甘草 6g，黄连 9g，葛根、甘草、黄连的比例为 5∶2∶3)、葛根芩连汤去甘草方(组成:葛根 15g，黄芩 9g，黄连 9g，葛根、黄芩、黄连的比例为5∶3∶3)，以上中药均购自陕西省咸阳市和谐大药房，在陕西中医学院中药制剂室按常规煎法熬制成汤液，并分别浓缩成含生药4.07g/ml、2.50g/ml、3.13g/ml、1.57g/ml、3.13g/ml、3.44g/ml的浓缩药液备用。

1.2 动物

健康SD大鼠(SPF级)120只，雌雄各半，体重180～220g，由陕西省西安市西安交通大学医学院实验动物中心提供(许可证编号 SCXK(陕)2007-001。给予基础饲料适应性喂养1周，随机分为A组(正常组)、B组(病理组)、C组(葛根芩连汤全方组)、D组(葛根芩连汤去葛根组)、E组(葛根芩连汤去黄连组)、F组(葛根芩连汤去葛根和黄连组)、G组(葛根芩连汤去黄芩组)、H组(葛根芩连汤去甘草组)，每组各15只，各组体重统计学比较无显著差异。

1.3 主要试剂及仪器

5%2-4-6TNBS购自上海达瑞化学品公司;乙醇、水合氯醛均购自湖北大学化工厂;碘125I胃动素放射免疫分析药盒、碘125I血管活性肠肽放射免疫分析药盒均购自北京普尔伟业生物科技有限公司。TG16-W型微量高速离心机购自湘仪离心机仪器有限公司;HH.W21.H20电热恒温水箱购自天津斯泰特仪器有限公司;SN-697全自动双探头放射免疫γ计数仪(上海原子核研究所日環仪器一厂)。

2 方法

2.1 造模方法

基础饲料适应性喂养1周后，A组继前喂养。其余各组参考文献［2、3］采用三硝基本磺酸(TNBS)/乙醇法建立UC模型;禁食24 h(不禁水)，10%水合氯醛腹腔麻醉，将TNBS 100 mg/kg+50%乙醇按照1∶1的比例混合，按1 ml/只用橡胶输液管由大鼠肛门轻缓注入深约8 cm肠腔内留置，次日即出现精神差、湿便等溃疡性结肠炎症状，表明造模成功。

2.2 给药方法

造模后各组大鼠等条件下饲养，按成人每天1剂的药量换算为大鼠每天每千克体重的用量，即给药剂量均相当于临床用量的6.25倍。具体用量如下:C组按4.07g/kg/d药物灌服葛根芩连汤水煎液，D组按2.50g/kg/d药物灌服葛根芩连汤去葛根水煎液，E组按3.13g/kg/d药物灌服葛根芩连汤去黄连水煎液，F组按1.57g/kg/d药物灌服葛根芩连汤去葛根和黄连水煎液，G组按3.13g/kg/d药物灌服葛根芩连汤去黄芩水煎液，H组按3.44g/kg/d药物灌服葛根芩连汤去甘草水煎液(注:考虑到药物损失最后一位小数采用进位法，如C组计算值4.0625灌胃按4.07计算用药量，其他各组均同)，B组即模型组按每10 g体重0.2 ml灌服蒸馏水。7组均每天灌服2次，连续4周后停药。各组用药过程中观察大鼠饮食、精神、活动度、饮水、湿便多少等情况。

2.3 结肠组织匀浆制备

各组大鼠腹腔麻醉后断颈处死，剖开腹腔，摘取距回盲部2cm处的结肠组织100mg，纵行剖开，4℃生理盐水冲洗，滤纸吸干，尽快加入1ml生理盐水碾磨，制成 10%的组织匀浆，4℃3000r/min离心15min，留取上清液，－20℃保存待测。

2.4 指标检测

放射免疫方法检测结肠组织中MTL、VIP的含量，检测方法参照试剂盒说明书，其单位为 pg/ml。

2.5 统计

采用统计软件SPSS10.0处理，实验数据均以平均值±标准差(珋x±s)表示，组间均数比较采用单因素方差分析。

3 结果

3.1 各组用药后症状

连续给药4周后，各组用药过程中观察大鼠情况简述如下:A组(正常组)大鼠精神活跃、动作敏捷、饮水、饮食良好、体重强加明显。B组(模型组)大鼠懒动、扎堆、拱背、饮水多、饮食较其他各组少、体重没有增加甚至减轻、腹部有体毛脱落、大便为黏液稀便。C组大鼠精神较好、饮水、饮食正常、体重有所增加、给药1周后黏液稀便消失。其他各组症状差别不明显，与C组比较其他各组大鼠精神差、饮水多、饮食少、活动差、体重增加不明显、稀便程度不一。

3.2 葛根芩连汤及其拆方对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中MTL的影响

表1显示，与A组(正常组)比较，B组、C组、D组、E组、F组、G组、H组实验大鼠结肠组织中MTL的含量均明显高于 A组;与 B组(模型组)比较，C组、D组、E组、F组、G组、H组实验大鼠结肠组织中MTL的含量显著降低(C组 P＜0.01，D组 P＜0.05，E 组 P ＜0.05，F组 P ＜0.05，G 组 P ＜0.01，H组 P＜0.01)。

3.3 葛根芩连汤及其拆方对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中VIP的影响

表1显示，与A组(正常组)比较，B组、C组、D组、E组、F组、G组、H组实验大鼠结肠组织中 VIP的含量均明显高于 A组;与 B组(模型组)比较，C组、D组、E组、F组、G组、H组实验大鼠结肠组织中 VIP的含量显著降低(C组 P＜0.01，D组 P＜0.05，E 组 P ＜0.05，F组 P ＜0.05，G 组 P ＜0.01，H组 P＜0.01)。

4 讨论

胃动素(MTL)是由十二指肠黏膜分泌、由22个氨基酸残基组成的多肽。作为消化道运动激素，MTL直接作用于消化道平滑肌的细胞受体，MTL可引起胃和上部小肠产生消化间期综合肌电Ⅲ相，诱发强力收缩和小肠明显的分节运动，这种运动周期性发生，每次持续约25 min，并向小肠远端传播，从而缩短小肠传递时间，并将胃肠内残渣、脱落的细胞碎片和细菌等清除干净，起着“清道夫”的作用。MTL可引起十二指肠、回肠、结肠的收缩运动，使结肠的压力和电活动增强。胃动素的水平受进餐和进餐种类以及胃肠道消化过程和消化期间胃容量的扩大，小肠活动状态和十二指肠内酸度等其他消化道激素的影响。UC病理状态下MTL升高可能由于结肠黏膜炎症作用使下消化道蠕动增快，机体为调节内外平衡，胃小肠以适应结肠运动，故MTL分泌和释放增加［4］。

表1 各组UC大鼠MTL和VIP的含量(珋x±s)

血管活性肠肽(Vasoactiveintestinalpeptide，VIP)由said51等［5］于1970年从猪小肠中分离出来的一种由28个氨基酸组成的直链肽，属胰高血糖素、胰泌素家族。在生物体内，它既作为胃肠道激素，又是神经肽。VIP能促进胰腺的水分及碳酸氢盐分泌，有利于胃肠黏膜黏液屏障的形成和修复，并可刺激肠液的分泌，抑制胃酸及胃泌素分泌，从而降低消化性溃疡的发生率，促进溃疡的修复。VIP与胃肠运动主要抑制性介质之一的NO关系密切。VIP能促进NO合成引起环行肌舒张，NO则能使VIP易于释放。VIP不仅可抑制胃肠的运动，而且可降低胃肠的紧张。最近有研究揭示，VIP是神经系统和免疫系统之间相互作用的一种信号分子，在局部黏膜炎症时可促进VIP的产生［5］。

综合分析本实验结果，病理组大鼠结肠组织中MTL、VIP均明显高于其他各组。其中C组(葛根芩连汤全方组)、G组(葛根芩连汤去黄芩组)、H组(葛根芩连汤去甘草组)对大鼠结肠组织中 MTL、VIP的影响最明显，与C组(葛根芩连汤全方组)对大鼠结肠组织中 MTL、VIP的影响比较，E组(葛根芩连汤去黄连组)、F组(葛根芩连汤去葛根和黄连组)对大鼠结肠组织中MTL、VIP的影响不明显。现代药理研究表明，在降低肠道推进率和减少UC大鼠炎性指数的影响中，以黄连和葛根作用为主，黄芩能拮抗黄连的作用，炙甘草与黄芩黄连配伍后能增强黄连的作用［6，7］。结合本实验对 UC大鼠结肠组织中MTL、VIP影响最明显的药组是葛根、黄连、炙甘草的组合。葛根芩连汤对UC大鼠MTL的影响可能是通过对结肠黏膜炎症的修复使消化道蠕动减缓，胃小肠为适应结肠运动，随之减少 MTL分泌和释放;葛根芩连汤通过修复UC大鼠结肠组织中结肠黏膜炎症，使结肠黏膜炎症减少，VIP的分泌随之减少。

中医认为，溃疡性结肠炎是以胃肠气机阻滞、湿热浊邪堆积为主的泄泻，临床以恢复胃肠运动、促进浊邪排除为治疗目的。葛根芩连汤方中的君药葛根输肌以散，调畅气机，缓解腹痛，并促进肠道运动以排泄糟粕;黄连祛除湿热之邪，以解除壅滞于肠道的浊邪，缓解肠道阻力亦促进肠道运动;黄芩以祛除肝胆湿热为主，此处以去除筋膜阻滞，促进胃肠筋膜组织运动，进而协助胃肠运动;甘草补益中气，为肠道的运动提供物质基础，又和调诸药。全方中君、臣药物的配伍作用尤为突出，在方中占重要地位。结合本实验葛根、黄连、炙甘草的组合能够很好地恢复胃肠运动，清除病理产物和结肠组织炎症，促进浊邪排除。这3味药主要归脾胃经，而“脾主肌肉”，故葛根、黄连、炙甘草的组合以及以此为主组成的葛根芩连汤可能是通过作用于结肠肌层，调节MTL、VIP的分泌，进而修复结肠黏膜，恢复胃肠动力，以治疗溃疡性结肠炎。

［1］ 郑 礼，高振强，王淑仙.大鼠溃疡性结肠炎模型的实验研究［J］.中国药理学通报，1998，14(4):370-372.

［2］ Zheng L，Gao ZQ，Wang SX.A chronic ulcerative colitis model inrats.World J Gastroenterol，2000，6:150.

［3］ 王 皓，欧阳钦，胡仁伟.三硝基苯磺酸结肠炎动物模型的建立［J］.胃肠病学，2001，6(1):7.

［4］ 黄裕新，许才级，冯英明，等.胃动素在人体13种体液中含量分析［J］.中华消化杂志，1994，14(2):96-95.

［5］ Said SI，Mutt V polypeptide with broad activity:isolation from small intesti Seienee，1970;169(951):1217-8.

［6］ 王 磊，谭晓梅，王 莉，等.葛根芩连汤中黄连不同配伍对G6PD缺陷的痢疾杆菌感染大鼠红细胞渗透脆性的影响［J］.中药药理与临床，2009，25(2):1-2.

［7］ 罗佳波，谭晓梅，余林中，等.葛根芩连汤配伍规律的研究［J］.中草药，2005，36(4):512-518.