柴辛鼻敏康胶囊质量标准的研究

柴江平，王晓飞，葛海生，于 玲

柴辛鼻敏颗粒是由柴胡、细辛、川芎等多味中药加工而成的中药胶囊制剂，临床用于过敏性鼻炎，疗效显著。为保证和控制该制剂的质量，本试验建立了方中柴胡、细辛的TLC色谱定性鉴别方法，采用HPLC色谱法测定制剂中阿魏酸的含量，方法简单可靠，重复性好，可用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Angilent1200高效液相色谱仪及其色谱工作站(安捷伦);TLC半自动点样仪(CAMAG)。

1.2 试药

柴胡皂苷 a(中检院，110777-200507);柴胡对照药材(中检院，120992-200504);细辛对照药材(中检院，121204-200803);阿魏酸 (中检院，110773-200611);乙 腈 (SK Chemicals，14VA1H);甲 醇(Fisher Chemicals，043388);硅胶 G薄层板(青岛海洋化工厂，20100108);柴辛鼻敏康胶囊(批号20101102，20101217，20110109，自制)。

2 薄层鉴别［1］

2.1 柴胡TLC鉴别

图1显示，取本品内容物约5g，加乙醇40 mL，超声处理20 min滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20mL。合并提取液，用氨试液洗涤2次，每次20mL。正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材1.5 g，加水30mL，加热回流1h放冷滤过，自“用饱和正丁醇”起，同样品制备法制成对照药材溶液。另取柴胡皂苷a对照品适量，加甲醇制成含柴胡皂苷 a(1mg·mL－1)对照品溶液。制备不含柴胡药材的柴辛鼻敏康胶囊内容物，按样品溶液制备方法制成阴性对照溶液。吸取上述4种溶液各5μL，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65︰35︰10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开、取出、晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，105℃加热数分钟，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.2 细辛TLC鉴别

图2显示，取本品内容物6g，加甲醇30mL，超声处理30 min滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取细辛对照药材0.5g，加甲醇10 mL，同法制成对照药材溶液。制备不含细辛药材的柴辛鼻敏康胶囊内容物，按样品溶液制备方法，制成阴性对照溶液。吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯 (3︰1)为展开剂，展开取出晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，105℃加热加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

图1 柴胡TLC图

图2 细辛TLC图

3 阿魏酸含量测定

3.1 色谱条件

色谱柱:SHISEIDO ODS C18(250 mm×4.6 mm，5μm)，流动相:乙腈-0.1% 磷酸溶液(15 ︰85)，检测波长:320 nm，流速:1.0 mL·min－1，柱温:30℃。

3.2 溶液的制备

3.2.1 对照品溶液 精密称取阿魏酸对照品约5mg，置50mL棕色量瓶中，加甲醇适量、超声，使溶解后放冷，加甲醇至刻度摇匀，得浓度约为0.1 mg·mL－1的对照品溶液作为储备液。精密量取上述储备液2mL置10mL容量瓶中，定容至刻度摇匀，得对照品溶液。

3.2.2 供试品溶液 精密称取本品内容物约5g，置入50 mL锥形瓶中，精密加甲醇25mL称重，超声处理40min，放冷称重，用甲醇补足损失重量，2500r离心5min，取上清液再用滤膜(0.45μm)滤过，即得供试品溶液。

3.2.3 阴性样品溶液 制备不含川芎药材的柴辛鼻敏康胶囊内容物，按“3.2.2”项下方法操作，即得。

3.3 专属性考察

精密吸取阴性样品溶液、对照品溶液、供试品溶液各5μL，注入 HPLC，按“3.1”色谱条件进行测定，记录色谱图，样品在与阿魏酸对照色谱相应位置处有相同保留时间的色谱峰，保留时间分别为23.023min、23.050min，见 A、B;阴性样品溶液相应位置无干扰峰，方法专属性良好。

3.4 线性考察

精密量取对照品溶液(0.02148 mg·mL－1)各1μL、3μL、5μL、10μL、15μL、20μL、25μL 注入高效液相色谱仪，按“3.1”项下色谱条件测定，记录阿魏酸峰面积，以测得峰面积值为纵坐标(Y)、芍药苷的进样量(μg)为横坐标(X)绘制标准曲线，得回归方程为:y=127.49x+6.8096(r=0.9999，n=7)。结果表明，芍药苷在0.0215～0.5370μg内呈现良好的线性关系。

3.5 精密度试验

精密量取对照品溶液(0.02148 mg·mL－1)，按“3.1”项下色谱条件连续进样6次，进样量为5μL，记录阿魏酸峰面积，计算得 RSD 0.99%(n=6)。

3.6 重复性试验

精密称取同一批号(20101102)样品6份，按“3.2.2”项下方法操作制成6份供试品溶液，精密量取5μL注入高效液相色谱仪，按芍药苷含量计算，RSD 0.17%(n=6)，表明方法的重复性良好。

3.7 稳定性试验

精密称取同一批号(20110109)样品1份，按“3.2.2”项下方法操作制成供试品溶液，在室温放置 0、2、4、6、8、10、12 h 后，分别进样 5 μL 测定，以芍药苷峰面积计算，RSD 0.84%(n=7)，表明供试品溶液在24h内稳定。

3.8 回收率试验

采用加样回收法，精密称取已知含量的样品(批号 20110109，含量为 0.10754mg·g－1)约 5g，共6份，精密称定，分别置于50mL锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，按“3.2.2”项下方法制成供试液，精密吸取供试液 5 mL，阿魏酸储备液(0.10740 mg·mL－1)1 mL置10mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，过滤，精密吸取续滤液5μL注入高效液相色谱仪，测定阿魏酸含量并计算回收率(结果见表1)，得平均回收率为99.84%，RSD 1.23%。

表1 回收率试验结果(n=6)

3.9 样品测定

表2显示，取3个批次样品，按“3.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“3.1”项下色谱条件测定，进样量为5μL，以外标法计算阿魏酸的含量。

表2 样品测定结果(n=3)

4 讨论

4.1 本实验对方中主要成分柴胡、细辛采用薄层色谱法进行定性鉴别，色谱斑点明显、丰富，分离效果较好，专属性强，可用于该制剂的定性鉴别。

4.2 实验中取相同批号的样品，分别用甲醇、乙醇、70%甲醇、70%乙醇为溶剂考察了加热回流1h、超声处理40min和1h等方法。结果:由于样品含糖量较高，用70%甲醇、70%乙醇为溶剂时，样品难以过滤固不做选择;以测得阿魏酸的含量为指标比较，选择甲醇超声40min，提取充分，方法简洁。

4.3 在色谱条件的选择中，对不同流动相［2～4］下阿魏酸含量测定，以及不同的柱温条件进行筛选，以流动相为乙腈︰0.1%磷酸溶液(15︰85)，流柱温为30℃时，阿魏酸与杂峰的分离效果理想，理论塔板数以阿魏酸计不低于2000，且方法简单、易操作，可有效控制柴辛鼻敏康胶囊的质量。

［1］ 中国药典.一部［S］.2005.

［2］ 朱 伟，王学美.黄芪剂量对补阳还五汤中芍药苷、阿魏酸含量的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2006，12(3):11-13.

［3］ 毛晓敏，张小波，陈小清，等.HPLC同时测定十二乌鸡白凤丸中芍药苷、阿魏酸和丹皮酚含量［J］.中成药，2008，30(5):678-681.

［4］ 李福如，缪 婧，顾海琳，等.清脑宁颗粒质量标准研究［J］.中国药业，2010，19(9):27-28.