内关穴位注射香丹注射液预处理对急性心肌缺血大鼠TNF-α、VEGF的影响

陈 琪，李胜涛，陈志伟，

（1.重庆市长寿区人民医院中西医结合科，重庆 401220；2.湖北黄石市中医院，黄石 435100；3.成都中医药大学，成都 610075）

内关穴位注射香丹注射液预处理对
急性心肌缺血大鼠TNF-α、VEGF的影响

陈 琪1，李胜涛2，陈志伟3，

（1.重庆市长寿区人民医院中西医结合科，重庆 401220；2.湖北黄石市中医院，黄石 435100；3.成都中医药大学，成都 610075）

[目的]探讨内关穴位注射香丹注射液对大鼠急性心肌缺血肿瘤坏死因子ɑ（TNF-ɑ）、血管内皮生长因子（VEGF）的影响。[方法]SD大鼠内关穴注射香丹注射液14 d，然后腹腔皮下注射异丙肾上腺素（ISO）造成急性心肌缺血模型，免疫组化法检测心肌TNF-ɑ、VEGF。[结果]1）TNF-α在心肌缺血后表达增多，内关组、曲池组及药物组均可以降低其表达，内关组的这一作用明显优于曲池组及药物组。2）VEGF在心肌缺血后表达有所增高，药物组和曲池组可以明显增高其表达，与内关组比较有统计学意义。[结论]内关穴位注射香丹注射液预处理对急性心肌缺血大鼠的心肌具有保护作用，它可以降低TNF-α含量，增高VEGF的表达。

内关；穴位注射；预处理；心肌缺血；TNF-ɑ；VEGF

从20世纪90年代起，越来越多的证据表明动脉粥样硬化（AS）是血管壁的慢性炎症，是对血管壁损害的反应。各种炎症因子在其中起着复杂的作用。冠心病（CHD）患者肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等炎症因子的水平比对照组均显著增高，并随着冠脉病变加重、冠脉受累范围的增加而逐渐升高，说明炎症反应可能参与了CHD的发生、发展。血管内皮生长因子（VEFG）是一种高度特异性促血管生长因子，可直接诱导血管平滑肌细胞和血管内皮细胞增殖与血管化，产生心肌梗死区域新生血管的效应，而CHD患者VEGF水平变化与机体缺血缺氧密切相关。本实验采用大鼠急性心肌缺血模型，观察内关穴位注射香丹注射液对大鼠心肌缺血TNF-ɑ、VEGF的影响。

1 材料与方法

1.1 试剂 TNF-ɑ、VEGF试剂盒（购自北京中杉生物科技有限公司）、10%水合氯醛、10%福尔马林液，异丙肾上腺素（ISO）（上海禾丰制药有限公司生产，2 mL∶1 mg/支，批号：071201，国药准字：H31021344），香丹注射液（湖北清大康迪药业有限公司生产，2 mL/支，批号：20070404，国药准字：Z42020391），复方丹参滴丸（天津天士力联合制药股份有限公司生产，27mg/粒，批号：20071009。国药准字：Z10950111），生理盐水等。

1.2 动物模型的建立及分组 SD大鼠50只，体质量200～300 g，雌雄各半，由成都中医药大学实验动物研究中心提供。适应性喂养1周后，按动物体质量、性别随机分为5个组，10只/组。空白组：正常饲养，不给予任何处理。模型组：正常饲养14 d，末次喂饲后24 h后皮下注射ISO 2 mg/kg造成急性心肌缺血模型[1]。药物组：每天给予复方丹参滴丸270 mg/kg（相当于人用量的20倍）灌胃。共14 d，末次灌胃24h后皮下注射ISO2mg/kg。曲池组：用5号注射针头垂直刺入一侧曲池穴3～4 mm，注射香丹注射液0.1 mL，第2天换另一侧曲池穴位注射，1次/d，共14 d，末次注射24 h后皮下注射ISO 2 mg/kg。内关组：用5号注射针头垂直刺入一侧内关穴1～2 mm，注射香丹注射液0.1 mL，第2天换另一侧内关穴，1次/d，共14 d，末次注射 24 h后皮下注射 ISO（2 mg/kg）。预处理及造模过程中有部分动物死亡，最后取得38份标本。

1.3 标本采集与检测方法 注射ISO 24 h后，用10%水合氯醛（按400 mg/kg量腹腔注射）麻醉大鼠，取出心脏，置10%甲醛溶液中固定。免疫组化法检测TNF-α及VEGF。SP染色，在显微镜200倍下用图形分析系统定量观察。测量单位视野染色区域的面积，积分吸光度。

1.4 统计学处理方法 采用SPSS 13.0统计软件，实验数据以均数±标准差（±s）表示，多组计量资料采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD法。

2 结果

结果见表1、表2。

表1 各组TNF-α比较(±s)Tab.1 Comparison of TNF-α in each group(±s)

表1 各组TNF-α比较(±s)Tab.1 Comparison of TNF-α in each group(±s)

注：与空白组比较，＃＃P<0.01，＃P<0.05；与模型组比较，**P<0.01，*P<0.05；与药物对照组比较，△P<0.05；与曲池组比较，▲▲P<0.01，▲P<0.05。

组别空白组模型组药物组曲池组内关组n 8 8 6 8 8面积（μm2）243 132.88±33 386.34 669 586.38±45 304.84＃＃562 090.33±53 431.40＃＃566 980.38±75 662.04＃＃370 270.25±21 241.43**△▲▲积分吸光度（PU）67 624.36±8 782.48 180 405.90±16 324.16＃＃130 445.00±27 955.23＃*156 330.50±20 338.44＃＃105 628.30±63 09.94**▲

表2 各组VEGF比较(±s)Tab.2 Comparison of VEGF in each group(±s)

表2 各组VEGF比较(±s)Tab.2 Comparison of VEGF in each group(±s)

注：与空白组比较，＃＃P<0.01，＃P<0.05；与模型组比较，**P<0.01；与药物对照组比较，△△P<0.01；与曲池组比较，▲▲P<0.01。

组别空白组模型组药物组曲池组内关组n 8 8 6 8 8面积（μm2）182 810.30+32 698.37 287 777.80±80 996.40 569 483.50±60 267.23＃＃**619 204.80±54 823.55＃＃**316 218.90±18 639.69△△▲▲积分吸光度（PU）50 356.94±8 367.86 89 092.16±19 172.22＃148 815.30±13 641.23＃＃**155 843.80±12 714.25＃＃**85 198.00± 4 938.60△△▲▲

3 讨论

TNF-α可通过多种机制促进AS的发生与发展，诱导急性冠脉症状和炎症反应的产生。实验发现主动脉弓内膜增厚，动脉粥样斑块明显的实验组TNF-α较对照组明显升高，说明TNF-α与AS的发生有密切关系。TNF-α在CHD、高血压患者中升高，与血管疾病的发生密切相关。在稳定性心绞痛（SA）组明显高于正常对照组；而急性心肌梗死（AMI）组和不稳定性心绞痛（UA）组又明显高于正常对照组和SA组，说明血清TNF-α水平与心肌缺血的程度有关，一定意义上反映了冠脉病变的严重程度，是反映心肌缺血的良好指标。正常心肌细胞产生极微量的TNF-α，但在CHD状态下，心肌细胞受多种因素的刺激而产生TNF-α，并可通过作用于自身TNF-α受体，大量诱导的NO（一氧化氮）作用于心肌细胞、EC（内皮细胞）的Fas/Fas配体(FasL)系统而使细胞发生凋亡。本研究发现，TNF-α在心肌缺血后表达明显增高，内关组预处理后表达明显降低。

VEGF在正常情况下人体中含量很低，心肌缺血缺氧时，VEGF及VEGF mRNA表达增加，提示缺血和缺氧是刺激VEGF表达增加的重要因素。在AMI患者中VEGF明显增加，高于SA患者，且VEGF逐渐升高，在2周时达到最高峰，其峰值与梗死范围相关，在1～2周内VEGF的高水平引起侧支循环形成。随着缺氧时间延长，心肌产生的VEGF增加，缺血时间与VEGF产生量呈正比。冠状动脉狭窄程度越重，病变累及的血管越多，血清VEGF升高越显著。一旦冠状动脉狭窄解除，血清VEGF水平迅速下降至正常。本研究显示，VEGF在心肌缺血后与空白组比较有增高趋势，但无统计学意义，在药物组、曲池组、内关组的表达较空白组明显增高；药物组、曲池组较内关组VEGF增高更为显著。

内关是手厥阴心包经的络穴，同时又是八脉交会穴之一，通于阴维脉，为历代医家治疗心痛病症之要穴。既往已有的临床和实验研究证实针刺内关对于减轻、缓解心绞痛有确切作用。本研究显示内关组预处理对急性心肌缺血大鼠的心肌具有保护作用，可以降低心肌TNF-α含量，增高VEGF的表达，减轻心肌组织在急性心肌缺血中的损伤。

[1] 吴雪茹,吴启端,匡忠生,等.瓜薤葛丹汤抗大鼠心肌缺血的作用研究[J].中药新药与临床药理,2008,19(3):203-205.

The effects of pretreatment with acupoint injection of Xiangdan injection at Neiguan(PC6)on TNF-α,
VEGF in rats with acute myocardial ischemia

CHEN Qi1,LI Sheng-tao2,CHEN Zhi-wei3
（1.People's Hospital of Chongqing Changshou District,Chongqing 401200,China;2.Huangshi Hospital of TCM in Hubei,Huangshi435100,China;3.Chengdu University of TCM,Chengdu 610075,China）

[Objective]To explore the influence on myocardial ischemia by testing TNF-ɑ and VEGF in the rats pre-injected with Xiang-Dan injection into PC6.[Methods]SD rats were

XiangDan injection into PC6 for 14 days,followed by subcutaneous isoprenaline injection at abdomen to inducing myocardial ischemia.TNF-ɑ and VEGF expression were tested with immunohistochemical assay.[Result]The content of TNF-α was decreased in PC6 group,Drug group and LI11 group.The method of pre-injection of XiangDan injection into PC6 was more effective than Drug group and LI11 group in protecting the myocardium tissue from ischemia and anoxia.The content of VEGF in model group was higher than that of normal group.The content of VEGF was also increased significantly in drug group and LI11 group.Compared with PC6 group statistical significance was obvious.[Conclusions]The method of XiangDan pre-injection into PC6 acupoint can protect the myocardium from ischemia and anoxia.It can decrease the level of TNF-α and increase the contents of VEGF.

PC6；acupoint injection；preconditioning；myocardial ischemia；TNF-ɑ；VEGF.

R285.5

A

1672-1519(2011)01-0067-03

陈 琪（1983－），女，硕士，医师，研究方向为针药结合防治老年性疾病的临床及实验研究。

李胜涛。

2010-06-30）