藏药川西千里光中黄酮类成分的分离和结构鉴定

杨爱梅， 李笑颜， 李玉兰， 杨中铎， 杨明俊

(兰州理工大学生命科学与工程学院，甘肃兰州 730050)

藏药川西千里光系菊科千里光属植物，多年生草本，产西藏(拉萨、朗县、米林、波密、八宿、松宗、则当、隆子)、四川西南部(巴塘、道孚、茂县)、云南(德钦)。生于海拔2 900-3 900 m开旷阳坡。藏药名叶格兴，具有清热解毒治疮、接骨，清肝胆诸热等功效，花序或全草入药，主治伤口发炎、肿胀、急性结膜炎、皮炎、疮疖、跌打损伤等症［1-2］。本实验对川西千里光的化学成分首次进行了研究，经过反复硅胶柱色谱及聚酰胺柱色谱分离，获得3个黄酮苷类化合物，经波谱方法鉴定，确定其结构分别为:5，7，4’-三羟基-黄酮-3-O-β-D-葡萄糖苷(山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷)(I)，5，7，3’，4’-四羟基-黄酮-3-O-β-D-葡萄糖苷(槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷)(II)，5，7，3’，4’-四羟基-黄酮-3-O-β-D-葡萄糖基-(6→1)-O-鼠李糖苷(芦丁)(III)。

1 仪器与材料

XT-4数显微熔点仪;Nicolet Avatar 360 FT-IR型红外光谱仪;Varian INOVA-400MHz核磁共振仪;Bruker ZAB-HS型质谱仪;柱层析硅胶(200～300目)、薄层层析硅胶(GF254)均为青岛海洋化工厂产品。大孔吸附树脂(型号AB-8)为天津欧瑞生物科技有限公司产品;聚酰胺粉(100～200目)为台州市路桥四甲生化塑料厂产品。藏药川西千里光购自青海塔尔寺藏医院，植物标本由兰州大学生命科学院张国梁教授鉴定为Senecio solidagineusHand.-Mazz.，标本(2006-02)保存于兰州理工大学生命科学与工程学院天然药物研究室。

2 提取与分离

川西千里光(3.6 kg)，粉碎，用95%乙醇室温提取3次，减压浓缩 ，得乙醇浸膏350 g;乙醇浸膏加热水分散，用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，得到石油醚浸膏114 g，乙酸乙酯浸膏30 g，正丁醇浸膏60 g。正丁醇浸膏用大孔吸附树脂(型号AB-8，800 g)除糖，分别用水和95%乙醇洗脱，得除糖后浸膏28 g，进行硅胶(200～300目，500 g)柱色谱分离，湿法上柱，氯仿-甲醇梯度洗脱，得到多个部分(Fr.1～Fr.3)。Fr.1部分 (1.36 g)，200～300目硅胶(40 g)柱层析，氯仿-甲醇 (10∶1)洗脱，重复3次，析出黄色圆球状固体0.23 g，为化合物I的粗品，再上聚酰胺(2 g)柱层析，水-甲醇(1∶1)洗脱，得黄色球状固体I(80 mg);Fr.2部分 (2 g)，硅胶(60 g)柱层析，氯仿-甲醇(10∶1)洗脱，得化合物II粗品0.6 g，再上聚酰胺(4 g)柱层析，水-甲醇(1∶1)洗脱，得黄色无定形粉末II(mg)(380 mg);Fr.3部分(2.7 g)，硅胶(80 g)柱层析，氯仿-甲醇(5∶1)洗脱，得化合物III粗品，经甲醇反复重结晶，析出黄色粉末状固体III(585 mg)。3 结构鉴定

化合物I:黄色球状固体，FABMSmle:447［M-H］+，TLC在5%H2SO4-乙醇中加热显黄色，初步推测该化合物为黄酮类化合物。化合物I的氢谱(1H-NMR，400 MHz，DMSO-d6)δ:8.0(2H，d，J=8.8，H-2’6’)，6.86(2H，d，J=8.8，H-3’，5’)，6.17(1H，brs，H-6)，6.44(1H，brs，H-8)，5.45(1H，d，J=7.2，H-1”);碳谱(13C-NMR，100 MHz，DMSO-d6):156.2(C-2)，133.1(C-3)，177.4(C-4)，161.2(C-5)，98.8(C-6)，161.2(C-7)，93.6(C-8)，156.5(C-9)，103.8(C-10)，121.0(C-1’)，130.9(C-2’，6’)，115.1(C-3’，5’)，160.4(C-4’)，葡萄糖苷:101.4(C-1”)，74.2(C-2”)，76.4(C-3”)，70.0(C-4”)，77.5(C-5”)，60.8(C-6”)，以上数据与文献［3，4，5］对照，确定化合物 I为 5，7，4’-三羟基-黄酮-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物II:黄色粉末，分子式C21H20O12，不饱和度12。FABMSmle:463［M-H］+，TLC 在5%H2SO4-乙醇中加热显黄色，初步推测该化合物为黄酮类化合物。化合物II的氢谱(1H-NMR，400 MHz，DMSO-d6)δ:7.63(1H，d，J=1.6，H-2’)，7.50(1H，dd，J=1.6，8.0，H-6’)，6.81(1H，d，J=8.4，H-5’)，6.17(1H，brs，H-6)，6.37(1H，brs，H-8)，5.45(1H，d，J=6.8，H-1”);碳谱信号如下:(13C-NMR，100 MHz，DMSO-d6):156.2(C-2)，133.3(C-3)，177.4(C-4)，161.3(C-5)，98.7(C-6)，164.3(C-7)，93.5(C-8)，156.4(C-9)，104.0(C-10)，121.6(C-1’)，116.0(C-2’)，144.8(C-3’)，148.5(C-4’)，115.2(C-5’)，121.2(C-6’)，葡萄糖苷:101.0(C-1”)，74.1(C-2”)，76.5(C-3”)，70.0(C-4”)，77.5(C-5”)，60.2(C-6”)，以上数据与文献［3］839，［7］对照，确定化合物 II为 5，7，3’，4’-四羟基-黄酮-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物III:黄色粉末，mp:176℃ ～178℃;分子式C27H30O16，不饱和度13。TLC在5%H2SO4-乙醇中加热显黄色，初步推测该化合物为黄酮类化合物。化合物III的氢谱(1H-NMR，400 MHz，DMSO-d6)δ:7.52(1H，brs，H-2’)，7.50(1H，d，J=7.6，H-6’)，6.80(1H，d，J=8.0，H-5’)，6.16(1H，brs，H-6)，6.35(1H，brs，H-8)，5.31(1H，d，J=6.0，H-1‴，Rha)，4.36(1H，d，J=7.2，H-1”，Glu)，1.01(3H，d，H-6‴);碳谱(13C-NMR，100 MHz，DMSO-d6)δ:156.4(C-2)，133.3(C-3)，177.4(C-4)，161.2(C-5)，98.7(C-6)，164.0(C-7)，93.6(C-8)，156.6(C-9)，104.0(C-10)，121.2(C-1’)，115.2(C-2’)，144.7(C-3’)，148.4(C-4’)，116.2(C-5’)，121.6(C-6’)，葡萄糖:101.2(C-1”)，74.1(C-2”)，76.4(C-3”)，70.4(C-4”)，76.0(C-5”)，67.0(C-6”)，鼠李糖:100.8(C-1‴)，70.4(C-2‴)，70.6(C-3‴)，71.9(C-4‴)，68.2(C-5‴)，17.7(C-6‴)以上数据与文献［7］对照，确定化合物 III为 5，7，3’，4’-四羟基-黄酮-3-O-β-D-葡萄糖基-(6→1)-O-鼠李糖苷(芦丁)。

［1］中国植物志编委会.中国植物志［M］.七十六卷.北京:科学出版社，1979:55.

［2］中国科学院西北高原生物研究所.藏药志［M］.西宁:青海人民出版社，1991:322.

［3］于德泉，杨俊山主编.分析化学手册［M］.第七分册.北京:化学工业出版社，1999:301.

［4］Ulubelen A，Kerr K M，Mabry T J，New 6-hydroxyflavonoids and their methyl ethers and glycosides from Neurolaena oaxacana［J］.Phytochemistry，1980，19(8):19:1761-1766.

［5］Markham K R，Ternai B，Stanley R，et al.Carbon-13 NMR studies of flavonoids-III:Naturally occurring flavonoid glycosides and their acylated derivatives［J］.Tetrahedron，1978，34(9):1389-1397.

［6］于德泉，杨俊山主编.分析化学手册［M］.第七分册.北京:化学工业出版社，1999:839.

［7］Wang K J，Yang C R，Zhang Y J，Phenolic antioxidants fromChinese toon(fresh young leaves and shoots ofToona sinensis)［J］.Food Chemistry，2007，101(1):365-371.