您好.
我对贵刊已发表的论文《聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1抑制剂高通量筛选模型》一文的实验数据产生疑问(附件为其文章),其文章在Fig 3中显示PARP-1的标准曲线,横坐标为PARP的浓度,纵坐标为RFU,随着PARP含量增加,NAD含量应是降低,荧光值应当是降低,但是论文中RFU是上升,我对这篇文章的真实性产生疑问,请给予回复解释此事,谢谢!
读者
关于PARP-1抑制剂筛选模型的建立文章,我们查阅了当时实验记录(本实验主要完成于2005年1月~10月)
1)Fig 2中,我们只检测了反应体系中不同浓度的NAD+反应后的荧光值,此时没有加入PARP-1酶。结果表明,直到500 nM反应仍具有良好的线性关系。
2)在Fig 3中,我们实验的目的是想通过这个实验确定反应中所要需要的PARP-1酶的量。我们选用了不同浓度的PARP-1,同时我们也加入逐渐增加的NAD+的浓度(起到滴定作用:从500 nM,1000 nM,2500 nM,5000 nM,10 000 nM和20 000 nM),我们发现当酶的浓度达到1 000 μg·L-1时,即使增加酶的浓度和NAD+的浓度,荧光值也没什么变化,可能是反应中酶全部反应后,剩余NAD+的浓度达到饱和所导致的。因此我们实验中选择酶的量为大于1 000 μg·L-1。选用的NAD+的量为500 nM。我们认为Fig 3中荧光值上升可能是由于逐渐加入NAD+含量增加的原因。
3)当我们确定反应的酶的量和NAD+的量后,就建立了筛选模型,空白对照组只含有NAD+,认为是100%抑制,阳性对照孔只含有NAD+和Parp-1,认为是0%抑制率。对于加了化合物的孔则通过计算得到相对的抑制率。
4)关于周老师对Fig 3的疑问,非常抱歉我们没有在文章中写明反应条件,建立的该模型是在我们实验室初步建立完成的,也进行了阳性药筛选和稳定性研究,但是由于我们写作不严谨,给您带来困扰,很抱歉。
如果需要我进一步提供资料,我会积极配合,谢谢。此致!
柳军