宫颈病变中HPV16/18、p16INK4及CK17的表达研究

程文德 蔡芬兰 王伟源 冷敏芳 陈艳芬 林梅英

（深圳市观澜人民医院，广东 深圳 518110）

宫颈癌是妇女中常见的多发性生殖道恶性肿瘤，在全世界范围内其发病率和死亡率都较高，严重影响女性的生活质量[1]。近年来，我国的发病率一直居高不下并有逐渐上升的趋势，已经成为我国女性恶性肿瘤的第二大杀手。本病的形成必须经过一系列病变，如在初期是不成熟的病变，即子宫颈不典型不成熟鳞状化生（atypical immature metaplasia，AIM），随后细胞逐渐分化成熟，呈子宫颈上皮内病变（cervical in traepithelial neaplasia，CIN），按级别分为低级别鳞状上皮内病变（LSIL）及高级鳞状上皮内病变（HSIL）[2]等。针对不同的宫颈病变，其治疗方法和预后均不相同。因此明确患者的病变程度对于治疗和预后都起着至关重要的作用。本文收集120例2007至2010年在深圳市观澜人民医院病理诊断为AIM、LSIL及HSIL的患者的病理蜡块，探讨以上宫颈病变中HPV16/18、p16INK4及CK17表达情况。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2007至2010年在深圳市观澜人民医院共收集到120例病理诊断为AIM、LSIL及HSIL的患者及其病理蜡块，年龄34～62岁，平均年龄（54.3±5.3）岁，其中AIM组36例，LSIL组44例，HSIL组40例。AIM组、LSIL组和HSIL组的基本情况如年龄、性别、病程等各项指标经统计学分析，差异均无统计学意义，具有可比性。

1.2 入选标准

①经病理诊断为AIM、LSIL及HSIL的患者的病理蜡块；②以上病例均根据宫颈上皮内病变的诊断标准及Crum对AIM的定义进行分组[3]；排除标准：①合并肝、肾功能不全等其他严重的全身性疾病；②患有其他严重的急性或慢性疾病；③合并女性除宫颈癌之外的肿瘤患者，如乳腺癌、卵巢癌等；④合并其他病毒性感染等[2]。

1.3 检测方法

①p16INK4及CK17表达检测：常规制片后采用免疫组织化学及原位杂交方法检查120例宫颈病变中p16INK4A及CK17蛋白表达[1,2]；②HPV16/18的检测：采用核酸分子快速杂交仪检测，HPV16、HPV18是HPV感染的高危型别[3]。

1.4 判定标准

p16INK4A：细胞核中出现棕褐色染色为阳性细胞；CK17：以胞质棕黄色为阳性；按阳性细胞所占的百分数分为：（-）：0%～1%；（+）：1%～5%；（++）：5%～25%；（+++）：＞25%[1-3]

1.5 研究方法

采用SPSS18.0统计软件进行统计学分析，率的比较采用卡方检验，计量资料二者之间的比较采用t检验，计量资料以均数±标准差（±s）表示。

2 研究结果

2.1 CK17表达情况的比较

采用免疫组织化学及原位杂交方法检查120例宫颈病变中CK17蛋白表达情况，结果详见表1，AIM组阳性率较高，为100%，CIN病变组（LSIL组+ HSIL组）阳性率较低，为13.1%（11/84），经过卡方检验，χ2=17.9，P＜0.01，差异有统计学意义；LSIL组和HSIL组阳性率分别为11.4%、15%，经过卡方检验，χ2=1.9，P＞0.05，差异无统计学意义。即AIM组阳性率明显高于CIN病变组（LSIL组+ HSIL组），且LSIL组和 HSIL组阳性率无明显差异。

2.2 p16INK4表达情况的比较

采用免疫组织化学及原位杂交方法检查120例宫颈病变中p16INK4蛋白表达情况，结果详见表2， AIM组阳性率较低，为11.1%，CIN病变组（LSIL组+ HSIL组）阳性率较高，为100%，经过卡方检验，χ2=18.3，P＜0.01，差异有统计学意义；LSIL组和HSIL组阳性率均为100%，即AIM组阳性率明显低于CIN病变组（LSIL组+ HSIL组）。

2.3 HPV16/18感染情况的比较

采用核酸分子快速杂交仪检测120例宫颈病变中HPV16/18感染情况，结果见表3， AIM组阳性率较低，为22.2%，CIN病变组（LSIL组+ HSIL组）阳性率较高，为80.8%（68/84），经过卡方检验，χ2=12.6，P＜0.01，差异有统计学意义；LSIL组和HSIL组阳性率分别为79.5%和82.5%，经过卡方检验，χ2=1.3，P＞0.05，差异无统计学意义。即AIM组检出率明显低于CIN病变组（LSIL组+ HSIL组），且LSIL组和 HSIL组检出率无明显差异。

3 讨 论

目前对宫颈癌的病因并不明确，大量流行病学资料研究了多种高危因素，主要与女性体内激素等内分泌水平、病毒感染等密切相关。有大量流行病学资料表明HPV与女性宫颈癌的发生密切相关，其阳性率可高达90%[3]，尤其是高危型的HPV16/18与宫颈病变的关系更为密切。宫颈癌的发生是一个多因素、多阶段的长时间病变，初期是不典型不成熟鳞状化生（AIM），细胞逐渐分化成熟，呈子宫颈上皮内病变（CIN），包括低级别鳞状上皮内病变（LSIL）及高级鳞状上皮内病变（HSIL）。在形态学中AIM 和CIN的表现相似，容易导致误诊。但各病变中p16INK4A、CK17蛋白表达情况各不相同，因此p16INK4A、CK17蛋白的阳性表达率和HPV16/18的检出率对诊断宫颈病变有重要的意义。由本次研究结果显示，AIM组CK17表达阳性率明显高于CIN病变组（LSIL组+ HSIL组），且LSIL组和 HSIL组阳性率无明显差异；AIM组p16INK4A表达阳性率明显低于CIN病变组（LSIL组+ HSIL组）；AIM组HPV16/18检出率明显低于CIN病变组（LSIL组+ HSIL组），且LSIL组和HSIL组检出率无明显差异。

在宫颈中，CK17主要表达于宫颈储备细胞，是细胞分化不成熟的标志，成熟细胞中不会表达，因此AIM组中阳性率较高，LSIL组和HSIL组阳性率较低。p16INK4A是位于人染色体9p21区的一种抑癌基因，主要参与细胞周期调节，阻止细胞从G1期进入S期，从而抑制细胞增殖。在人正常宫颈鳞状上皮中， 绝大多数上皮细胞呈阴性[4,5]，因此AIM组中阳性率较低，LSIL组和HSIL组阳性率较高。高危型HPV（HPV16/18）持续感染是宫颈癌及其癌前病变发病的主要危险因素，感染人体后可以产生癌蛋白E6和E7，通过E6蛋白与p53结合，E7蛋白与pRb结合，使p53降解和pRb失活，从而细胞周期控制失常，发生癌变[6]，因此AIM组中阳性率较低，LSIL组和HSIL组阳性率较高。综上所述，在宫颈病变的连续过程中，可借助CKl7、p16INK4A的表达和HPV16/18的检出率来认识AlM和CIN的细胞分子特征，同时进行二者的鉴别诊断。

[1]丁岚,杨永国,梅霞.CKl7和p16在宫颈鳞状上皮不成熟化生和宫颈上皮内瘤变中的表达及意义[J].临床病理学杂志,2009,16(3):174-175.

[2]徐秋霞,关红琼.p16INK4A 、p14ARF和Ki67在宫颈癌中的表达特点[J].海南医学院学报,2010,16(1):17-18.

[3]范丽萍,丁宇,李静,等.不同宫颈病变组织HPV6/11、HPV16/18、p53、Ki67表达的临床意义[J].山东医药,2010,50(37):81-82.

[4]梁艳芳,胡新荣.HPV和p16INK4A与宫颈癌的关系研究进展掌[J].西南军医,2009,11(4):731-732.

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