初筛实验室HIV抗体检测的质量控制及影响因素分析

张润林

（山西省太原市阳曲县疾病预防控制中心，山西 太原 030100）

艾滋病是一种危害人类生命健康的传染病，目前已成为全球关注的公共卫生和社会问题，要了解和掌握HIV的感染情况，关键就是实验室的检测技术，新的监测和检测需求在不断增加，而HIV抗体的检测可作为对HIV感染者诊断和监测的实验室依据，也是目前获得性免疫缺陷综合征（AIDS）诊断中最常用的方法，因此，提高实验室检测的准确性，减少假阳性和假阴性反应的发生，对诊断艾滋病十分重要，应用HIV抗体质控血清是对艾滋病初筛实验室进行全面质量评价的重要手段，现将本实验室进行HIV室内质量控制的程序介绍如下。

1 试剂来源

1.1 外部对照质控血清

卫生部临床检验中心试剂部提供的GBW（E）090050抗HIV 2NCU/mL并严格按照《全国艾滋病检测技术规范》2009年修订版[1]制备或购买弱阳性对照血清（该试剂盒临界值的2～3倍）、分装保存。

1.2 HIV诊断试剂盒

由省级HIV实验室提供，由珠海丽珠试剂股份有限公司生产的试剂，所用试剂盒及内部对照质控血清均在有效期内使用。

2 实验室设备校准

2.1 北京普朗新技术有限公司制造的全自动ZMX-988B酶标洗板机

本实验室根据计量认证质量手册的要求，经省技术监督监测中心定期校准（每年至少1次）。严格按照作业指导书操作规程进行自校准检查。每个工作日应检查洗板机管道是否通畅，是否有漏液现象，定期（每月至少1次）检查洗涤时各孔是否与相应的冲洗头对位良好，负压是否符合规定要求，并保留记录。

2.2 上海博讯实业有限公司生产的SSW型电热恒温水槽

调节并控制温度在（37±2）℃。每个工作日检查记录水浴箱温度，并做好记录。使用经过计量部门校准合格的温度计测量。

2.3 BIORAD Model 680型酶标仪、上海精益医学仪器厂生产的可调微量移液器

均经省技术监督监测中心检定合格。酶标仪根据仪器内具有的校准程序或使用校准板，对滤光片的精密度进行校准，并在检定周期1年内使用，每个工作日核对滤光片波长，对其检测数据进行不确定度分析，从而确保其具有良好的重复性和线性范围。移液器严格按照质量手册中作业指导书的操作规程定期进行校准，每年至少校准一次，发现异常情况应随时进行校准，其精密度应在厂家说明书规定的范围内。

3 操 作

3.1 严格按照作业指导书的操作规程进行操作。加入样品量要准确，不得混入血细胞，同时按照试剂说明书操作步骤每板设空白对照1孔（不加任何液体）、阴性对照3空、阳性对照2孔，质控弱阳性对照血清1孔；严格掌握温育时间，以免影响结果的精密度和准确性；置自动洗板机上洗涤，洗板时应保证洗板机管路畅通，加液量均匀；不得随意加减洗板次数（洗板次数少出现假阳性，洗板次数多又会使临界弱阳性变成阴性而漏检）；拍板（以垫纸不湿为宜）；在规定的时间内置于酶标仪读数，双波长450/630nm测OD值。检测结果正常情况下阳性对照 OD值≥0.8，阴性对照OD值≤0.12，若实验结果不符合这些要求，就应检查原因并重新进行检测。不同批号试剂不得混用。

3.2 每一次实验必须使用室内质控品，以便监控实验的重复性。对于我们基层HIV初筛实验室来说，由于不是每天进行HIV抗体的检测，对外部质控血清在常规条件下连续检测20次绘制出质控图后才能进入质控状态有很大难度，因此，我们采用了“即刻法”质控，即在对同一外部质控血清连续测定3次后，即可对第3次测定结果进行质控，从而来保证检验结果的准确性和可靠性。

3.3 室内质控是实验室内部对所有影响检测质量的各个环节进行系统控制，以提高日常检测工作前后的一致性。该质量控制主要通过质控图来实现，在ELISA法检测HIV试验中，从第3次开始就可以对每次测定的外部质控血清值进行统计，算出每次的SI上限值与SI下限值，查SI值表[1]，当SI上限值与SI下限值＜N2s时，表示该数据处于控制范围之内，结果可靠可以继续测定；当SI上限值与SI下限值处于N2s与N3s之间时，表示该数据处于2s～3s范围，处于“告警”状态；当SI上限值与SI下限有一值＞N3s时，表示该数据已在3s范围之外，属于“失控”状态，应重新测定该批样品。实验人员在实验中出现告警或失控状态时，应予注意，并及时分析原始数据及对具体检验过程进行回顾性分析，可能是系统误差、随机误差或外部质控品稳定性下降所致。查找出问题发生的原因，找出解除问题的方法后再继续进行测定。

4 影响因素分析

4.1 “即刻法”室内质控是适宜于基层初筛HIV实验室使用的一种较好的室内质量控制方法。为更好地做好室内质量控制，最好有专人负责质量控制，制定质量保证文件；筛查试剂必须经食品药品监督管理局注册批准、批检合格在有效期内的试剂，建议长期和稳定地使用一种敏感性和特异性高的试剂盒，如更换不同厂家的试剂盒或改用新批号试剂盒应重新制作质控图，且使用新批号或不同厂家的试剂盒必须在质控图上注明使用日期。另外，更换检测人员及更换包装的外部对照质控物必须重新绘制质控图。每次测定时，试剂盒及外部质控血清从冰箱取出后均应在室温下（18～23℃）平衡30min再使用；购买来的外部对照质控血清不能反复冻融，应按实际实验用量分装、分类、标记、封口、-20℃冻存于自动除霜冰箱中。一旦溶解，应储存于2～8℃的冰箱内，并且每次使用前应充分混匀。

4.2 室内质量控制是通过使用内部对照质控血清和外部对照质控血清来进行质量控制。试剂盒内部对照用于判断每次实验的有效性，内部对照结果无效，必须重新试验。质控弱阳性对照血清是为了监控检测的重复性和稳定性而设置的，以该试剂盒临界值（Cut-off）的2～3倍为宜。每一次实验都必须使用外部对照质控血清，并对检测结果进行分析，质控物的管间或瓶间变异必须小于监测系统预期的变异（cv＜20%），确定其在允许范围内，方可发出标本检测报告，这样做可使检测者及时分析质量控制图中出现的各种原因，以采取相应措施。4.3 出现以下问题，存在质量隐患，应引起重视：内盒或试剂盒的物理损伤；在单包装内存在混杂物质；标签出现错误、缺失或字迹模糊[特别是产品名称或出产厂家名称，批号和货号，失效期和（或）生产日期]；泄露或污染；不适宜的存放条件等。

4.4 引起室内质控失控的原因很多。如仪器设备未经检定、校准或测试、使用新批号和不同厂家的试剂及试剂接近失效期、购买不同厂家的外部质控品及质控标准血清反复冻融、孵育时间和温度不准确、更换新的检验人员等，此时要及时查找原因并予以纠正。

4.5 通常把临界值上下10%的范围定为检测结果灰区。对于检测过程中出现的灰区标本均应进行重复测试，以减少假阳性和假阴性结果的出现，并对检验结果和过程进行记录存档。

4.6 质量控制是监视全过程，排除误差，防止变化，维持标准化现状的一个管理过程。要做好实验室的质量保证，单纯靠室内质控是不行的，还要有行政支持，保证实验室负责人和主要技术人员队伍的稳定，检测技术人员需经上岗培训和在岗持续培训。还要建立健全实验室的各项规章制度，掌握质量控制知识，保证标准品的质量等全过程的质量控制，并参加艾滋病确认中心实验室职能工作考核和能力验证，从而提高检验质量。

[1]中国疾病预防控制中心.全国艾滋病检测技术规范(2009年修订版)[S].2009.