糖脂平对糖耐量减低模型大鼠的治疗作用及其机理研究*

廖蔚茜 李桂云 何 泮 景光光 游敏玲 张思为

1广东省深圳市罗湖区中医院（广东深圳518001）

2广东省深圳市人民医院（广东深圳518001）

糖耐量减低（IGT）是糖尿病的一种前期阶段，此阶段发生糖尿病的风险较非IGT人群约高100倍，在此阶段防治2型糖尿病具有十分重要的意义［1］。中药复方糖脂平经过临床实践证实能有效降低IGT患者血糖，为了探讨其作用机理，本实验观察了糖脂平对实验性IGT大鼠血糖、游离脂肪酸（FFA）、胰岛素敏感指数（IAI）的影响以及对胰岛β细胞的作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料 SPF级雄性SD大鼠90只，5周龄，体质量105～115g，SPF级动物房条件下饲养，自由饮水、摄食。SPF级普通饲料、高糖高脂饲料均由广东省实验动物中心提供。糖脂平由黄连、虎杖、泽泻、炒白术、苍术等组成，药材用不锈钢桶水煎浓缩至125%。链脲佐菌素（STZ）：美国Sigma公司；血糖仪、血糖试纸、阿卡波糖购自拜尔医药有限公司；免疫组化试剂盒及胰岛素（FINS）单克隆抗体、FFA ELISA试剂盒：福州迈新生物技术开发有限公司提供。

1．2 模型制备 IGT模型参照文献［2-3］制备。所有SD大鼠SPF环境饲养，环境温度为20～25℃，湿度56%，自由饮水，间隔12h昼夜规律，喂食时间为每日下午5点至次日上午8点。大鼠适应性饲养1周后，随机选取10只作为正常对照组，其余进行造模。大鼠喂以高糖高脂饲料，4周后，禁食不禁水12h，测体质量，一次性腹腔内注射 STZ（25mg/kg，溶于 0．1mmol/L柠檬酸缓冲液，pH4．4，终浓度为 4%，冰浴，现配现用，5min 内用完），正常对照组大鼠按0．1mL/100g剂量腹腔注射柠檬酸缓冲液（0．1mmol/L，pH4．4）。 于注射 STZ 6d 后行口服葡萄糖耐量实验（OGTT），给予50%葡萄糖注射液2g/kg灌胃，剪尾测其空腹血糖及餐后 2h 血糖， 以 7．8mmol/L＜2h PG＜11．1mmol/L 判定 为IGT大鼠模型。

1．3 分组及给药 造模成功后动物随机分为正常对照组（等量生理盐水）、模型对照组（等量生理盐水）、糖脂平组（给予糖脂平2mL/100g）、阿卡波糖组（100g高脂饲料中加入阿卡波糖40mg喂养）、联合组（给予糖脂平及阿卡波糖），每组10只，灌胃给药，每日1次，连续治疗8周。

1．4 标本采集 连续治疗4周后行OGTT测2hPG，治疗8周后再次行OGTT测2hPG，次日禁食不禁水12h，摘眼球取血（静置2h，3000r/min离心 20min，取上清液），用 2%戊巴比妥钠40mg/kg肌肉注射麻醉大鼠，充分暴露手术视野，牵开肠管，显露胰管及胆总管，1号丝线于胆管紧靠肠壁处结扎，肝侧胆总管内插入5号头皮针，丝线结扎固定，切开胸腔，破心放血处死，经胆总管内插管逆行注入预冷的4%多聚甲醛溶液8～10mL（视个体大小而定），使胰腺膨胀，迅速摘取整个胰腺，移入预置4%多聚甲醛固定液中。

1．5 检测方法 采用血糖仪测定血糖；放射免疫法测定FINS含量；ELISA法测定FFA，具体操作严格按照试剂盒说明书进行。按文献［4］方法计算IAI。

1．6 胰岛β细胞HE染色、免疫组织化学染色及分析 大鼠胰腺石蜡包埋切片，切片厚度5μm，使用鼠抗胰岛素单克隆抗体和超敏反应试剂盒给胰腺石蜡切片染色，步骤参照试剂盒说明。免疫组化阳性信号（胰岛素阳性）为棕黄色颗粒；同时大鼠胰腺切片做常规HE染色，进行形态观察。

1．7 统计学处理 应用SPSS 1．15统计软件。 数据采用（±s）表示，组间比较采用One-way ANOVA方差分析。P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结 果

2．1 各组治疗前后2hPG水平比较 见表1。治疗4周后大鼠血糖开始下降，与模型对照组比较，联合组、阿卡波糖组大鼠血糖明显降低（P＜0．05）；治疗 8周后，糖脂平组、联合组、阿卡波糖组与模型对照组比较血糖明显降低（P＜0．05），与正常对照组比较差异无统计学意义。

2．2 各组FPG、FFA及胰岛素指标比较 见表2。治疗8周后，与正常对照组相比，模型组大鼠血清FFA、FINS水平均明显升高（P＜0．01）， IAI显著降低（P＜ 0．01）；与模型组比较，糖脂平组、联合组、阿卡波糖组血清 FFA 水平明显降低（P＜0．05），IAI显著升高（P＜0．05）；联合组与阿卡波糖组比较，FFA、FINS 及 IAI差异有统计学意义（P＜0．05）。

表 1 各组治疗前后2hPG水平比较 （mmol/L，，±s）

表 1 各组治疗前后2hPG水平比较 （mmol/L，，±s）

与模型对照组比较，*P＜0．05，**P＜0．01。 下同。

组 别 n 治疗前 治疗4周 治疗8周正常对照组 10 6．14±0．48 6．18±0．72 6．20±0．56模型对照组糖脂平组联合组10 10 10阿卡波糖组10 8．71±1．86 9．13±1．06 8．72±1．61 8．69±1．63 8．79．±1．93 8．49±1．70 6．90±1．17*7．25±1．67*8．91±1．43 7．01±2．29*6．25±1．27*6．46±1．45*

表2 各组FPG、FFA及胰岛素指标比较 （±s）

表2 各组FPG、FFA及胰岛素指标比较 （±s）

与联合组比较，△P＜0．05。

组 别 n正常对照组 10模型对照组 10 IAI-4．27±0．17**-2．15±0．35-3．30±0．35*-4．18±0．30*△-3．79±0．27*FPG（mmol/L）5．64±0．32 5．86±0．43糖脂平组 10联合组 10 5．46±0．29 4．98±0．45阿卡波糖组 105．06±0．55 FFA（pg/mL）23．10±4．16**29．82±5．56 23．27±4．70*21．29±5．06*△25．04±4．50*FINS（mU/L）4．15±0．45**8．03±3．21 5．54±1．73 4．80±1．27△5．21±1．47

2．3 病理学观察 正常对照组胰岛为圆形、椭圆形细胞团，胰岛数及胰岛内细胞数较多，胞质丰富，核圆居中，可见大量β细胞呈棕色的胰岛素阳性表达；模型对照组胰岛及胰岛内细胞数量明显减少，胰岛素阳性表达区域明显减小，胰岛细胞形态不规则，明显萎缩，胞浆减少，核大小不等、形态不一，部分核固缩；糖脂平组、联合组、阿卡波糖组胰岛数量及胰岛内细胞数量较模型对照组增多，其中以联合组增多明显，细胞的排列趋于规整，细胞形态、大小基本正常，胞浆增多，但也有少量细胞呈萎缩状，胰岛素阳性表达增强。

3 讨 论

目前大多数学者认为，IGT阶段糖代谢出现异常，已存在着胰岛素抵抗（IR）和胰岛β细胞分泌胰岛素功能的轻度缺陷，胰岛素抵抗和胰岛β细胞分泌胰岛素不足是2型糖尿病发病的基础［5］。其中最主要的因素是骨骼肌、脂肪和肝脏的IR，以及β细胞的数量的减少和β细胞的功能性降低。研究表明，FFA的毒性损害作用与IR和胰岛细胞分泌功能障碍均有密切关系，在IR的发生机制中起着关键性的作用［6］。

从中医学角度，我们认为 IGT的发病以气阴亏虚，恣食膏粱，痰湿内生，化热生瘀，痰毒、瘀毒内生，耗气伤阴为其主要的病因病机，而以“毒、浊、瘀、虚”为其病机关键，故以“解毒化痰，补虚活血”立法组方。临床观察表明，糖脂平对IGT患者有一定的降糖、降脂作用，而本实验结果亦显示糖脂平组、阿卡波糖组及联合组在治疗8周后血糖、FFA均有降低，IAI均有改善，但以联合组更为明显。糖脂平的作用机理可能是通过改善脂代谢，增加胰岛素活性并修复和保护胰岛β细胞，从而发挥降糖、改善IR的作用。同时，胰岛病理检查结果表明：糖脂平具有保护和修复胰腺组织中的胰岛，使胰岛β细胞相对增加的功能，从而推测糖脂平可能亦通过减少胰岛细胞凋亡，改善胰岛细胞的功能，从而有效发挥药物降低血糖的作用。其机制可能涉及到与代谢因素相关的多个环节，有待进一步深入研究。

［1］ 杨文英．2型糖尿病的防治势必超前并落实在糖耐量减低阶段［J］．辽宁实用糖尿病杂志，2004，12（2）：3-5

［2］ Song Zhen Yuan，Deaciuc I，Zhou Zhan Xiang，et al．Involvement of AMP-activated protein kinase in beneficialeffectsofbetaineon highsucrose diet-induced hepatic steatosis［J］．Am JPhysiol Gastrointest Liver Physiol，2007，293（4）：894-902.

［3］ Sivabalan S，Renuka S，Menon V P．Fat feeding potentiates the diabetogenic effect of dexamethasone in wistar rats［J］．Int Arch Med，2008，23（1）：1-7

［4］ 李光伟，潘孝仁，Limioja，等.检测人群胰岛素敏感性的一项新指标［J］．中华内科杂志，1993，32（10）：655-659

［5］ 李光伟.胰岛素抵抗和β细胞功能不良在2型糖尿病发病上的作用［J］ .中华内分泌代谢杂志，2002，18（3）：250-251

［6］ Monti LD，Landoni C，Setola E，et al.Myocardial insulin resistance associated with chronic hypertriglyceridemiaand increased FFA levels in Type2 diabetic patients［J］.Am JPhysiolHeartCirc Physiol， 2004，287（3）：1225-1231.