土茯苓对肾性高血压大鼠血压的调节作用和机制

王德军，张利棕，方明笋，周卫民，寿旗扬，蒋剑平，蔡月琴，朱科燕，陈民利

（1.浙江中医药大学动物实验研究中心/比较医学研究中心，杭州，310053；2.浙江省中医院制剂室，杭州 310053）

高血压病（essenital hypertension，EH）是一种常见病、多发病，是引起冠心病、脑卒中、肾功能衰竭的最危险因素。目前，治疗高血压的药物具有显效快、疗效明确等优势，但同时其也有副作用大、血压变化过快等缺点。因此积极寻找作用缓和，能通过多途径、多靶点调节血压，且降压平稳，副作用小的降压药物具有十分重要的意义。

土茯苓是百合科植物光叶菝葜（Sm ilax glabra Roxb.）的干燥根茎，有实验证实土茯苓苷具有β-受体阻滞样作用［1］，我们前期土茯苓药效筛选试验也发现其有增加NO合成的作用［2］，根据高血压病发病机理，因此推测其可能对高血压具有治疗和改善作用，但目前未见土茯苓治疗高血压的报道。为此本研究利用两肾两夹肾性高血压大鼠（renovascular hypertensive rats，RHR），来探讨土茯苓对RHR血压及血管活性物质的影响，为土茯苓防治EH的临床应用提供实验和理论依据。

1 材料和方法

1.1 药物和试剂

土茯苓，购自浙江中医药大学附属第二门诊部，批号：20100501，经浙江中医药大学中药资源室鉴定；卡托普利片（ACEI剂），2004031，12.5 mg/片，中美上海施贵宝制药有限公司；一氧化氮（Nitric Oxide，NO）试剂盒：批号20100816，南京建成生物工程研究所有限公司；心房利纳肽（atrial natriuretie peptide，ANP）、内皮素（endothelin，ET）、降钙素基因相关肽（clcitonin gene-related peptide，CGRP）和血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）ELISA试剂盒，R＆D，批号分别为E1000087、1000278、1003014、1000734。

1.2 实验动物

SD大鼠，180～220 g，雄性，数量80只，由中国科学院上海实验动物中心/上海斯莱克实验动物有限公司提供［生产许可证：SCXK（沪）2007-0005］。

1.3 仪器

ALC-NIBP（8道）无创血压测定系统，上海奥尔科特生物科技有限公司；Varioskan Flash多功能酶标仪，美国Thermo；7020型全自动生化仪，日本Hitachi。

1.4 土茯苓制备

将药材土茯苓饮片4 kg置敞口锅，加入水适量浸没药材，浸泡30 min，加热煎煮至沸后计时，第1次煎煮1.5 h后滤取药液，继续加水适量煎煮，第2次提取1.0 h，第3次0.5 h，合并3次提取液，过滤网过滤，浓缩至2 000 m L（生药含量2.0 g/m L），灌注500 m L盐水瓶，加塞，割口，煮沸消毒30 m in即得，置于4℃保存，用时再用蒸馏水稀释至所需浓度。

1.5 造模、分组、给药和指标测定

取70只体重为180～220 g的雄性SD大鼠，用3%戊巴比妥钠腹腔注射，腹正中纵形切口，依次钝性分离双侧肾动脉，穿入无菌丝线，把直径为0.3 mm的针灸针与肾动脉血管长轴紧贴平行放置，用无菌丝线扎紧肾动脉和针灸针然后抽出针灸针，造成双侧肾动脉狭窄［3］，另取10只大鼠经相同手术过程但未进行肾动脉结扎作为假手术组。手术造模2周后测定血压，以连续3 d收缩压超过150 mmHg为造模成功，筛选出血压接近的50只高血压大鼠，按收缩压分层分为五组，即模型对照组、高（6 g/kg土茯苓）、中（3 g/kg土茯苓）、低（1.5 g/kg土茯苓）剂量组和阳性组（5 mg/kg卡托普利）；各组（含模型组、假手术组）每天经口灌胃相应的药物和生理盐水，连续4周，在1、2、3、4周时测定收缩压（systolic pressure，SBP）、舒张压（diastolic pressure，DBP）、平均压（mean pressure，MBP）和心率（heart rate，HR）。末次给药24 h后，同时禁食不禁水12 h，心脏取血，用硝酸盐还原酶法测血清NO，用ELASE法测定试验大鼠血清中ANP、ET、CGRP和AngⅡ水平。

１.6 统计学方法

计量资料以（x—±s）表示，以P＜0.05为差异显著标志；多组间均数比较用方差分析，以P＜0.05为差异显著标志。以上数据均以SPSS11.0软件进行统计处理。

2 结果

2.1 土茯苓对高血压大鼠收缩压的影响

由表1可见，与假手术组比较，模型组大鼠的实验1～4周时SBP均显著增加（P＜0.01）。与模型组比较，给予高、中、低剂量的土茯苓后，土茯苓三个剂量组大鼠的SBP均有不同程度的降低，其中高剂量组大鼠在给药1～4周时SBP降低明显（P＜0.05，P＜0.01），中剂量组大鼠在给药3、4周时SBP降低明显（P＜0.05），低剂量组大鼠在给药1～4周时SBP有一定程度的下降，但无统计学意义（P＞0.05），SBP的下降幅度与土茯苓呈剂量关系。而给阳性药卡托普利1周后SBP即显著降低（P＜0.01）。

表1 土茯苓对高血压大鼠收缩压（SBP）的影响（mmHg，x—±s，n=10）Tab.1 The effects of Smilax glabra on SBP in the RH rats（mmHg，x—±s，n=10）

表2 土茯苓对高血压大鼠舒张压（DBP）的影响（mmHg，x—±s，n=10）Tab.2 The effects of Smilax glabra on DBP in the RH tats（mmHg，x—±s，n=10）

2.2 土茯苓对高血压大鼠舒张压的影响

由表2可见，与假手术组比较，模型组大鼠的实验1～4周时DBP均显著增加（P＜0.01）。与模型组比较，给予高、中、低剂量的土茯苓后，土茯苓三个剂量组大鼠的DBP均有不同程度的降低，高剂量组大鼠在给药1～4周时DBP降低明显（P＜0.05，P＜0.01），中剂量组大鼠在给药3、4周时DBP降低明显（P＜0.05），低剂量组大鼠在给药1～4周时DBP有一定程度的下降，但无统计学意义（P＞0.05），DBP的下降幅度与土茯苓呈剂量关系。而给阳性药卡托普利1周后DBP即显著降低（P＜0.01）。

2.3 土茯苓对高血压大鼠平均压的影响

由表3可见，与假手术组比较，模型组大鼠的实验1～4周时MBP均显著增加（P＜0.01）。与模型组比较，给予高、中、低剂量的土茯苓后，土茯苓三个剂量组大鼠的MBP均有不同程度的降低，高剂量组大鼠在给药1～4周时MBP降低明显（P＜0.05，P＜0.01），中剂量组大鼠在给药3、4周时MBP降低明显（P＜0.05），低剂量组大鼠在给药1～4周时MBP有一定程度的下降，但无统计学意义（P＞0.05），MBP的下降幅度与土茯苓呈剂量关系，而给阳性药卡托普利1周后MBP即显著降低（P＜0.01）。

表3 土茯苓对高血压大鼠平均压（MBP）的影响（mmHg，x—±s，n=10）Tab.3 The Effects of Smilax glabra on MBP in the RH rats（mmHg，x—±s，n=10）

表4 土茯苓对高血压大鼠心率（HR）的影响（bpm，x—±s，n=10）Tab.4 The Effects of Smilax glabra on HR in the RH Rats（bpm，x—±s，n=10）

2.4 土茯苓对高血压大鼠心率的影响

由表4可见，与假手术组比较，模型组大鼠的实验1～4周时HR有升高的趋势（P＞0.05）。与模型组比较，给予高、中、低剂量的土茯苓及阳性药后，土茯苓三个剂量组和阳性药组大鼠的HR均无明显变化（P＞0.05）。

2.5 土茯苓对RHR血管活性物质的影响

由表5可见，与假手术组比，模型对照组大鼠的ANP、ET、NO均显著增加（P＜0.05，P＜0.01），CGRP显著降低（P＜0.01）。连续4周给予高、中、低剂量的土茯苓及阳性药卡托普利后，与模型组相比，RHR的ANP、ET均有明显的降低（P＜0.05，P＜0.01）；NO有不同程度的升高，其中高、中剂量组升高显著（P＜0.05）；而CGRP、AngII均无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

高血压是由生活、精神、心理和生物等多因素综合作用的结果。目前普遍认为，其可能与血管活性物质（ANP、NO、ET、CGRP）、心血管系统组织局部的肾素-血管紧张素-醛固酮系统（reninangiotensin-aldosterone system，RAAS）等作用引起有关［4］。ANP是由心肌细胞分泌的一类重要的循环激素，通过利尿、利钠、舒张血管和抑制RAAS的途径［5］，起到降低血压作用。一般来说，当血液中ANP含量增高，血压将下降。NO和CGRP是由内皮细胞分泌的舒血管活性物质，ET是缩血管物质，有强烈的缩血管升高血压的作用，NO、CGRP与ET相互拮抗，维持血管的舒缩平衡，一旦平衡被打破，引起血压变化。AngII是RAAS最终的活性物质，其能促进醛固酮的分泌，增加血流量，使小动脉收缩，从而升高血压［6］。

表5 土茯苓对高血压大鼠血管活性物质的影响（x—±s，n=10） Tab.5 The effects of Smilax glabra on the levels of vasoactive substances in the RH rats（x—±s，n=10）

本实验结果显示，模型大鼠的ANP显著增加，这与Kohno M的研究结果相符［7］。这可能由于高血压状态时，机体产生了代偿反应，其可能为了竞争性抑制AngⅡ，阻断AngⅡ的促醛固酮分泌，抑制肾脏分泌肾素，从而使血液中ANP含量大量增加［8］。本实验模型大鼠AngII相对假手术组没有显著改变，其是否与ANP竞争性地抑制有关，以及给药4周后，各给药剂量组包括阳性对照组的ANP含量、血压均呈不同程度的下降，其是否有前后的相互关系，是否与药物减轻机体代偿反应、从而避免失代偿有关，则有待进一步的研究。同时本实验结果也显示，给药4周后，NO显著增加，这与我们前期的实验结果相符［2］。而ET的含量则有不同程度下降，提示土茯苓能不同程度地降低血压，舒张血管可能是其作用机制之一。

［1］阿布拉海提·阿布都拉，周承明，张克锦.赤土茯苓苷对正常和高钾除极豚鼠心室乳头状肌动作电位的影响［J］.中国药理学通报，1999，15（2）：178-181.

［2］王德军，寿旗扬，陈方明，等.土茯苓对糖尿病肾病大鼠肾组织形态学及相关因子ET、NO、TGF-β1的影响［J］.中国中医药科技，2010，17（4）：320-322.

［3］李才.人类疾病动物模型［M］.人民卫生出版社.2008：232.

［4］黄孟军，裴异，方显明.中医药治疗高血压病的作用机制研究概况［J］.中西医结合心脑血管病杂志，2005，3（7）：929 -630.

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［8］李泓，卜秦莉，张静，等.原发性高血压肾素-血管紧张素-醛固酮系统与血浆心钠素水平相关性探讨［J］.天津医药，1990，18：707-710.