人工饲养条件下死亡实验恒河猴肠道病理改变特点分析

赵玺龙，杨举伦，宋蜀伶，徐文漭，潘鑫艳，黎贵芸，李 锋

（1.解放军昆明总医院病理科 实验动物病理检测中心，昆明 650032； 2.云南省灵长类实验动物有限公司，昆明 650216）

实验动物的质量控制是保证实验结果精确的前提，目前主要的烈性传染性致病因素已经得到了有效监控，但是按现有标准检测合格、外观健康的恒河猴，也可能存在一定程度的由自然发病因素导致的病理学病变，并影响到实验动物的饲养和实验结果的评析。国外学者对实验猴等大型实验动物的自发疾病和老化性疾病的研究较为重视［1，2］。国内对实验动物自发病变的研究还很不足，有关实验动物的病理检测资料尚未建立，研究人工饲养条件下实验动物脏器病理变化，有助于我们对实验动物的自发病状况有更科学的认识，对于实验动物质量控制和实验动物应用具有重要意义。

恒河猴是非常重要和珍贵的实验动物，在人类学、医学、药学等研究中具有重要作用［3-6］。肠道是是实验动物最易发生病变的器官之一，也是重要的造模器官和药物实验靶器官，既往文献报道肠道病变是实验猴的主要致死原因之一［7，8］。本课题选取了155只无人为处理干扰因素自然死亡的实验恒河猴，对肠道做了病理剖检和显微镜下组织学观察，以期了解自然死亡实验恒河猴肠道病理改变特点，丰富完善实验猴自发病研究资料。

1 材料和方法

1.1 实验动物

恒河猴肠道组织样品取自云南省地区1998年～2008年有资料记录的155只自然死亡实验猴尸检材料，年龄分布2～20岁，分为幼年组（＜4岁）59只、成年组（4～13岁）35只和老年组（＜13岁）61只，雌性91只，雄性64只。均系在饲养期间非人为因素死亡。对照组为成年健康实验猴肠道组织学切片，取自本课题组前期部分实验材料。本实验所用实验猴来源于云南省灵长类实验动物有限公司【SYXK（滇）2009-0003】。

1.2 解剖固定

实验猴死亡2 h以内解剖，将肠管沿肠系膜剪开，置放于广口玻璃容器中用10％甲醛液固定，黏膜面朝向容器液面，并在表面覆盖纱布，固定液量约为3 000 mL，固定时间不小于72 h。

1.3 取材

观察肠管浆膜面、黏膜面色泽、质地。检查是否有肿物、实变、坏死、出血等病变，常规病理方法取材，取材切面与肠腔长轴平行，组织块长约为2.5 cm，宽度约为0.3 cm，厚度为肠壁全层厚度，组织块平置于包埋筐，包埋面向下。

1.4 脱水制片

Shandon Excelsior ES脱水机脱水；常规石蜡包埋；Microm HM325切片机切片（厚度设定为2μm）； Leica auto stainer XL染色机HE染色、封片。

1.5 组织学观察

在Olympus BX41光学显微镜下，按4倍、10倍、40倍顺序观察。2名有经验的病理医师显微镜下分别观察并记录病变。所描述病变不同时请第三方上级医师会诊确定。

2 结果

2.1 实验猴肠道病变检出率

155例恒河猴中58例发现肠道病变，检出率为37.41％，其中幼年组发生率为28.81％，成年组34.29％，老年组47.54％。随年龄增长，肠道病变率增加，见表1。

表1 实验猴肠道病变例数（n）及发生率（％）Tab.1 The distribution of intestinal lesions in the rhesusmonkeys（n，％），P=0.05

2.2 实验猴肠道主要病理改变特点

本组实验猴肠道主要有8种病理改变：

（1）慢性炎：黏膜层见多少不等的慢性炎细胞浸润，主要是淋巴细胞、浆细胞、组织细胞等（图1A）；（2）急性炎：黏膜层多少不等的以中性粒细胞为主的炎细胞浸润，有时在上皮隐窝内有小脓肿形成，常伴有上皮细胞变性坏死、糜烂、溃疡和出血（图1B）；（3）水肿：黏膜水肿，间质稀疏、淡染，固有层腺体间距离增大，小肠黏膜水肿时肠绒毛变粗变短，常伴随有血管扩张充血；（4）上皮细胞坏死：黏膜上皮细胞碎裂，溶解，镜下多呈红染的无定形物，黏膜上皮可出现多少不一缺失，常伴有淋巴细胞、中性粒细胞的浸润；（5）糜烂：黏膜表面上皮细胞变性坏死，并伴有较多量的中性粒细胞为主的炎细胞浸润，黏膜表面可见急性纤维素性渗出物，间质常常水肿伴充血、出血（图1C）；（6）溃疡：典型的溃疡改变有四层结构，表面为以中性粒细胞为主的炎性渗出；其下为坏死物（有时不可见），坏死层下为肉芽组织，最下层为瘢痕层。溃疡旁黏膜一般呈慢性炎伴急性炎，上皮常有修复性增生，有时细胞有不典型性（图1D）；（7）穿孔：溃疡严重时可深达浆膜，穿透肠壁，显微镜下可见溃疡累及全层达浆膜，周围的组织可见纤维素性坏死渗出物，外围为肉芽组织。浆膜外肠系膜可见急性炎细胞浸润伴坏死，慢性包裹后可呈肉芽肿性炎改变（图1E、1F）；（8）寄生虫：虫体常位于肠黏膜下、浆膜外，虫体周围纤维组织程度不一的增生，常伴有肉芽肿性炎，有时可见钙化。虫卵一般在浆膜层，数量较多的虫卵聚集成结节，被纤维组织包裹，可伴有钙化（图1G、1H）（图1见彩插6）。

3 讨论

2.3 实验猴不同年龄组肠道病变检出结果及分析

图2为实验猴不同年龄组肠病变类型分布基本相同，病变幼年组检出8种、成年组7种，老年组8种。各组间病变发生率差异不大，以老年组最高。各组均以急性炎发病率最高：老年组为21.31％，成年组17.14％，幼年组18.64％；急性肠炎引起的相关病变各组病变率基本接近，黏膜水肿和出血病变检出率成年组略低与其他两组。不同年龄组间卡方检验结果未显示不同年龄组间差异有显著性（表 2）。

肠道是最重要的消化器官，胃肠道与外界相通，受饮食、环境等外源性因素影响较大，较易出现病变。本组资料观察到实验猴肠道病变率较高（37.40％），主要病理改变有慢性肠炎、急性肠炎、黏膜水肿、出血、糜烂、溃疡、穿孔、寄生虫（表2、图1）。死亡实验猴肠道病理损害严重并有致死性，既往关于实验猴肠道病理改变的专题研究罕见报道，程树军等［9］对65只实验恒河猴消化系统进行了病理组织学观察，将肠道病变分别按炎细胞浸润、黏膜上皮变性、黏膜充血、色素细胞沉积、肠脓肿5种病变进行研究分析。本实验更强调疾病的探讨，因为实际情况中实验猴消化道与外界相通，正常状态下也存在一定程度的病理变化，如散在的浆细胞、淋巴细胞、中性粒细胞浸润，局部的充血、变性等，这些病理改变较轻微，病变可逆，不影响肠道正常生理功能对于绝大多数的动物实验不影响对其实验结果的合理评价，我们认为可界定为“正常动物组织的改变”。本实验以疾病为索引探讨肠道病理学改变，以更科学地评价实验猴肠道自发病变。实验猴肠道组织学结构与人基本相同［10］，由内向外分为黏膜、黏膜下层、肌层和外膜。肠道病变与人病变相似，对实验猴肠道疾病分类和病理改变判别主要依据《诊断病理学》［11］。

图2 肠道病变不同年龄组分布柱形图Fig.2 Histogram of different intestinal lesions in the different age groups

表2 各种肠道病变在各年龄组的检出例数（n）及发生率（％） Tab.2 The number and rate of intestinal lesions in different age groups（n，％）

消化道是开放性的系统，本身易受食物、环境等因子的影响，也与机体的消化吸收功能密切相关。既往有文献报道［7，8］实验猴尸检中肠炎病例最多。本组资料显示死亡实验猴肠道病变不同年龄组肠病变类型分布基本相同，病变发生率老年组最高，肠道病变率随年龄增长而增高，以慢性病变增高为主，急性病变各组间差异不大。各组均以急性肠炎发病率最高，组间卡方检验显示不同年龄组肠道病变无明显差异。肠道病变最重要的为急性肠炎，急性肠炎表现为黏膜多少不一的以中性粒细胞为主的炎细胞浸润，死亡实验猴急性肠炎病理损害常常较重，常伴有黏膜水肿、充血出血，严重时黏膜上皮坏死脱落，形成糜烂或溃疡，病情严重的可见穿孔。急性肠炎在各组实验猴的发生率均较高：幼年猴组为18.64％，成年组17.14％，老年组21.31％。与我们在呼吸系统观察结果比较，本组资料观察结果急性肠炎发病率为20.00％，高于呼吸系统支气管肺炎的发病率（18.71％），是呼吸、消化两大系统发病率最高的疾病之一，也是病理改变程度最严重，导致实验猴死亡的主要原因之一。急性肠炎最常见的病因为由志贺氏杆菌和沙门氏杆菌感染，患病猴一般表现为［12］腹泻、脓血便，严重时引起脱水、衰竭和中毒。大体检查主要改变为肠壁水肿、增厚、肠黏膜糜烂、溃疡，显微镜下主要表现为急性炎和充血、糜烂，病理检查对肠道病变诊断有重要提示意义，如沙门菌病、结核杆菌病显微镜下分别表现为伤寒肉芽肿和结核肉芽肿，小肠结肠炎耶尔森菌病病理检查可见纵行溃疡、急性炎及化脓性肉芽肿等［13］，需要指出的是由于肠道疾病病理学变化有时缺乏特异性，对病变的评析判读有一定的局限性，对实验猴肠道病变的检测和评判应注意采集实验室病原学检查资料。其他需要注意的病变有溃疡和寄生虫，溃疡不仅严重影响患病猴的进食消化，还会伴发消化道出血、穿孔，导致患病猴死亡。通过实验动物工作者不懈的努力和实验猴饲养环境的改善和科学化质控，实验猴寄生虫感染率已经得到有效控制，本组实验猴胃肠道寄生虫发病率为4.52％，与既往研究报道［14，15］结果相比显著降低。

随着实验猴饲养基地条件的不断改善和饲养水平的提高，实验猴死于消化道病变的比例已有下降［16］，尤其是寄生虫感染率已经明显下降，但肠道病变仍然是实验猴最主要的致死性原因之一。消化道病变的人工预防、干预的范围较大，在实验猴饲养过程中，应继续加大环境管理、饲养管理，避免内部感染，患病猴及时隔离治疗。有研究报道实验猴肠炎治疗粪便转好后，行病理检查仍见到肠黏膜充血水肿现象［16］，这提示实验猴繁育过程中，不能仅以粪便的好坏作为肠炎治愈的判断标准，应适当考虑其达到痊愈的恢复过程中的治疗保护。

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