抵抗素蛋白在子宫内膜异位症患者中的表达及意义

马金红，王丹波

（中国医科大学附属盛京医院妇产科，沈阳 110004）

抵抗素蛋白在子宫内膜异位症患者中的表达及意义

马金红，王丹波

（中国医科大学附属盛京医院妇产科，沈阳 110004）

目的检测抵抗素蛋白在子宫内膜异位症患者异位子宫内膜、在位子宫内膜和正常子宫内膜中的表达情况。方法 采用免疫组织化学SP法检测抵抗素蛋白在异位内膜、在位内膜及正常子宫内膜组织中的表达情况，并分析和比较其表达是否有差异。结果 抵抗素蛋白在异位内膜的表达率及强度均高于在位内膜，差异有统计学意义（P<0.05）。而在位内膜与正常内膜的表达率及强度比较差异无统计学意义（P>0.05）。阳性表达定位于子宫内膜间质细胞的细胞质。结论抵抗素蛋白在子宫内膜异位症的发病中可能起重要作用。

子宫内膜异位症；抵抗素蛋白；子宫内膜；免疫组织化学

子宫内膜异位症（endimetriosis）简称“内异症”。是育龄期妇女的常见病和多发病，近年发病率明显增高。至今内异症的病因及发病机制仍无确切定论。本课题组的前期研究也证明了“在位内膜决定论”［1］，而腹腔内免疫功能的紊乱、炎症及多种细胞因子的分泌失调，为异位子宫内膜存活、种植和生长提供了有利的条件，促进了内异症的发生与发展。抵抗素是新近发现的一种脂肪细胞因子。最初因其具有抵抗胰岛素的作用而被取名为抵抗素，与糖尿病有关。然而，随着对抵抗素研究的广泛开展，发现人类抵抗素由巨噬细胞分泌，与炎症有关。而内异症是炎症性疾病，广泛粘连，许多炎症相关细胞因子在内异症中高表达［2，3］，由此推测抵抗素与内异症发生发展相关。目前研究发现，子宫内膜异位症患者腹腔液及血清中抵抗素含量增高［4，5］。本文通过检测内异症患者在位及异位子宫内膜中抵抗素蛋白的表达，旨在进一步探讨抵抗素在内异症发病中的可能作用。

1 对象及方法

1.1 研究对象

选择2008年10月～2009年12月我院因子宫内膜异位症行开腹或腹腔镜手术同时行子宫切除患者 50例为研究组，年龄 31～50岁（44.19±4.42）岁；体质量指数 19～22（20.65±0.56）。选择同期在我院因CINIII行子宫切除的患者30例为对照组，年龄31～46岁［（42.56±3.47）岁］；体质量指数 19～24（21.46±0.43）。2组年龄差异无统计学意义（P>0.05），体质量指数差异无统计学意义（P>0.05）。2组基本限制条件为：月经周期正常，而且根据月经周期选择分泌期；至少3个月未接受激素类药物治疗；无自身免疫性疾病、肝脏疾病、糖尿病或恶性肿瘤；同时排除了生殖器官发育不良，术中证实无急性炎症及其他盆腔病理改变。所有患者均经临床和病理确诊，并经伦理委员会批准，签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集：术中留取实验组患者异位内膜及在位内膜，对照组子宫内膜，所有标本常规用10%甲醛溶液固定，脱水及石蜡包埋，切成4μm厚的石蜡切片染色，光镜下观察组织学形态，筛选组织标本，保证异位病灶中存在异位内膜腺体或间质细胞。

1.2.2 实验方法：采用S-P免疫组化法。兔抗人多克隆抵抗素抗体的工作浓度为1∶200。S-P试剂盒购于自福州迈新生物技术开发有限公司，抵抗素抗体购于美国Santa Cruz公司。阴性对照为PBS液代替一抗，阳性对照为已知阳性表达作为对照。具体操作步骤按试剂盒说明进行。

1.2.3 结果判定：抵抗素的阳性染色为子宫内膜间质细胞胞浆中出现棕黄色或褐色颗粒。根据细胞染色强度和染色细胞所占面积积分之和进行判断。染色强度评分标准：不着色为0分，黄色为1分，棕黄色为2分，黄褐色为3分。染色面积评分标准：无细胞染色为0分，≤25%为1分，26%-50%为2分，≥50%为3分。2种评分相加，0-1分为（-），2分为（+），3-4分为（++），5-6分为（+++）。阳性表达率＝（+～+++级的例数/各组总例数）×100%

1.2.4 统计学方法：实验结果采用SPSS 13.0软件进行检验。阳性率比较采用χ2检验，表达强度比较用Wilcoxon秩和检验，检验水准为0.05。

2 结果

抵抗素蛋白在异位内膜的表达率及强度均高于在位内膜，差异有统计学意义（P<0.05）。而在位内膜与正常内膜的表达率及强度比较差异无统计学意义（P>0.05）。（表 1）。

表1抵抗素蛋白在正常子宫内膜及内异症在位、异位内膜中的表达T a b.1T h e e x p r e s s i o n o f R e s i s t i n i n n o r ma l，e u t o p i c a n d e c t o p i c e n d o me t r i a l t i s s u e s Resistin 0-1（-） 2（+） 3-4（++） 5-6（+++）Normal endometrial tissues 30 27 3 0 0 10Eutopic endometrial tissues 50 40 10 0 0 20Ectopic endometrial tissues 50 22 7 10 11 56.0Group n Positive rate（%）

3 讨论

抵抗素属于（RELMs）家族，也就是早期发现的FIZZ（FIZZ）家族，因此抵抗素也被称为FIZZ3。人的抵抗素基因位于19号染色体，其mRNA全长为476个碱基，编码108个氨基酸残基组成的抵抗素蛋白。目前人类抵抗素与胰岛素抵抗的关系尚未明确，而人抵抗素主要在外周血单核细胞中表达，单核细胞转化为巨噬细胞时表达和分泌明显增加［6］，提示人类抵抗素的作用可能主要与炎症有关［7］。子宫内膜异位症是一种免疫有关的慢性炎症性疾病，而且与炎症相关的细胞因子与内异症的相关性也多有报道，但内异症的炎性反应是原发性改变，还是继发性改变？是异位部位的炎症环境导致内异症发生，还是内异症发生后异位内膜的浸润性生长继发炎性反应等问题尚不明确。内异症的发生与机体免疫功能及腹腔内环境的异常密切相关。逆流入腹腔的子宫内膜组织碎片通过刺激腹膜导致巨噬细胞的数量和活性明显增加，进而促进炎症相关因子的释放［8］，而抵抗素是单核/巨噬细胞其中的关键因子之一。子宫内膜异位症患者异位内膜组织中抵抗素明显升高，一方面，抵抗素可以通过其免疫调节机制及促炎性反应的作用形成网络结构，导致恶性循环，改变了腹腔内环境，有利于炎性细胞在内异症病灶的积聚、炎性反应和黏连形成，有利于异位内膜的维持和增长。另外，抵抗素分子还可以上调内皮细胞血管内皮细胞生长因子（VEGF）、VEGF受体和基质金属蛋白酶（MMP）的表达，同时下调金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）和金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP-2）的表达［9，10］，激活细胞外信号调节激酶 1/2（ERK1/2）和丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）途径的磷酸化作用，促进内皮细胞增殖、迁移并刺激毛细血管形成。抵抗素还能激活人内皮细胞，增加内皮素-1（ET-1）mRNA的表达和蛋白的分泌，促进血管细胞间黏附分子-1（VCAM-1）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和单核细胞趋化蛋白（MCP-1）的表达［11］。而这些细胞因子的作用在内异症发生机制中的作用已经得到公认，因此可以认定，抵抗素在内膜异位症异位病灶的黏附、侵袭，血管形成方面起着重要作用。抵抗素作为一种炎性因子，可能在子宫内膜异位症的发生、发展过程中起着十分关键的作用。

内异症发生机制研究中，“在位内膜决定论”是近年来较被关注的理论之一，即内异症发病与否取决于患者的在位内膜基因表达的差异。但本研究显示，抵抗素虽然在内异症异位病灶中高表达，但在位内膜中其表达未见增强，提示内异症中炎性反应很可能是继发改变，而并非内异症发生的始动因素，这一结论尚需扩大样本进一步研究证实。而关于抵抗素在子宫内膜的局部表达国内外尚属首次报道。

［1］Xu YL，Wang DB，Liu QF，et al.Silencing of cofilin-1gene attenuates biological behaviours of stromal cells derived from eutopic endometria of women with endometriosis［J］.Human Reproduction，2010，25（10）：2480-2488.

［2］Slater M，Cooper M，Murphy CR.Human growth hormone and interleukin26upregulated in endometriosis and endometriod adencarcinoma［J］.Acta Histochem，2006，108（1）：3203-3210.

［3］Janelle L，Yasemin S，Umit AK，et al.Regulation of interleukin28expression in human endomet rial endothelial cells：a protein mechanism for the pathogenesis of endometriosis［J］.Obstetrics and Gynecology，2005，90（3）：1805-1811.

［4］梁新惠，赵艳丽，班开斌，等.子宫内膜异位症患者腹腔液及血清中抵抗素与超敏C反应蛋白的含量变化及意义［J］.中华临床医师志，2009，3（10）：1737-1740.

［5］Yi KW，Shin JH，Park HT，et al.Resistin concentration is increased in the peritoneal fluid of women with endometrios［J］.Am J Reprod Immunol，2010Nov，64（5）：318-323.

［6］Yang RZ，HuangQ，Xu A，et al1Comparative studies of resistin exp ression and phylogenomics in human and mouse［J］.Biochem Biophys Res Commun，2003，310（3）：927-935.

［7］SilswalN，Singh AK，Aruna B，et al1Human resistin stimulates the pro-inflammatory cytokines TNF-alpha and IL-12in macrophages by NFkappaB-dependent pathway1［J］.Biochem Biophys Res Commun，2005，334（4）：1092-1101.

［8］Cao WG，Morin M，Metz C，et al.Stimulation of macrophage migration inhibitory factor expression in endometrial stromal cells by interleukin 1，beta involving the nuclear transcription factor NF kappaB［J］.Biol Reprod，2005，73（3）：565-570.

［9］Mu H，Ohashi R，Yan S，et al.Adipokine resistin promotes in vitro angiogenesis of human endothelial cells ［J］.Cardiovasc Res，2006，70（1）：146-157.

［10］Di Simone N，Di Nicuolo F，Sanguinetti M，et al.Resistin regulates human choriocarcinoma cell invasive behaviour and endothelial cell angiogenic processes［J］.J Endocrinol，2006，189（3）：691-699.

［11］Verma S，Li SH，Wang CH，et al.Resistin promotes endothelial cell activation：further envidence of adipoline-endothelial interaction［J］.Circulation，2003，108（6）：736-740.

（编辑孙宪民，英文编辑刘宝林）

Expression of Resistin Protein in Patients with Endometriosis and Its Significance

MA Jin-hong，WANG Dan-bo
（Department of Gynaecology and Obstetrics，Shengjing Hospital，China Medical University，Shenyang 110004，China）

ObjectiveTo examine expression of resistin protein in patients with and without endometriosis.MethodsThe expression of resistin protein was detected in the normal，ectopic，eutopic endometrial tissues in women with andwithout endometriosis via immunohistochemistry SP method.The different expression was analyzed.ResultsThe expression rate and intensity of resistin was higher in ectopic endometrium of patients with endometriosis than that of in the eutopic endometrium group（P<0.05）.However，The expression rate and intensity of resistin of the eutopic endometrium in patients with endometriosis and of that in the endometrium of women without endometriosis was no significant difference （P>0.05）.Resistin staining was located in the cytoplasm of endometrial stromal cells.ConclusionThe expression of resistin in the ectopic endometrium might play a crucial role in the pathogenesis of endometriosis.

endometriosis；resistin；endometrium；immuneohistochemistry

R711.71

A

0258-4646（2011）05-0425-03

doiCNKI：21-1227/R.20110523.1813.005

http：//www.cnki.net/kcms/detail/21.1227.R.20110523.1813.005.html

国家自然科学基金资助项目（30471816）；辽宁省科技计划项目（2009225026）

马金红（1969-），女，副主任医师，硕士研究生.

王丹波，E-mail：wangdb@sj-hospital.org

2011-02-18

网络出版时间：2011-05-1815：25