小儿IgA肾病血管内皮细胞生长因子及其受体的表达

朱伟峰

（广东省惠东县人民医院，广东 惠州 516300）

IgA肾病是以血尿和弥漫性肾小球系膜区IgA沉积为特征的肾小球疾病，是儿童肾小球疾病中最常见类型，也是导致慢性肾衰的重要原因之一[1]。肾小球内皮细胞作用是维护肾小球血管壁的完整性。肾小球内皮细胞的损伤与肾小球的硬化密切相关[2]。血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）通过与内皮细胞上特异性受体VEGF2R2结合发挥效应，其作用为增强内皮细胞的通透性同时促进其增生和迁移。本研究采用免疫组织化学法观察IgA肾病患儿肾组织中的VEGF和flk21的表达，来说明VEGF和VEGF2R2（flk21）在IgA肾病的病理机制中发挥的作用。

1 资料与方法

1.1 对象

IgA肾病患儿21例，男童12例，女童9例，年龄3～15岁，平均年龄7.8岁。所有患儿均行肾活检术，肾组织病理报告符合IgA肾病诊断标准。根据肾组织病理改变的程度分为轻、中、重3组。每组7例。

1.2 免疫组织化学染色

所有肾活检组织行VEGF和flk21染色，步骤如下：将组织蜡块切为厚度2μm的切片，脱蜡后用3%的过氧化氢阻断过氧化物酶5min。经抗原修复10min后血清封闭20min。再加入兔抗人VEGF多抗和小鼠抗人flk21单抗，在4℃下孵育过夜。然后经PBS漂洗完成后加入由生物素标记的山羊抗兔、山羊抗小鼠IgG抗体，室温孵育20min。PBS漂洗后，加入辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素，室温孵育20min。再经PBS漂洗后DAB2H2O2显色，苏木素复染，最后脱水、透明、中性树胶封片。空白对照组不加入一抗，其他步骤同上。

1.3 观察指标

每个切片在400倍视野下随机选取10个肾小球，计算VEGF和flk21阳性面积所占肾小球面积百分比，取其均值为结果指标。然后计算每个肾小球内flk21阳性血管袢数，也取其均值为衡量肾小球微血管密度的结果指标。

1.4 统计学处理

应用SPSS13.0软件对数据进行处理，采用单因素方差分析和直线相关分析方法，数值以均数±标准差表示。

2 结 果

2.1 小儿IgA肾病VEGF、flk21的表达分布及相关分析

中度病变组肾小球内VEGF和flk21在表达最多，在重度病变组表达最少，两组比较有统计学意义（P＜0.05）。重度病变组肾小球微血管密度最少（P＜0.05），肾小球内VEGF表达随肾小球微血管密度减少而降低（P＜0.05），见表1。

2.2 免疫组织化学结果与临床指标的相关分析

轻、中度病变组VEGF、flk21的表达与患者24h尿蛋白定量呈正相关（r=0.431，P＜0.05）；重度病变组与患儿24h尿蛋白定量无相关性。3组VEGF、flk21的表达与患儿的血压、血肌酐水平无相关性。

3 讨 论

表1 21例IgA肾病患儿免疫组织化学结果分析（±s）

表1 21例IgA肾病患儿免疫组织化学结果分析（±s）

注：*与其他两组相比P＜0.05

组别 VEGF （%） flk21 （%） 微血管密度/每肾小球轻度 13.71 ±1.8 23.64±5.1 27.32±2.1中度 16.93 ±2.4 26.17±4.3 36.54±3.2重度 9.85 ±2.16* 16.82±2.6* 14.77±2.3*

IgA肾病的特征是免疫球蛋白A沉积在肾小球内。其病理表现多样，几乎表现所有原发性肾小球肾病的病理变化[3]。研究显示，VEG可减少肾小球基底膜阴离子数，并诱导肾小球内皮细胞小窗形成，其通过受体flk21发挥作用[4]。本研究结果显示，中度病变组肾小球内VEGF和flk21在表达最多，在重度病变组表达最少，两组比较有统计学意义（P＜0.05）。FOSTER等[5]发现，正常情况下，VEGF通过自分泌方式调节足细胞内钙离子平衡，提高肾小球足细胞的存活率。病理情况下，VEGF介导单核吞噬细胞活化，大量毒性物质造成足细胞的损伤和死亡[6]。本研究结果显示，在轻、中度病变，IgA肾病患儿24h尿蛋白定量与肾小球VEGF和flk21的表达呈正相关（r=0.497，P＜0.05），表明VEGF增加肾小球基底膜对血浆蛋白通透性，促使蛋白尿的形成。而在重度病变，24h尿蛋白定量与VEGF和flk21的表达无明显相关性，分析其原因可能是随着病情发展，膜屏障被破坏。本研究结果表明重度病变时肾小球内VEGF表达最少并且微血管密度也最少，提示VEGF减少导致的肾小球内皮细胞增殖修复能力降低。综上所述，本研究表明VEGF在小儿IgA肾病的发病进展过程中起关键作用，其作用机制可能包括内皮细胞通透性增强、血管生成障碍、细胞外基质合成增多等。

[1]关凤军,董晨,贺敏敏,等.罗格列酮对IgA肾病小鼠肾小球核转录因子-κB和活化蛋白-1表达的影响[J].徐州医学院学报,2010,30(12)：834-839.

[2]赵慧娟,孙东立,张林霞,等.药物干预对IgA肾病患者尿液中结缔组织生长因子水平的影响及临床意义[J].中国全科医学,2010,13(33)：3754-3756.

[3]张丽萍,谭会斌,邢玲玲,等.IgA肾病足细胞损伤中的血管内皮生长因子表达及临床意义[J].中国现代医学杂志,2010,20(14)：2162-2165.

[4]潘利敏,王月华,边东,等.肾炎宁对IgA肾病血管内皮生长因子的影响[J].中国中医基础医学杂志,2010,16(2)：135-137.

[5]袁曙光,孙永超,刘映红,等.IgA肾病肾活检组织中血管内皮生长因子的测定及意义[J].广东医学,2008,29(10)：1688-1690.

[6]李华,冯剑.IgA肾病患者血与尿血管内皮生长因子水平变化的临床意义[J].中国中西医结合肾病杂志,2004,5(11)：642-644.