CD44v6和CEA-mRNA定量检测在恶性胸腔积液鉴别诊断中的应用

(广西南宁市邕宁区人民医院检验科,广西 南宁 530200 E-mail：bsnjhfyb@sina.com)

细胞黏附分子CD44广泛分布于细胞表面的跨膜糖蛋白,通常分为标准型CD44(CD44S)、上皮型 CD44(CD44E)和变异型CD44(CD44V)三种。细胞表面黏附分子(CD44v6)是CD44的一种拼接变异体[1]。近几年来研究表明：人类多种恶性肿瘤组织,如胃癌、结肠癌、肝癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、鼻咽癌等普遍存在CD44v6的表达紊乱,而且CD44v6的高度表达与肿瘤进展、转移及预后密切相关。CEA最早分离于人结肠癌,后来研究发现在多种癌症时其血清含量均有明显升高,是一种广谱肿瘤标志物。CEA检测已经广泛应用于临床,随着分子生物学研究的进展,检测肿瘤相关mRNA的表达,对肿瘤的诊断、监测等方面显示出了更高的特异性和敏感性。我们联合检测胸腔积液中的CD44v6和癌胚抗原信使核糖核酸(carcinoembryonic antigen messenger ribonucleic acid,CEA-mRNA)含量,旨在探讨其在胸腔积液性质鉴别和诊断的临床意义,为临床的治疗提供科学的依据。现报告如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 90例病例均为2007年1月～2009年1月因胸腔积液在我院住院,其中恶性胸腔积液51例,男33例,女18例,平均年龄63.5岁。均经细胞学或病理组织学确诊,包括肺腺癌 31例,肺鳞癌 14例,小细胞未分化癌 4例,恶性间皮瘤1例,食管癌伴胸膜侵犯1例。良性胸腔积液 39例,男21例,女18例,平均年龄58.4岁,包括结核性胸膜炎23例,肺炎 12例,漏出性胸腔积液(肝硬化或心衰)4例,患者均依据临床体征、影像学检查、胸腔积液常规生化、细菌培养等检查确诊。两组患者年龄、性别、体重等指标差异无显著性(P＞0.05),具有可比性。

1.2 标本采集 采用胸腔穿刺术采集积液,分5管放置：病理学检查和细胞学检查共用1管,化学免疫检查1管,CEA-mRNA单独1管,均留取2ml;厌氧菌培养留取1ml,结核杆菌检查留取10ml。用肝素抗凝处理后立即送实验室。标本如不能及时检测,应尽快离心分离胸腔积液,提取有核细胞(检测CEA-mRNA)封存于-20℃。

1.3 方法 CD44v6采用酶联免疫吸附试验(ELISA),仪器和试剂由美国RapidBio公司提供,CEA-mRNA采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)进行检测,严格按照说明书进行操作。

1.4 统计学方法 采用SPSS 11.0统计软件包对数据进行分析,计量数据用(±s)表示,采用 t检验,计数资料率的比较采用χ2检验,P＜0.05为差异有显著性。

2 结果

2.1 两组患者CD44v6阳性率比较 恶性胸腔积液组CD44v6阳性 31例,阳性率为 60.87%(31/51);良性胸腔积液组CD44v6阳性5例,阳性率为12.82%(5/39),恶性胸腔积液组阳性率明显高于良性胸腔积液组(χ2=19.2,P＜0.05),见表1。

表1 两组胸腔积液CD44v6阳性率比较

2.2 两组患者CEA-mRNA阳性率比较 51例恶性胸腔积液中有41例为CEA-mRNA阳性,阳性率为80.39%(41/51);39例良性胸腔积液中有3例为阳性,阳性率为7.69%(3/39)。两组阳性率比较差异有显著性(χ2=43.9,P＜0.05),见表2。

表2 两组胸腔积液CEA-mRNA阳性率比较

2.3 两项联合检测对胸腔积液的诊断价值 CD44v6、CEAm-RNA对恶性胸腔积液的诊断灵敏度分别为60.87%(31/51),80.39%(41/51);特异性分别为 87.18%(34/39),92.31%(36/39);两项指标联合检测恶性胸腔积液的灵敏度为64.71%(33/51),特异性为94.87%(37/39)。

3 讨论

胸腔积液是呼吸内科常见疾病,按照性质主要分为良性胸腔积液和恶性胸腔积液,良性胸腔积液主要见于结核性胸膜炎,恶性胸腔积液主要见于肺癌等。胸腔积液的治疗包括全身治疗和局部治疗,两种积液性质治疗方法也有所不同,因此,治疗前鉴别胸腔积液的性质非常重要。通过理学检查、细胞学检查、免疫化学检查和肿瘤标记物检查鉴别两种胸腔积液的性质并不难。

CEA是有代表性的肿瘤标志物,早已用于临床,但因其敏感性较低,不能检测微转移的发生,在很大程度上不能满足应用需要。随着分子生物学研究的进展,检测肿瘤相关mRNA的表达,对肿瘤的诊断、监测等方面显示出了更高的特异性和敏感性。CEA-mRNA仅存在于肿瘤细胞内,是活化了的相关癌基因的转录产物,是指导合成CEA的模板。与CEA这种可以被分泌至细胞外的表达终产物相比,它不能游离于细胞外,是反映被检测部位存在有肿瘤细胞或某些幼稚细胞的指标[2]。另外,肿瘤细胞的转移和扩散是癌症致死的主要原因,癌细胞的转移和扩散必须依靠细胞的黏附和基质的降解。CD44v6恰恰参与细胞的黏附,许多研究表明[3],CD44v6参与了多种肿瘤的浸润和转移。CD44v6在肿瘤侵袭和转移中的作用日益被人们所认识。本资料结果也显示,恶性胸腔积液组CD44v6和CEA-mRNA明显高于良性胸腔积液,两组比较差异有显著性(P＜0.05),两者联合检测特异性和敏感性高于单项检测。因此,作者认为除了对胸腔积液进行常规理学检查、细胞学检查、免疫化学检查和多种肿瘤标记物检查,还联合检测胸腔积液中的CD44v6和CEA-mRNA,并结合临床体征和影像学检查,对恶性肿瘤的早期鉴别诊断、病情监测、疗效评价等方面具有重要的临床应用价值,可以弥补脱落细胞学检测阳性率过低的缺点。

[1]孟龙,张阳德,王一兵.非小细胞肺癌中 VEGF-C、CD44v6的表达及临床意义[J].山东大学学报：医学版,2010,48(4)：84-86.

[2]张凌,熊建萍,钟陆行.荧光定量PCR法检测转移性大肠癌患者化疗前后外周血CEAmRNA的表达及临床意义[J].实用肿瘤杂志,2006,21(5)：443-446.

[3]付根学.CD44v6与恶性肿瘤[J].中国现代医生,2010,48(12)：11-24.