c-fos在子宫内膜异位症中的表达及意义*

于新艳 刘汉生

(泰山医学院附属泰山医院妇产科，山东 泰安 271000)

子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)是育龄期妇女最常见的妇科疾病，发病率为10%～15%，以子宫内膜细胞异位侵袭性生长为主要特征，是引起女性不孕的原因之一[1]。原癌基因fos可调控细胞的增殖、分化、凋亡及浸润等生理过程，在EMT发生发展中起一定作用，但具体机制尚未阐明，且两者间关系研究，国内少有报道。我们采用免疫组织化学染色法检测c-fos在正常子宫内膜、EMT在位及异位内膜中的表达，并半定量分析c-fos表达的变化情况，报告如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

子宫内膜组织标本来源于2008年8月～2009年10月，在泰安市中心医院妇科和生殖科就诊患者。标本采集获得患者及家属知情授权，研究程序符合泰安市中心医院人体试验委员会制定的伦理学标准。

选择腹腔镜手术的EMT患者，年龄27～40岁，平均(34.4±3.73)岁，术后病理证实均为EMT (增生期34份，分泌期20份)，异位内膜均从卵巢子宫内膜异位囊肿取得。按1985年美国生育学会修订的EMT分期标准(r-AFS)，均为Ⅱ～Ⅲ期病例，将EMT病例分为在位内膜和异位内膜组，两组各27例；正常对照组：取自因不孕症来就诊的患者，年龄23～40岁，平均(32.6±3.84)岁，正常子宫内膜26例(增生期12份，分泌期14份)。

1.2 c-fos的检测

标本经常规固定、包埋、切片(4 μm)，HE染色作月经周期分期后，进行免疫组织化学染色(SP法)，检测各组标本中c-fos蛋白表达。按兔抗人c-fos多克隆抗体及免疫组织化学染色SP试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)说明书操作：石蜡切片常规脱腊、水化、抗原修复后，3%H2O2室温15 min，正常山羊血清室温15 min，一抗(1︰400)4℃过夜，二抗, 37℃15 min，链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液37℃15 min，DAB显色，苏木素复染，脱水、透明、中性树胶封片。

1.3 结果判定

采用病理图像分析系统检测c-fos表达情况，染色切片由2名副主任医师以上的病理医师采用双盲法进行观测，细胞呈棕黄色或棕褐色为阳性表达，镜下随机检测选择5个高倍视野，并根据c-fos表达强度分为以下4级[2]：阳性细胞百分率0%为0分，1%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，76%～100%为4分；阳性细胞染色强度：无染色为0分，淡棕黄色为1分，棕黄色为2分，深棕黄色为3分。将两者分数相加为组织总分：0分为阴性(-)；1～2分为弱阳性(+)；3～5分为阳性(++)；6～7分为强阳性(+++)。

1.4 统计学分析

采用PEMS 3.1统计软件进行数据分析：c-fos的表达水平采用绝对数和相对数表示，其在多组间的比较采用Kruskal-wallis 检验(组间多重比较采用Nemenyi检验)；在不同分期的比较采用Wilcoxon两样本比较法，P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 HE染色结果

通过光镜下观察，EMT组增生期异位内膜呈子宫腔状或环形锯齿状封闭式结构，有囊肿形成，腺体数目多，腺体上皮呈柱状，腺腔大，增生现象明显，向间质生长，呈假腺体改变，间质内大量炎细胞浸润，血管数目较多(图1)；分泌期异位内膜呈缝隙状，个别呈环状封闭式结构，多无囊肿形成，异位内膜极薄，呈萎缩性改变，腺体数目少，腺腔小，腺上皮呈扁平或矮立方形，未见假腺体改变，间质细胞小而稀疏，并有纤维化倾向，少量炎性细胞浸润，血管数目较少(图2)。正常对照组内膜未见异常。

2.2 c-fos的表达情况

c-fos主要表达于正常子宫内膜、EMT异位内膜及在位内膜腺上皮细胞核中，少量表达于间质细胞浆。异位内膜及在位内膜组的c-fos蛋白表达明显升高，呈强阳性，与正常对照组比较，两组具有显著性差异(P<0.05)；但在位内膜与异位内膜c-fos表达率未见明显差异；详见表1及图3～6。c-fos蛋白在正常子宫内膜组织、异位症在位内膜组织及异位内膜组织中的表达强度均呈现周期性变化，且增生期表达均明显高于分泌期，见表2。

表1 c-fos在三组子宫内膜的表达水平

注：Hc=11.997，P=0.003；*P<0.05vs正常组。

表2 子宫内膜不同分期c-fos的表达水平

注：经Wilcoxon秩和检验发现，各内膜不同分期c-fos的表达存在统计学差异(P<0.05)。

图1 EMT组增生期异位内膜(HE×400)

图2 EMT组分泌期异位内膜(HE×400)

图3 EMT组增生期在位内膜(SP×200)

图4 EMT组增生期异位内膜(SP×200)

图5 EMT组增生期异位内膜(SP×200)

图6 EMT组分泌期异位内膜(SP×200)

3 讨 论

EMT是指具有生长功能的子宫内膜组织出现在子宫腔被覆黏膜以外的身体其他部位所引起的疾病，是不孕症的一个重要因素，30%～40%EMT患者发生不孕，而临床不孕症有25%～35%由EMT引起[3]。 EMT具有类似恶性肿瘤的侵袭特性，是育龄期妇女最常见的妇科疾病，但其具体侵袭生长机制尚不明确。

早期原癌基因c-fos是myc基因家族成员，其表达产物fos定位于细胞核，通过与ATF蛋白形成异源二聚体组成AP-1转录因子，参与多种细胞因子的基因转录，调控细胞癌变、侵袭、增殖、凋亡等生物学效应[4]。Mendoza-Rodriquez等[5]提出c-fos可通过介导性激素作用，促进子宫内膜上皮细胞增生及月经周期形成 。c-fos主要表达于正常月经周期的增生期腺上皮及腔上皮细胞[6]，我们实验中通过免疫组织化学染色得到类似结果，即c-fos蛋白主要在子宫内膜腺上皮细胞及基质细胞核表达。

正常月经周期，c-fos蛋白在增生期子宫内膜表达水平高于分泌期，在分泌晚期表达水平最低[7]。Hastings等[8]通过动物实验证实，c-fos mRNA和蛋白在EMT的在位内膜及异位内膜均有表达，且均明显升高。我们通过检测正常人子宫内膜、EMT在位内膜和异位内膜，发现EMT组c-fos蛋白表达呈强阳性，与正常对照组比较，两组具有显著性差异，EMT组在位内膜表达c-fos蛋白的阳性率明显高于正常对照组，但EMT组在位内膜与异位内膜c-fos蛋白表达水平未见明显差异；正常对照组、EMT在位内膜组和异位内膜组增生期子宫内膜c-fos蛋白表达水平明显高于分泌期，符合c-fos介导雌、孕激素促进子宫内膜生长周期一致[9]。此外，我们发现在EMT患者中，在位内膜与异位内膜中的c-fos蛋白表达呈正相关性，说明c-fos蛋白可能通过影响子宫内膜降解周围基质和生存能力增强，并容易于在位内膜脱落，随月经血逆流入腹腔后继续存活，并在子宫腔外种植及浸润周围组织，参与EMT的发生发展。

综上所述，c-fos在EMT在位及异位内膜中的表达水平均高于正常子宫内膜，提示c-fos在EMT发生发展中起一定作用，但其确切机制尚不明确，我们将进一步对c-fos参与EMT的机制进行研究。

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