阿折地平片在健康人体内的药动学研究

钟世敬，施爱明，华雯妍，黄明，张全英

（苏州大学附属第二医院药剂科，苏州市 215004）

阿折地平片在健康人体内的药动学研究

钟世敬＊，施爱明，华雯妍，黄明，张全英#

（苏州大学附属第二医院药剂科，苏州市 215004）

目的：建立测定人血浆中阿折地平浓度的方法，并进行人体药动学研究。方法：20名健康受试者随机分成2组，分别单剂量口服阿折地平片8mg和16mg，8mg剂量组同时参与完成多剂量给药试验。采用液-质联用法测定人血浆中阿折地平浓度，并计算单剂量及多剂量给药后的药动学参数。结果：单剂量口服阿折地平片8mg和16mg后，阿折地平的药动学参数分别为：cmax（1.66±0.45）、（4.25±1.38）μg·L－1，tmax（3.50±1.08）、（4.00±1.16）h，t1/2（21.3±8.1）、（19.5±4.0）h，AUC0～72（17.9±6.0）、（49.9±17.5）μg·h·L－1。多剂量口服阿折地平片8mg后，阿折地平的药动学参数为：cmax（2.63±1.41）μg·L－1，tmax（3.50±1.08）h，t1/2（32.5±9.2）h，AUC0～72（43.8±26.4）μg·h·L－1，cav（1.19±0.671）μg·L－1，AUCss（28.4±16.1）μg·h·L－1，波动度（DF）为（1.78±0.49），稳态蓄积比（Rs）为（1.56±0.95）。结论：本试验建立的测定方法灵敏、准确、简便。阿折地平片单剂量给药的药动学参数cmax和AUC0～72随剂量的增加而增加，多剂量给药后阿折地平在体内有一定的蓄积。

阿折地平；液-质联用法；药动学

阿折地平为新一代二氢吡啶类钙离子阻滞药，由日本Sankyo公司与Ube公司联合开发成功并于2003年首次在日本上市，商品名为Calblock®[1]。临床上用于轻度至中度的高血压治疗。其优点是可克服其他抗高血压药如硝苯地平和尼卡地平等起效过快、效力不持久的缺点，在临床上是一种很有优势的长效抗高血压药。服用后可显著降低血压，且对心脏功能无影响，对原发性高血压有较好疗效。本试验通过建立测定血浆中阿折地平浓度的液-质联用（LC-MS）法，观察健康受试者口服阿折地平片后血药浓度的经时变化过程，估算相应的药动学参数，为临床安全、合理用药提供参考依据。

1 材料

1.1 仪器

API-4000型LC-MS联用仪（美国Applied Biosystem Sciex公司）；Agilent 1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；Milli Q纯水机（Millipore公司）；Heraus低温高速离心机（德国贺利氏仪器公司）；Sartorius BP121S型分析天平（德国赛多利斯公司）。

1.2 试药

阿折地平片（上海欣生源药业有限公司，批号：081201）；阿折地平对照品（四川抗菌素工业研究所有限公司，批号：20081101，纯度：100.06%）；内标：地西泮对照品（中国药品生物制品检定所，批号：171225-200302）；甲醇、乙腈、甲酸为色谱纯，其余试剂均为市售分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱及质谱条件

色谱柱：SymmetryShield®RP18（100mm×2.1mm，3.5μm）；预柱：Phenomenex Security GuardTMC18；流动相：甲醇 ∶10mmol·L－1醋酸铵缓冲液（含1%甲酸）＝80∶20；流速：0.3mL·min－1；进样量：10μL；分析时间：2.2min。

电喷雾离子源（ESI），正离子电离模式，多反应离子监测（MRM）的质谱（MS）扫描方式，阿折地平和内标地西泮的母/子离子对分别为m/z584.0→167.1和m/z285.1→193.0；MS参数：碰撞气（CAD）6units，气帘气（CUR）25units，Gas150units，Gas235units，喷雾电压（IS）5500V，离子源温度（TEM）550℃。在此MS条件下，阿折地平和内标地西泮对照品的准分子离子的二级全扫描质谱图见图1。

图1 二级全扫描质谱图A.阿折地平对照品；B.地西泮对照品Fig1 MS/MS spectrumA.azelnidipine control；B.diazepam control

2.2 受试者选择

健康受试者20名，年龄20～25岁，体重50.0～74.5kg，体重指数均在19～24之内。受试者试验前后血尿常规、肝肾功能以及心电图均正常，或为异常但无临床意义。受试者试验前2周及试验期间未服用其他任何药物。试验期间统一饮食。试验前，临床试验方案经苏州大学附属第二医院医学伦理委员会审核批准，并均经受试者签署知情同意书。

2.3 试验方案

本试验采用单周期、开放、平行设计方法，20名受试者随机分为2组，每组10人（男、女各半）。一组受试者于试验的第1天和第4～9天早晨分别空腹口服阿折地平片8mg/片，qd，250mL温开水送服，在试验的第1天和第9天给药前0h和给药后0.5、1、2、3、4、6、9、12、15、24、36、48、60、72h时由前臂静脉避光采血4mL，试验的第7、8天给药前由前臂静脉避光采血4mL；另一组受试者于试验的第1天上午分别空腹口服阿折地平片8mg/片×2，250mL温开水送服，在给药前0h和给药后0.5、1、2、3、4、6、9、12、15、24、36、48、60、72h时由前臂静脉避光采血4mL。采集的所有血样置肝素化离心试管中，立即避光离心（4℃，3500r·min－1）10min，避光分离血浆，于－40℃冷冻避光保存待测。

2.4 血样处理

避光精密吸取血浆200μL至1.5mL离心管中，加入内标（50.0μg·L－1地西泮）溶液50μL，混匀，加乙腈600μL沉淀蛋白，涡旋1min，于16000r·min－1、5℃离心10min，取上清液在“2.1”项色谱及质谱条件下避光进样测定，记录色谱图及化合物的峰面积，采用内标法进行定量。

2.5 测定方法专属性

在本试验条件下，空白血浆中内源性物质不干扰阿折地平和内标的测定，基线噪音小。阿折地平出峰时间在1.1min左右，内标出峰时间在1.6min左右。本方法具有较高的特异性，能准确测定血浆中阿折地平的浓度，色谱图见图2。

图2 专属性试验的色谱图A.空白血浆；B.空白血浆+阿折地平对照品+内标；C.受试者口服阿折地平片8mg 2h后血浆样品+内标；Ⅰ.阿折地平；Ⅱ.地西泮Fig2 Chromatograms of specificity testA.blank plasma；B.blank plasma+azelnidipine+diazepam；C.plasma obtained from a volunteer after oral dose of Azelnidipine tablet 8mg+diazepam；Ⅰ.azelnidipine；Ⅱ.diazepam

2.6 线性关系考察

精密吸取人空白血浆180μL，移至1.5mL塑料离心管中，分别避光加入阿折地平系列标准溶液20μL，配成含阿折地平浓度分别为0.0200、0.0800、0.300、1.00、3.00、10.0、30.0μg·L－1的标准含药血浆样品，按“2.4”项下方法操作并记录色谱。以峰面积比值（Y）对血药浓度（X）作权重回归计算，得回归方程为：Y＝0.0692+0.0007920X（r＝0.9974），权重系数＝1/X2。结果表明，阿折地平血药浓度在0.0200～30.0μg·L－1范围内线性关系良好，最低定量限为0.02μg·L－1。

2.7 精密度、准确度及提取回收率

精密吸取人空白血浆180μL，移至1.5mL塑料离心管中，分别避光加入阿折地平质控工作液20μL，配成含阿折地平浓度分别为0.050、1.25、25.0μg·L－1的标准含药血浆样品，每种浓度平行制备5个样本，阿折地平血浆质控样品低、中、高3种浓度（0.05、1.25、25.0μg·L－1）的日内RSD在5.1%～10.9% 之间，日间RSD在8.6%～11.9%之间，方法回收率（准确度）在97.3%～101.6%之间，低、中、高3种浓度质控样品提取回收率分别为92.3%、97.1%和98.9%，符合生物样品分析要求。

2.8 药动学参数

采用DAS 2.0软件系统进行药动学参数的计算。

2.8.1 单剂量给药。20名受试者单剂量口服2种剂量（8mg和16mg）阿折地平片后，用DAS 2.0软件系统进行统计分析，平均药动学参数见表1，平均药-时曲线见图3。结果表明，2种剂量阿折地平的tmax和t1/2相近；cmax和AUC随剂量增加而增加。2.8.2多剂量给药。10名健康受试者多剂量口服阿折地平片8mg后，在连续给药第4天时阿折地平已达稳态。平均药动学参数见表1；平均药浓-时曲线见图3，平均稳态谷浓度-时间曲线见图4。

表1 20名受试者单剂量及多剂量口服阿折地平片后的药动学参数（n＝10）Tab1 Pharmacokinetic parameters of azelnidipine in 20healthy volunteers after oral single-dose and multiple-dose of Azelnidipine tablets（n＝10）

图320 名受试者单剂量及多剂量口服阿折地平片8mg后的平均药-时曲线Fig3 Mean plasma concentration-time curves of azelnidipine in 20healthy volunteers after oral single-dose and multiple-dose ofAzelnidipine tablets（8mg）

3 讨论

本试验采用LC-MS法进行血浆中阿折地平浓度的测定，血浆样品前处理采用乙腈直接沉淀蛋白法。阿折地平为二氢吡啶类药物，遇光易发生光歧化反应，样品所有操作都应在避光环境下进行。试验结果表明，本方法简便易行、重复性好，专一性强、灵敏度高，能够满足阿折地平血药浓度测定和药动学研究。

图4 平均稳态谷浓度-时间曲线Fig4 Mean steady state trough concentration-time curves of azelnidipine in 20healthy volunteers

本试验考察了受试者单剂量和多剂量口服阿折地平片的药动学特性，试验结果显示，受试者口服阿折地平片后，测得的血药浓度个体差异较大。单剂量口服2种剂量（8mg和16mg）阿折地平片后，药动学参数cmax和AUC随着剂量的增加而增加，2剂量的tmax和t1/2接近，与给药剂量无关。多剂量口服8mg阿折地平片达稳态后，cav为（1.19±0.671）μg·L－1，AUCss为（28.4±16.1）μg·h·L－1，Rs为（1.56±0.95），表明阿折地平在受试者体内存在一定的蓄积现象。

各文献报道的健康人口服阿折地平片的cmax和AUC差异较大[2～4]，本试验结果也与文献有一定差异，推测主要是阿折地平个体差异较大；另外，各厂家生产的阿折地平有可能存在晶型的差异，可能对其体内的吸收也有一定的影响。

[1] 陈爱华，邬 蓉，陶 霞.阿折地平：一种新型二氢吡啶类钙拮抗药[J].中国新药与临床杂志，2006，25（12）：946.

[2] 李 立，丁 黎，马鹏程.阿折地平片的人体药动学研究[J].中国药学杂志，2008，43（13）：1008.

[3] 邹建军，朱余兵，于翠霞，等.液相色谱-质谱法测定人血浆中阿折地平的浓度及其药动学[J].中国新药与临床杂志，2007，26（1）：36.

[4] 梁宇光，高洪志，胡锦超，等.阿折地平在健康人体的药代动力学[J].中国临床药理学杂志，2008，24（4）：323.

Pharmacokinetic Study of Azelnidipine Tablets in Healthy Volunteers

ZHONG Shi-jing，SHI Ai-ming，HUA Wen-yan，HUANG Ming，ZHANG Quan-ying
（Dept.of Pharmacy，The Second Affiliated Hospital of Soochow University，Suzhou 215004，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of Azelnidipine tablet in human plasma and study the pharmacokinetics of Azelnidipine tablet.METHODS：20healthy volunteers were randomly distributed into 2groups and

a single-dose of Azelnidipine tablet 8and 16mg respectively.The group receiving Azelnidipine tablet 8mg participated in the multi-dose test at the same time.The concentration of azelnidipine in human plasma was determined by LC-MS and the pharmacokinetic parameters were calculated after single-dose or multi-dose administration.RESULTS：The pharmacokinetic parameters of azelnidipine after single dose of Azelnidipine tablet 8and 16mg were as follows：cmax（1.66±0.45）μg·L－1and（4.25±1.38）μg·L－1，tmax（3.50±1.08）h and（4.00±1.16）h，t1/2（21.3±8.1）h and（19.5±4.0）h，AUC0～72（17.9±6.0）μg·h·L－1and（49.9±17.5）μg·h·L－1，respectively.The pharmacokinetic parameters of azelnidipine after multi-dose of Azelnidipine tablet 8mg were as follows：cmax（2.63±1.41）μg·L－1，tmax（3.50±1.08）h，t1/2（32.5±9.2）h，AUC0～72（43.8±26.4）μg·h·L－1，cav（1.19±0.671）μg·L－1，AUCss（28.4±16.1）μg·h·L－1，DF（1.78±0.49），Rs（1.56±0.95）.CONCLUSION：The method is sensitive，accurate and simple.The values ofcmaxand AUC0～72of Azelnidipine tablet after single-dose administration increase along with the increasing of the dose.And the azelnidipine has accumulated after multi-dose of administration.

Azelnidipine；LC-MS；Pharmacokinetics

R969.1；R972+.4

A

1001-0408（2011）18-1672-03

＊主管药师。研究方向：临床药学。电话：0512-67783645。E-mail：sz2000zhongsj@163.com

#通讯作者：主任药师。研究方向：药动学。电话：0512-67783645。E-mail：zqysz11@163.com

2010-08-19

2010-12-29）