ELISA检测HBsAg影响因素的分析

韩文明 黄 燕

（1 中国航天科技集团公司七三八疗养院医疗部检验科，江苏 无锡 214081；

2 无锡市南长区南禅寺街道社区卫生服务中心检验科，江苏 无锡 214007）

ELISA检测HBsAg影响因素的分析

韩文明 黄 燕

（1 中国航天科技集团公司七三八疗养院医疗部检验科，江苏 无锡 214081；

2 无锡市南长区南禅寺街道社区卫生服务中心检验科，江苏 无锡 214007）

ELISA；HBsAg；影响因素

ELISA即酶联免疫吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法。Engvall和Perlmann于1971年最先应用该法进行了IgG定量测定，并命名为“enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）。由于ELISA方法灵敏，特异性强不需要特殊设备，所以被广泛应用于各种抗原和抗体测定[1]。本文以ELISA方法检测HBsAg为例，从边缘效应、外源物质（如溶血、EDTA、肝素等）的干扰和内源物质（包括乳糜血清、RF、AFP、补体、自身抗体等）的干扰方面探讨ELISA的影响因素。

1 材料与方法

1.1 材料

HBsAg ELISA试剂盒由上海华泰生物工程实业有限公司提供，批号：201006011；HBsAg标准品由卫生部临检中心提供，批号1011。检测仪器使用BioTek-ELX800酶标仪、BioTek-ELX50洗板机。

1.2 方法

参照《全国临床检验操作规程》ELISA双抗夹心法，按试剂盒说明书操作。

1.3 统计学分析

用SPSS13.0统计软件进行数据分析，各组A值的比较采用t检验，P＜0.05表示有统计学意义。

2 结 果

2.1 边缘效应

以2µg/LHBsAg标准品作样品，采用37℃水浴1h，37℃孵箱1h两种不同温育法，检测HBsAg，读取吸光度A值。将周围孔（96孔板周边38孔）和中央孔的A值分组t检验，结果见表1。

表1 边缘效应的比较

2.2 外源物质的干扰

2.2.1 溶血的影响

取HBsAg强阳性样品，分离血清350µL（不溶血）用干净竹签人为破坏RBC，制备溶血血清（Hb240g/L），分离350µL，同时检测HBsAg，测吸光度值（A），将两组A值作t检验，结果见表2。

2.2.2 分离EDTA、肝素抗凝的正常人血浆和5µg/LHBsAg标准品1∶1稀释，再用5µg/L HBsAg标准品和相应未抗凝血清1∶1稀释作对照。检测HBsAg，测吸光度值（A），两组A值作配对t检验，结果见表2。

2.3 内源物质的干扰

3 讨 论

从表2可见，溶血和非溶血、EDTA抗凝和非抗凝两组样品A值无显著性差异，肝素抗凝的样本则有显著性差异。

从表3可见，乳糜血清对检测结果没有影响。AFP、补体、RF、自身抗体阳性标本的A值明显高于对照组，有显著性差异，既具有统计学意义，可能是AFP、RF、补体和某些自身抗体（如抗ENA抗体、ANA及抗ds-DNA抗体等）能够与固相一抗，标记二抗Fc结合或影响它们的结合而造成假阳性[3,4]。

[1]宋炳荣,杜彩霞,崔娜等.ELISA一步法检测乙型肝炎病毒标志物影响因素的实验研究[J].实用医技杂志,2004,9(11):65.

[2]徐志峰,李惠,王淑艳等.ELISA检测影响因素分析[J].中国误诊学杂志,2001,1(4):584.

[3]Fernando SA,Wilson GS.Studies of the “hook” effect in the one-step sandwich immunoassay[J].J Immune Meth,1992,151(1/2):47.

[4]Boscato LM,Stuart MC.Incidence and specificity of interfere

R512.6+2

B

1671-8194（2011）04-0047-02

表3 内源物质对吸光度（A）的干扰

表2 外源物质对吸光度（A）的干扰