生物样本中的甲基苯丙胺和氯胺酮含量的检测研究及其体内分布初探

赵 蒙 刘 勇 吕俊岗 王朝虹

(最高人民检察院检察技术信息研究中心，北京 100040)

随着毒品滥用形势的日益严重，越来越多的新型毒品开始在社会上出现和滥用，其中甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)及氯胺酮(ketamine)就是近10年来最为活跃的两种新型毒品[1,2]，在20世纪90年代开始广泛滥用，导致不少滥用过量中毒致死的案件频繁发生，成为世界各国所关注的犯罪问题。甲基苯丙胺和氯胺酮在人体内的定量测定方法和在死后人体内的分布在司法鉴定、毒物学行业有着重要的作用。

目前国内关于甲基苯丙胺和氯胺酮的检验方法已有报道，如文献中气相色谱法检测饮料中的盐酸氯胺酮[3]和微波萃取-气相色谱法测定血液中的甲基苯丙胺[4]，用液-液萃取、微波萃取技术和气相色谱法分别对甲基苯丙胺、氯胺酮进行测定，但对中毒者组织中的甲基苯丙胺和氯胺酮的测定方法还不多见。笔者采用固相萃取技术和气相色谱法对中毒者组织中的甲基苯丙胺和氯胺酮进行了同时测定，建立了一种快速的、可用于司法办案的检验方法，并对甲基苯丙胺和氯胺酮在人体组织中的分布进行了初步的探讨。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

气相色谱仪： Agilent 7980A型，配NPD检测器，7693自动进样器，分流不分流进样口，美国安捷伦公司；

甲醇：HPLC级，美国Fisher Scientific公司；

甲基苯丙胺、氯胺酮标准样品：含量99.8%以上，公安部物证鉴定中心。

1.2 实验样本选择

为了完整研究甲基苯丙胺和氯胺酮在人中毒致死后体内的含量测定和体内分布情况，选择了实际案件中所能提供的血、尿、肝、脑及胃内容等5种检材。

1.3 检材前处理

平行取血、尿、胃内容2份各1 mL；肝2份，分别为1.15、1.16 g；脑2份，分别为1.147、1.143 g。

血液样本及胃内容用3 mL 2%甲酸水溶液稀释，30 μL浓磷酸，涡旋震荡5 min； 以7 000 r/min离心10 min，取上清液。

尿液：直接进行固相萃取。

肝脑：匀浆，用3 mL 2%甲酸水溶液，30 μL浓磷酸，涡旋震荡5 min，超声30 min，以7 000 r/min离心10 min，取上清液。

按上述方法同时进行空白血加标试验和基质加标试验，加标样浓度分别为10、20、100、200、400 μg/mL。

1.4 固相萃取提取方法

活化、平衡：3 mL甲醇、3 mL水；上样：稀释、离心后样品上清液；淋洗：3 mL 2%甲酸水溶液；洗脱：3 mL 95%甲醇-5%氨水溶液。洗脱液以40℃氮气吹至近干，用100 μL甲醇定容，以1 500 r/min离心3 min。上清液转移至2 mL自动进样瓶的内衬管中，GC/NPD检验。

1.5 仪器分析参数

HP-5石英柱(30 m×0.32 mm， 0.25 μm)；半自动固相萃取仪：Waters(20位)；固相萃取柱：Waters Oasis MCX,30 μm, 3 mL/60 mg；载气：高纯氮气，纯度大于99.999 %；进样口温度：250℃；流速：1.0 mL/min； 分流比15∶1；进样量：1 μL；升温程序：初始温度80℃，保持2 min，以10℃/min升至270℃；氮磷检测器温度为300℃。

2 案件说明

某中年男性，在审讯时吞食一包白色粉末后死亡，事后对其剩余白色粉末进行定性分析，结论为甲基苯丙胺和氯胺酮。送检检材有血、尿、肝、脑及胃内容，对送检检材进行甲基苯丙胺和氯胺酮含量测定。

3 结果与讨论

3.1 血液样品中甲基苯丙胺和氯胺酮色谱图

将血液样品经过气相色谱(GC/NPD)分析，实验表明，被测物甲基苯丙胺及氯胺酮与检材中杂质互不干扰，线性范围为0.05～400 μg/mL，相关系数大于0.999，两种化合物色谱图见图1。

图1 血中的甲基苯丙胺和氯胺酮的色谱图

3.2 精密度试验

对浓度分别为200 μg/mL的甲基苯丙胺和氯胺酮的混合标准溶液进行8次平行测定，结果列于表1。由表1可见，测定结果的相对标准偏差均小于7%，表明方法具有较好的精密度。

表1 精密度试验结果

3.3 空白血加标回收试验

平行取15份空白血1 mL,分别加入甲基苯丙胺、氯胺酮，浓度分别为10、20、100、200、400 μg/mL(每个浓度2份)。同时做各浓度的基质加标回收试验。回收率=[空白加标峰面积/基质加标峰面积]×100，方法回收率在88%～97%之间，每级别浓度平行做两组，结果见表2。

3.4 定量结果

用外标工作曲线法对5种检材进行含量测定，结果见表3。测定结果表明，胃内容含量最高，甲基苯丙胺含量平均值为200.52 μg/mL，氯胺酮平均值为656.16 μg/mL；其次分别为尿液，含量为90.80、37.77 μg/mL；肝19.34、25.59 μg/mL;血液8.44、14.59 μg/mL,恼13.42、10.67 μg/mL。以上结果表明，对于人体中毒者进行含量测定时，应首先对胃内容和尿液进行提取。

表2 加标回收试验结果

表3 组织中甲基苯丙胺和氯胺酮含量测定结果

3.5 体内分布情况

根据以上5种检材含量的测定结果可知，通过消化道方式中毒的个体，是从胃部开始通过血液循环达到其它组织中的，胃内容中由于明显存在残留毒品，所以含量最高；而在其它组织中，尿、肝由于是代谢组织，含量次高；血液作为运输体，也具有一定的含量；脑部作为接受体，应该是含量最低的组织，但甲基苯丙胺在血液中的含量小于在脑中的含量，说明其在中枢神经系统中有较高的分布情况，应该引起足够的重视。

4 结论

用气相色谱配氮磷检测器对中毒者5个组织中的甲基苯丙胺及氯胺酮含量进行了同时测定，建立了一种快速、准确的定量方法，该法具有提取回收率高、步骤简单、处理后样本杂质干扰少、分析速度快等优点。通过实验考察了人体组织中甲基苯丙胺和氯胺酮的分布情况，不仅初步研究了两种毒品在人体组织中的分布规律，而且也为相关司法案件检材的取舍提供了科学的依据。

[1] 张高勤，王玫，张大明,等.甲基苯丙胺中毒死亡大白兔体内分布研究[J].中国药物依赖性, 2010，19(1):29-32.

[2] 贾娟，曹洁，王玉瑾,等.氯胺酮在急性中毒大白鼠体内的死后再分布研究[J].中国法医学，2009，28(3):175-177.

[3] 贺江南，刘冬娴.气相色谱法检测饮料中的盐酸氯胺酮[J].长春师范学院学报，2007(4)：55-58.

[4] 孙洪锋，谷学新，王继芬，等.微波萃取-气相色谱法测定血液中的甲基苯丙胺[J].色谱，2007(4):12-15.