文心兰原球茎增殖培养的研究*

尤海波

(黑龙江省农科院)

文心兰原球茎增殖培养的研究*

尤海波

(黑龙江省农科院)

在MS、1/2MS、KC和VW 4种基本培养基中分别添加0.5～5 mg/L BA和1 mg/L NAA的对研究不同培养基对文心兰(Oncidium)原球茎增殖的影响.结果表明，KC的效果最好，VW的效果次之，MS的效果最差.在KC基本培养基中，以KC为培养基，添加3 mg/L BA、0.3 mg/L NAA最适合文心兰原球茎的增殖.在添加3 mg/L BA和0.3 mg/LNAA的KC培养基中，添加有机物促进原球茎增殖，添加椰汁和番茄汁，原球茎增殖差异不显著.

文心兰(Oncidium);原球茎;增殖培养

0 引言

文心兰属兰科文心兰属(Oncidium)，花形奇特似舞女，又名跳舞兰、金粉蝶兰、瘤瓣兰，属复茎类洋兰，附生或地生［1］，原产墨西哥、西印度群岛、巴西等地［1－7］.可作为盆花和切花，同蝴蝶兰及大花蕙兰一样，作为主要的栽培品种，市场需求量越来越大［2－5］.文心兰传统的繁殖方式为分株繁殖，繁殖系数较低，容易受到病毒感染，造成品质退化，应用植物组织培养技术进行快繁利于保持种苗特性，有效控制病害，因此，探索文心兰组织培养快速繁殖方式具有重要意义.

文心兰组织培养过程中一般以原球茎的方式来增殖，在原球茎增殖培养过程中通常会同时形成原球茎和幼苗，影响了原球茎的增殖速度，同时也增加了在转移继代接种过程中的芽苗分级和原球茎分离的工作量，降低了接种生产效率，不利于工厂化、大规模生产的成本控制，为此有必要探索既可以提高原球茎增殖率，又可以将原球茎分化成苗的数量控制到最低的继代培养方式.笔者对适合文心兰原球茎增殖的基本培养基、生长调节剂浓度及培养基中有机物的添加进行了试验，以期为文心兰的快速繁殖提供参考.

1 材料与方法

1.1 试验材料

从母株上切取叶片尚未展开的幼苗，除去外层叶片，暴露侧芽，用自来水冲洗20 min，剥去最外面的一层叶鞘，在75%酒精中蘸2～3 s后立即置0.1%的升汞溶液中浸泡15 min，取出后剥去多余的组织，再置10%次氯酸钠溶液中浸10 min.取出后用无菌水冲洗3次，用无菌吸水纸吸干水分后，剥取侧芽或顶芽作为外植体，切取0.5～1.0 mm的茎尖，置于诱导培养基上培养，形成原球茎.

1.2 方法

在MS、1/2 MS、KC和VW 4种基本培养基中，添加5 mg/L的 BA，0.5 mg/L的 NAA，另加蔗糖20 g/L，调pH至5.6.在培养基上接种文心兰原球茎，培养温度25±2℃，1 500 lx光照10～12 h，每处理10次重复.培养30 d后，观察原球茎生长状况，筛选出最佳基本培养基.在最佳基本培养基中添加不同浓度的BA和NAA，筛选适合原球茎增殖的最佳激素配比.基本培养基使用KC+蔗糖20 g/L，分别添加椰子汁、番茄汁和香蕉作为不同处理.添加量为:椰子汁200 mL/L，番茄200 g/L，香蕉200 g/L.将番茄、香蕉称重后，切成小碎块煮烂用纱布过滤后使用.1个月后调查，每处理10次重复.

2 结果与分析

2.1 不同基本培养基和BA浓度对蝴蝶兰原球茎增殖的影响

文心兰原球茎外观象瘤状愈伤组织，表面球状物不明显，在增殖过程中可见表面突起个个圆球，类似小米粒.将原球茎置于不同基本培养基中培养后，发现以KC处理组原球茎的增殖速度最快，增殖倍数为8.50;VW处理增殖速度次之，为7.97;1/2MS处理组增殖倍数为4.50.原球茎生长势以KC组最为强壮，VW处理组次之，MS处理组最差，且有黄化现象(表1).试验结果表明，低无机盐浓度比较适合文心兰原球茎的增殖培养.

表1 不同基本培养基和BA对蝴蝶兰原球茎增殖的影响

2.2 不同浓度的激素配比对文心兰原球茎增殖的影响

表2 不同浓度激素配比对文心兰原球茎增殖的影响(50 d)

从表2可以看出，以KC为基本培养基，当BA在2～3时，随着BA浓度升高，原球茎/芽比值增加，原球茎增殖倍数也提高.当BA浓度继续升高时，原球茎/芽比值和原球茎增殖倍数有下降的趋势.以KC为基本培养基，培养基中添加3 mg/L BA原球茎增殖倍数最高，原球茎生长势也比较健壮.结果表明，以KC为基本培养基，当BA浓度一定时，NAA浓度在0.1～0.5 mg/L之间对文心兰原球茎的增殖都有作用，随着NAA浓度升高，原球茎/芽比值和原球茎增殖倍数有升高的趋势.从原球茎的生长势来看，BA的浓度升高，原球茎的致密程度增加，但无论是疏松还是过于紧密，都不利于小苗的分化，综合看来，以 KC为培养基，添加3 mg/L BA、0.3 mg/L NAA最适合文心兰原球茎的增殖.

2.2 不同有机添加物对PLB分化苗的影响

有机添加物对PLB分化苗有不同的影响(见表3).椰子汁、番茄和香蕉3种处理原球茎增殖倍数高于对照，添加椰汁和番茄汁处理间差异不明显，但考虑到成本，生产上可采用添加番茄汁.

表3 不同有机物对文心兰PLB增殖的影响

3 讨论

适宜兰花组织培养中使用的基本培养基有多种，其中以MS基本培养基最为常用，在文心兰组织培养中，基本培养基的种类也较多，如MS、1/2 MS、KC或改良KC、VW配方等.本试验表明，以KC为基本培养基，文心兰的原球茎增殖及生长势最好，其次是VW，而以MS为基本培养基文心兰原球茎增殖最差，因此文心兰原球茎增殖培养应以较低的无机盐浓度为好，在培养基中添加椰汁或番茄汁，都有助于原球茎的增殖，这与何松林等［3］的研究结果相似.

试验发现，在原球茎增殖中，如切块小于1.5 cm2时，原球茎生长较慢;而在切块大于1.5 cm2时，原球茎生长十分旺盛，表现出一定的群体效应，这与彭立新［4］、马子骏［5］等在蝴蝶兰原球茎增殖培养中的研究结果一致.

试验表明，可以采用接入原球茎后在相同培养时间内芽/原球茎(体积比)的比值作为调配培养基的指标.

［1］陈兴贻.文心兰组织培养［J］.植物生理学通讯，1989(2):49.

［2］陈菁英，蓝贺胜，陈雄鹰.兰花组织培养与快速繁殖技术［M］.北京:中国农业出版社，2004.107－115.

［3］何松林，等.不同基本培养基及培养方式对文心兰原球茎增殖的影响.华北农学报，2001(1):88－91.

［4］彭立新，王姝，孟广云.蝴蝶兰组织培养快繁研究［J］.天津农业学报，1999，5(2):27 －29.

［5］马子骏，王鲁彤，卢宇广，等.蝴蝶兰工厂化生产技术研究［J］.浙江林学院学报，1998，15(2):192－196.

The Study on Enrichment Culture of Protocorm in Oncidium

You Haibo
(Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences)

The influence of four minimal medium on enrichment of protocorm is studied.The four minimal medium is MS，1/2MS，KC and VW with 0.5 ～ 5.0 mg/L BA and 1 mg/L NAA add separately.The results show that the effect of KC is best，minor VW，the worst MS.The best medium fit for enrichment of protocorm is KC with 3 mg/L BA，0.3 mg/L NAA added.It is marked about protocorm enrichment when added organics in the best medium above;but not marked when added coconut juice and tomato juice to it.

Oncidium;PLB;Enrichment culture

2011－06－14

*黑龙江省自然科学基金项目资助(C2007－21)

(责任编辑:李佳云)