刺络放血联合艾灸对肾功能衰竭大鼠肾功能影响的实验研究*

崔明慧 ，温景荣 ，陈静霞 ，屈超超 ，陈爽白

（1.天津中医药大学研究生，天津 300193；2.天津中医药大学，天津 300193）

慢性肾功能衰竭（CRF）是多种原发或继发性肾脏疾病晚期的共同归宿，是一组以进行性肾单位毁损，从而使肾脏的排泄功能、内环境稳定和内分泌功能等发生障碍为特征的临床综合征。在治疗上，目前西医治疗尚无突破性进展，发展到晚期只能求助于替代疗法，包括血液透析、腹膜透析以及肾移植等，而中医药在防治CRF方面有一定疗效，能够明显延缓病程进展，已有大量的临床研究受到国内外同行的关注[1-4]。本研究观察刺络放血联合艾灸对实验性慢性肾功能衰竭大鼠肾功能的影响，探索延缓慢性肾功能衰竭病程进展的新方法，试图为延缓慢性肾功能衰竭进展开辟新途径。

1 材料与方法

1.1 实验动物 Wistar大鼠，SPF级，雄性，8周龄，体质量（210±10）g。由天津山川红实验动物科技有限公司提供。许可证编号Scxk（津）2009-001。

1.2 实验试剂 腺嘌呤：天津市光复精细化工研究所，批号：2008805。

1.3 实验器具 纯艾条：南阳市卧龙汉医艾绒厂，批号：20071105。三棱针：苏州医疗用品有限公司，批号：200607。

1.4 实验仪器 石蜡切片机：型号RM2235，德国LEICA公司。精密天平：型号AL204，中国梅特勒-托利多公司。图像分析系统：型号600CL，美国Pixera公司。高清晰度光学显微镜：型号BX51，日本OLMPUS公司。

2 实验方法

2.1 分组方法 Wistar大鼠54只，普通饲料适应性喂养1周，编号，称质量，用SPSS13.0统计软件将大鼠随机分为 3组，即正常组(10只)、模型组（22只）、刺灸组（22只）。

2.2 造模方法 参考Yokozawa方法[5]将50 g腺嘌呤定溶于2L蒸馏水中，制成2.5%的腺嘌呤溶液2L。造模前，各组大鼠禁食、禁水12 h。除正常组外其余各组大鼠每天上午同一时间按250 mg/（kg·d），即100 mL/（kg·d）剂量灌胃腺嘌呤溶液，共14 d。第15天开始隔天上午灌胃1次，剂量不变。正常组大鼠每天上午同一时间按100 mL/（kg·d）剂量灌胃蒸馏水，共14 d。第15天开始隔天上午同一时间灌胃1次，剂量不变。共造模21 d。造模期间，各组大鼠均给予正常饮食。

2.3 治疗方法

2.3.1 穴位 穴位：中冲、至阴、涌泉、足三里、命门和关元。参照《实验针灸学》[6]大鼠穴位图谱,同时结合比较解剖学方法进行大鼠穴位的定位。中冲：前肢中指指端。至阴：后肢足小趾趾甲外侧。涌泉：后肢掌前正中。足三里：膝关节后外侧，在腓骨小头下约5 mm处。命门：后正中线第二腰椎间隙。关元：当脐与耻骨联合上缘连线上3/5折点处，即脐下约15 mm处。

2.3.2 操作方法 自造模之日起对刺灸组采取刺络放血联合艾灸方法进行治疗。刺络放血取中冲穴、至阴穴和涌泉穴。一助手将大鼠俯卧固定于桌面上，操作者抬起大鼠前后肢用三棱针对左侧肢体上述三穴位进行治疗，次日采取同样方法治疗右侧肢体上述三穴位，左右交替。每穴放血1滴（约0.01 mL），1次/d。艾灸：取命门穴、关元穴和双侧足三里穴。采用自制固定器固定大鼠，四穴同时实施灸法，距离3 cm，治疗15 min，1次/d。刺络放血联合艾灸方法治疗共21 d。正常组、模型组大鼠除每天采取抓取固定外，不给予任何干预措施。

2.4 观察指标

2.4.1 一般情况 每天观察大鼠的精神状态、皮毛（色、泽、脱毛）、反应、活动等变化并记录；每周记录体质量1次；每周各组随机（采用SPSS13.0统计软件）取5只动物入代谢笼24 h，禁食，予自由饮水，记录饮水量及尿量。

2.4.2 存活率 统计21 d内各组大鼠的存活率。

2.4.3 生化指标 21 d后眼底静脉丛取血2 mL，送检测肌酐（Scr）、尿素氮(BUN)。

2.4.4 肾脏病理学观察 21 d后，脱颈椎法处死大鼠，分离左肾，剥除被膜，观察肾脏大体外观，记录肾脏体积、质量，对半切开，取一半肾组织固定在10%甲醛溶液中72 h。取肾组织的相同部位，常规乙醇脱水，石蜡包埋，切取5 μm厚组织片，HE常规染色，用光学显微镜观察肾组织的形态学变化。

2.5 统计方法 数据采用SPSS13.0统计软件进行分析。各检测指标采用均数±标准差（±s）表示，组间差异采用单因素方差分析，P＜0.05说明有差异。

3 实验结果

3.1 一般情况 造模期间，正常组大鼠饮食如常，反应灵敏，体毛顺滑有光泽，二便正常。模型组与正常组比较，第5～7天开始出现饮水量、尿量明显增多，进食减少，体质量增长减慢，第12～14天出现明显消瘦，精神萎顿，眯眼，眼睑周围水肿，倦缩，自主活动减少，体毛干枯、脱毛，舌色紫黯，第17～21天时除上述症状外，出现耳廓、尾部、爪尖苍白。刺灸组大鼠亦出现饮水量、尿量增加，自主活动减少，眯眼，体毛干枯、脱毛等表现，但出现时间较模型组晚2～3 d。21 d时，刺灸组较模型组自主活动明显增多，进食增多，少数动物出现眼睑周围水肿，耳廓、尾部、爪尖苍白，且程度较模型组轻。

3.2 存活率 实验观察期间正常组动物无死亡，模型组死亡12只，存活率45.5%，死亡动物存活时间（4.50±0.67）d。刺灸组死亡动物 4只，存活率81.8%，死亡动物平均存活时间（6.25±2.22）d。模型组与刺灸组死亡率有差异（P<0.05）

3.3 生化指标 各组动物21 d时血尿素氮、肌酐的比较见表1。

由表1可见，模型组尿素氮与正常组比较有显著性差异（P<0.01），刺灸组与正常组比较有差异（P<0.05），刺灸组与模型组比较有下降趋势。

3.4 肾脏病理学观察

3.4.1 肉眼观察 正常组：肾脏正常大小，呈红褐色，弹性好，表面光滑，有光泽；包膜易于剥离，切面皮质、髓质分界清楚。模型组：肾脏体积明显增大，颜色苍白，无弹性，表面呈细颗粒状，缺乏光泽，呈“大白肾”；肾包膜与肾实质粘连不易剥离，切面皮髓质分界不清。刺灸组：肾脏大体形态基本与模型组相同，但病变程度相对于模型组有一定减轻。

3.4.2 光镜观察 HE染色可见，正常组肾小管和肾小球无明显病变，间质未见纤维组织增生，无腺嘌呤结晶。模型组肾小球大致正常，肾小管扩张，肾间质炎细胞浸润、肾间质纤维化，肾小管和间质可见黄褐色腺嘌呤结晶。刺灸组肾小球大致正常，肾小管扩张，扩张程度较模型组轻，肾间质炎细胞浸润、肾间质纤维化程度较模型组轻，肾小管和间质亦可见黄褐色腺嘌呤结晶，但数目较模型组少（见图1）。

4 讨论

本实验中，造模后大鼠出现饮水量、尿量明显增多，进食减少，明显消瘦，精神萎顿，眯眼，倦缩，自主活动减少，眼睑周围水肿，体毛干枯、脱毛，耳廓、尾部、爪尖苍白等症状，符合大鼠阳虚证的一般表现[7-8]。结合CRF虚实夹杂的证候特点，以温补脾肾、活血化瘀为基本治法。

表1 各组动物21 d时血尿素氮、肌酐比较Tab.1 Control of blood urea nitrogen and creatinine content at 21d in rats of each group

图1 光镜下肾脏病理图片（HE染色）Fig.1 The kidney pathology picture at the light microscope

目前运用中药治疗CRF的研究与报道较多，但关于针灸治疗CRF的报道相对较少。本研究在前期工作基础[9]上，以温补脾肾、活血化瘀为基本治法，研究刺络放血联合艾灸疗法对腺嘌呤致CRF大鼠肾功能的影响。井穴为十二经脉阴阳之气始发之处，经脉之气交接于四末之所在。从十二经络的流通顺序讲，足太阳膀胱经注入足少阴肾经，足少阴肾经注入手厥阴心包经，足太阳膀胱经与足少阳肾经互为表里，故此三经与肾关系密切。至阴穴、涌泉穴、中冲穴分别为足太阳膀胱经、足少阴肾经、手厥阴心包经的井穴，对此三穴刺络放血以调节全身经脉气血，达到泄浊解毒、活血化瘀的作用。关元穴为元气关藏之处，与肾脏关系密切。命门穴为命门之气出入之处，调整肾脏机能的要穴。足三里可以补益中气。同时艾灸关元、命门、足三里，可共奏温补脾肾之效。

本实验结果显示，刺络放血联合艾灸有提高腺嘌呤致CRF大鼠存活率，降低尿素氮、肌酐升高幅度，减轻肾功能损害的作用趋势。

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