自体 CIK细胞过继免疫治疗晚期非小细胞肺癌的临床研究

北京军区总医院胸外科(北京 100700)

李 文 宋立强* 刘吉福

肺癌的发病率高居恶性肿瘤之首。尽管近年来的化疗药物层出不穷,但疗效方面仍然处于难以突破的平台期[1,2]。肺癌的免疫治疗一直在综合治疗中扮演者拾遗补缺的角色,不断有新理论和新方法充实到临床实践当中。免疫治疗效果差的主要原因之一是肺癌细胞的免疫原性差,无法主动激发机体有效的免疫应答,从而增加了肿瘤细胞免疫逃逸的几率。因此,提高机体的免疫力,建立有效的免疫应答机制是肺癌治疗积极有效的途径。其中输注自体细胞因子诱导的杀伤(Cytokine induced killer,CIK)细胞疗法,被认为是目前新一代过继免疫治疗的首选方案。CIK细胞是外周血单个核细胞(Peripheral blod mononuclear cell,PBMC)在体外经过多种细胞因子(IFN-γ、IL-2、anti-CD3 McAb)共同诱导而获得的一群异质细胞,兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞非 M HC限制杀瘤特点[3]。目前 CIK细胞疗法已用于肾癌、结肠癌、淋巴瘤等的临床研究,并取得了一定的治疗效果[4]。我院自 2005年9月至2006年12月应用CIK细胞过继免疫治疗晚期非小细胞肺癌患者 32例,并进行了系统随访,现将结果报道如下。

对象与方法

1 对 象 被观察的32例IIIB-IV期肺癌患者均经胸部影像学、组织病理学等方法确诊,并根据国际抗癌联盟(UICC)分期标准进行临床分期。而且患者均为经过 2～4周期化疗显示为进展,并且放弃继续化疗的患者。其中男18例,女14例。年龄分布为48～66岁,平均62.2岁。32例中接受CIK过继免疫治疗3个疗程的患者为2例,2个疗程为30例。治疗方案经过医院伦理委员会批准,患者均签署知情同意书。

2 方 法 CIK细胞制备及回输:用淋巴细胞分离液分离外周血 PBMC,然后在含有 CD3Mc Ab、IL-2、IFN-γ、IL-1α等的培养基中进行培养扩增,14～28d后,再将培养的CIK细胞取少许做流式细胞仪检测,当CD3+CD56+细胞数≥50%、CD3+CD8+≥30%,且细菌及真菌培养阴性时收集细胞,加入1%人血白蛋白生理盐水中分次回输。一个疗程输注的细胞总数为(5～15)×109。以后第 2年输注 2个疗程,第 3年输注1个疗程。

3 观察指标及疗效判定 观察指标包括瘤体变化、生存期、临床症状改善情况、生存质量、体重及不良反应等。肿瘤瘤体变化评价参照实体瘤标准,以患者治疗前及治疗后1月CT及B超进行对照比较,以完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、轻度缓解(M R)、稳定(SD)、进展(PD)进行疗效评定,缓解率为CR与PR、MR的总和。并观察治疗对心肝肾及消化道的影响。

结 果

1 临床疗效 32例患者经CIK治疗后 CR 4例,PR 6例,M R 15例,SD 5例,PD 2例。生存期的变化:经 CIK治疗后随访,其存活率为:1年生存率为80.4%,2年生存率为70.5%,3年生存率为49.8%。52例患者大多数临床症状治疗后较治疗前有明显改善,其中以乏力、气短、失眠症状改善为最明显。两组间率比较的显著性检验采用χ2分析,差异显著(P＜0.01),见表 1。生存质量的改善:对 32例患者用Karnofsky评定及体重的改变来评估生存质量的改善,结果见表2。

2 不良反应 输注 CIK细胞过程中仅有 2例病人出现发热反应,体温≤38.5℃,对症处理后很快恢复正常,均未影响治疗。未见消化道不良症状及肝肾功能异常。

表1 32例患者治疗前后主要症状分析(n=32)

表2 治疗后Karnofsky评分及体重变化表(n=32)

讨 论

用于治疗肺癌的免疫活性细胞主要有淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞、肿瘤浸润的淋巴(TIL)细胞、CIK细胞等。CIK细胞,又称为NK细胞样 T淋巴细胞,同时表达 CD3和CD56两种膜蛋白分子。研究表明,与既往临床使用的过继免疫疗法(譬如 LAK细胞、TIL细胞和CD3AK细胞)相比,CIK细胞具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广、对多重耐药肿瘤细胞同样敏感、对正常骨髓造血前体细胞细胞毒性小[5]、能抵抗肿瘤细胞引发的效应细胞 Fas-FasL凋亡[6],由于该种细胞同时表达 CD3和CD56两种膜蛋白分子,故又称为NK细胞样淋巴细胞。CIK细胞中的效应细胞CD3+CD56+在正常人外周血中极为罕见,仅 1%～5%。在体外经多种细胞因子培养 14～28d,CD3+CD56+细胞迅速增多,较培养前升幅可达 1000倍以上[7]。大量体外实验证实 CIK细胞较以 NK细胞为主的LAK细胞具有更强大的杀瘤活性。肿瘤克隆抑制实验显示,CIK细胞的瘤细胞抑制 Log指数为2.5-3.5,较 LAK细胞的瘤细胞抑制指数高 2个Log[8]。

本研究采用 Schmidt-woif等所述方法[9]略加修改,制备出CIK细胞。其杀瘤机制为,当CIK细胞受到敏感的靶细胞刺激时,CIK细胞通过其表面杀伤抑制受体系统或粘附因子对靶细胞的识别,这种细胞之间的直接接触导致:① CIK细胞释放具有细胞毒的胞浆颗粒物到膜外空间,其中CD3+CD56+细胞可产生最大的颗粒释放量。这些胞浆颗粒对靶细胞具有直接杀伤力;② 分泌 IFN、TNF、IL-2、TGF-β和GM-CSF等细胞因子,这些细胞因子对靶细胞有直接或间接抑制或杀伤作用,进一步放大免疫杀瘤效应;③ CIK细胞在培养过程中表达 FasL,一方面增强了其对FasL+肿瘤细胞引发的Fas-Fas L凋亡的抵抗性,还可通过对 Fas+肿瘤细胞诱导凋亡行使其对肿瘤细胞的慢性杀伤作用,保证抗瘤活性的长期持久。CIK细胞杀瘤谱广,为非 MHC限制性效应细胞,对自体与异体、同种与异种肿瘤细胞均有杀伤作用。CIK细胞对化疗药物敏感的亲本细胞和不敏感的转化细胞均具有强大的杀伤活性。实验表明,CIK细胞的疗效与CIK细胞的治疗量和体内残留肿瘤细胞量存在一定相关性。我们临床经验表明,回输细胞总数应＞5×109才具有治疗作用。

从临床观察结果显示,经 CIK细胞治疗后瘤体有不同程度的缩小,总缓解率为78.12%;3年存活期为49.8%;临床症状如乏力、失眠、气短和食欲不振等均有明显改善。从整体看,结果好转明显。所以我们认为,CIK细胞治疗安全有效,无明显毒副作用,是较为理想的免疫学肺癌治疗方法。

[1] 薛陆军,崔晓善,张 彦,等.中西医结合介入治疗晚期非小细胞肺癌200例[J].陕西中医,2004,25(12):1059-1061

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