ACE基因和CYP基因多态性与妊娠期高血压疾病的相关性研究*

牛建清，李宏芬，沈志霞，张蕴霞，代 琪，王 健，范淑英

（华北煤炭医学院附属开滦医院 1.妇产科；2.检验科，河北 唐山 063000）

妊娠期高血压疾病是妊娠期特有的疾病，发病率在我国约占9.4%，国外报道7%～12%。该病严重影响母婴健康，是导致孕产妇及围产儿死亡的主要原因，但其确切的发病机制至今未明[1]。有研究表明，妊娠期高血压疾病具有较高的遗传倾向。有关血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme，ACE）和醛固酮合成酶（aldosterone synthase，CYP11B2）基因与妊娠期高血压疾病的相关研究，鲜有报道。本文通过病例-对照研究，探讨ACE基因I/D多态性及CYP11B2基因-344T/C多态性与妊娠期高血压疾病患者的相关关系，有助于从遗传学角度解释妊娠期高血压疾病的病因，为临床早期预防、诊断和治疗提供了分子遗传学的依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择87例2000～2003年开滦医院产科妊娠期高血压疾病的住院患者，妊娠期高血压疾病诊断标准参照乐杰主编的《妇产科学》第6版[2]。妊娠期高血压疾病患者87例，平均年龄（27±6.5）岁，连续测量非同日血压3次，平均值为SBP≥140mmHg和/或DBP≥90mmHg，经询问病史和化验检查排除原发性高血压、糖尿病、肾病患者。对照组为年龄相匹配的175名同期住院分娩者，经检查孕期（既往）无高血压、冠心病、脑血管病、糖尿病、肾病等病史。

1.2 方法

1.2.1 DNA的提取 抽取外周静脉血5mL，乙二胺四乙酸二钠（EDTA）抗凝，采用氯仿/异戊醇经典方法提取DNA。

1.2.2 ACE基因检测 PCR扩增参照文献[3]设计引物（上海生工合成）。上游：5'-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3'；下游：5'-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3'。ACE基因检测方法见参考文献[4]。PCR扩增产物出现490 bp片段长度者为II纯合型，出现190 bp片段长度者为DD纯合型，出现190、490 bp两条片段长度者，为ID杂合型。

1.2.3 CYP11B2基因型检测 PCR扩增参照文献[5]设计引物序列（上海生工）。上游：5'-CAGGAGGAGACCCCATGTGAC-3'；下游：5'-CCTCCACCCTGTTCAGCCC-3'。CYP11B2基因检测方法见参照文献[6]。PCR扩增产物为537 bp，在这个片段中存在2个自然的酶切位点，经HaeⅢ内切酶消化后产生273、138、126 bp长度的片段，若扩增片段中存在T-344C碱基替换，则产生新的HaeⅢ酶切点（GGCC），片段273 bp经HaeⅢ内切酶消化后产生202 bp和71 bp长度的2个片段，所以TT基因型有273、138、126 bp共 3个片段，TC基因型有 5个片段：273、202、71、138、126 bp，CC 基因型有4个片段：202、71、138、126 bp。

1.2.4 统计学分析 所得结果用SPSS 11.5软件分析，基因型及等位基因风险率以比数比（OR）及95%可信区间（95%CI）表示。

2 结果

2.1 妊娠期高血压ACE基因I/D多态性

妊娠期高血压疾病组中ACE基因 I/D的ID和DD基因型频率高于正常对照组，分别为41.4%和28.7%；相对于II基因型，携带ID和DD基因型人群患妊娠期高血压疾病的OR值分别为1.981（95%CI 1.081～3.631）和 2.347（95%CI 1.191～4.627）；根据分离分析方法计算等位基因频率，D等位基因频率也高于正常对照组，为49.42%；相对于I等位基因，携带D等位基因患妊娠期高血压疾病的OR值为 1.737（95%CI 1.202～2.512）（表1）。

2.2 妊娠期高血压CYP11B2基因-344T/C位点多态性

妊娠期高血压疾病组CYP11B2基因-344T/C位点TC和CC基因型频率高于正常对照组，分别为40.2%和17.2%；相对于TT基因型，携带TC和CC基因型人群患妊娠期高血压疾病的OR值分别为1.577（95%CI 0.903～2.754）和6.081（95%CI 2.300～16.078）；根据分离分析方法计算等位基因频率，C等位基因频率也高于正常对照组，为37.4%；相对于T等位基因，C等位基因患妊娠期高血压疾病的 OR 值为 2.114（95%CI 1.420～3.147）（表2）。

表1 妊娠期高血压疾病组与正常对照组ACE基因I/D多态性基因型和等位基因分析

表2 妊娠期高血压疾病组与正常对照组CYP11B2基因-344T/C多态性基因型和等位基因分析

2.3 妊娠期高血压ACE基因I/D和CYP11B2基因-344T/C多态性的联合基因型频率

为探讨ACE基因I/D及CYP11B2基因-344T/C基因多态性与妊娠期高血压疾病发病的相互关系，以每个个体的ACE基因I/D多态性基因型和CYP11B2基因-344T/C位点变异的基因型构成，进行联合分析：相对于II-TT联合基因型，同时携带TC-DD联合基因型患妊娠期高血压疾病的OR值为 6.019（95%CI 2.089～17.336）；CC-II、CC-ID、CC-DD联合基因型由于样本量小，不具有代表性，应加大样本量；其余联合基因型，差异均无显著性（P＞0.05）（表3）。

表3 妊娠期高血压疾病组与对照组ACE基因I/D及CYP11B2基因-344T/C多态性的联合基因型分析

3 讨论

妊娠期高血压疾病的基本病理生理变化是全身小动脉痉挛，血管内皮损伤，血管对血管紧张素Ⅱ敏感性增强，血管内皮及其基底膜受损，凝血反应被激活，血管活性物质比例失调，最终使小血管痉挛，子宫胎盘缺血，导致妊娠期高血压疾病的发生[7]。

ACE是肾素-血管紧张素-醛固酮系统（renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS） 的关键酶，ACE基因位于人染色体17q23上，ACE的作用产物-血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）是RAAS作用于效应器的关键成分。ACE可将血管紧张素Ⅰ转换成具有强烈血管收缩活性的血管紧张素Ⅱ，血管紧张素Ⅱ作用于血管紧张素受体Ⅰ，促进肾上腺皮质释放醛固酮，醛固酮再通过控制盐平衡和血管内容量调节血压。醛固酮合成酶是体内合成醛固酮的最后一步生化反应的催化酶，具有11-β羟化酶、18羟化酶和18氧化酶的活性，属于线粒体细胞色素P450酶超家族。醛固酮合成酶（CYP11B2）基因是编码醛固酮生物合成终末阶段的关键基因，精确定位在8q24.3。CYP11B2基因转录调空区存在-344C/T单核苷酸等位基因多态性，这个位点恰好是类固醇生成转录因子-1的部位[8]。有研究表明，CYP11B2基因的变异可致醛固酮分泌失调[9]。醛固酮过度分泌使体内水电解质平衡失调，水钠潴留，血容量增加，通过非基因快速作用，使血管平滑肌细胞通透性增高，水钠储留于细胞内，钠氢交换增加，细胞内钙及三磷酸肌醇浓度增高，从而使血管对加压物质反映增强，血管平滑肌张力增高[10～12]。

在妊娠期高血压疾病组中，D等位基因频率高于正常对照组，因此导致ACE水平升高，AngⅠ转变成AngⅡ增加，以致出现血管痉挛、血压升高，导致妊高征的病理变化[13]。本研究结果显示，携带ID和DD基因型的人群，患妊娠期高血压疾病的风险性分别增加了1.981倍和2.347倍；携带D等位基因的危险性增加了1.737倍，提示妊娠期高血压疾病的遗传倾向与ACE基因的D等位基因有关，D等位基因可能是妊娠期高血压疾病遗传标志之一。但亦有结论不同的报道[14]。

BENETOS 等[15]发现，醛固酮合成酶（CYP11B2）基因-344C基因型的白人，其卧位血浆醛固酮水平高于醛固酮合成酶（CYP11B2）基因-344T基因型白人，提示醛固酮合成酶（CYP11B2）基因-344等位基因可能与原发性高血压发病有关。本研究结果表明，妊娠期高血压疾病组中CYP11B2基因-344T/C位点的TC基因型频率，高于正常对照组，患病风险（增加了1.577倍）虽有增高的趋势，但并无统计学差异；携带CC基因型人群患病风险增加了6.081倍；携带C等位基因的危险性增加了2.114倍，表明具有-334C位点突变的个体可能是妊娠期高血压疾病发生中的高危人群。

本研究对ACE基因I/D和CYP11B2基因-344T/C多态性进行联合基因型分析，发现相对于II-TT联合基因型，同时携带DD-TC联合基因型的个体患妊娠期高血压疾病的危险性增加了6.019倍。上述结果提示，ACE基因缺失及CYP11B2基因点突变的多态性可能共同对妊娠期高血压疾病的发生、发展起作用。

总之，妊娠期高血压疾病的发病机理是极其复杂的，它可能是一种多基因决定和受多种因素影响的疾病。随着分子遗传学研究的不断深入，ACE基因和CYP11B2基因在妊娠期高血压疾病中的确切发病机制将进一步被阐明。

[1]赵彩珍,乔福元.妊娠期高血压疾病患者腹腔巨噬细胞分泌功能的变化[J].中国现代医学杂志,2006,16(2):283-285

[1]ZHAO CZ,QIAO FY.Changes in function of peritoneal macrophages in patients with hypertension disorder complicating pregnancy[J].China Journal of Modern Meoicine,2006,16(2):283-285.Chinese

[2]LE J Editor.Obstetrics and Gynecology.The six edition.peking：People’s Medical Publishing House,2004:97-104.Chinese

[3]RIGAT B,HUBERT C,CORVOL P,et al.PCR deletion of the insertion/deletion polymorphism of the human angiotensin converting enzyme gene(DCP1)(dipeptidy carboxy peptidase 1).Nucleic Acids Res,1992,20(6):1433．

[4]LI HF,SHEN ZX,CHANG YH,et al.Distribution of polymorphism of angiotensin converting enzyme gene and A1166-C single nucleotide polymorphism (SNP)of angiotensinⅡtype 1 receptor gene in normal Chinese Population[J].Chinese Journal of Laboratory Medicine,2003,26(2):89-92.Chinese.

[5]KAWAMOTO T,MITSUUCHI Y,OHNISHI T,et al.Cloning and expression of a cDNA for human cytochrome P-450aldo as.Biochem Biophys Res Commun,1990,173(1):309-316.

[6]李宏芬,沈志霞,吴寿岭,等.中国人群醛固酮合成酶(CYP11B2)基因T-344C单核苷酸多态性频率分析.中国现代医学杂志,2008,18(2):233-235.

[6]LI HF,SHEN ZX,WU SL,et al.c SNP (Single Nucleotide Polymorphism)of CYP11B2 gene in normal Chinese Population[J].China Journal of Modern Medicine,2008,18(2):233-235.Chinese

[7]欧阳艳琼,陈汉平,陈惠祯,等.妊娠期间高血压疾病患者血清脂联素、瘦素水平的变化及其临床意义的研究[J],中国现代医学杂志,2007,17(6):697-700.

[7]OUYANG YQ,CHEN HP,CHEN HZ,et al.Study of changes of adiponection and leptin in hypertension disoeder amplicating pregnancy and their clinical significance[J].China Journal of Modern Meoicine,2007,17(6):697-700.Chinese

[8]MULATERO P,SCHIAVONE D,FALLO F,et al.CYP11B2 gene polymorphisms in idiopathic hyperaldosteronism.Hypertension,2000,35(3):694-698.

[9]TAYMANS SE,PACK S,PAK E,et al.Human CYP11B2(aldosterone synthase)maps to chromosome 8q24.3.L Clin Endocri Metab,1998,83(3):1033-1036.

[10]CHRIST M,DOUWES K,EISEN C,et al.Repid Effects of Aldosterone on Sodium Transport in Vascular Smooth Muscle Cells.Hypertension,1995,25(1):117-123.

[11]WEHLING M,BAUER MM,ULSENHEIMER A,et al.Nongenomic effects of aldosterone on intracellular pH in vascular smooth muscle cells.Biochem Biophys Res Commun,1996,223(1):181-186.

[12]PIRPIRIS M,SUDHIR K,YEUNG S,et al.Pressor responsiveness in corticosteroid-induced hypertension in humans.Hypertension,1992,19(6 pt 1):567-574.

[13]ZHU MH,XIA YP,CHENG WW,et al.Distribution of absense polymorphism of hypertensive disorder complicating pregnancy angiotensin converting enzyme gene[J].China J Obstet Gynecol,1998,33(2):83-85.Chinese.

[14]GAO XY,ZHANG WY,WU ZH,et al.Distribution of absense polymorphism of hypertension syndrome of pregnancy family constellation [J].China J Obstet Gynecol,2003,38(5):302-303.Chinese.

[15]BENETOS A,POIRIER O,GUYENE TT,et al.Genetic determination of plasma aldosterone levels.Hypertension,1997,30:493-494.