襄荷乙醇提取物的体外抗氧化活性研究

张泽生，王玉本，黄 闯，王 翠

（天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津300457）

襄荷乙醇提取物的体外抗氧化活性研究

张泽生，王玉本，黄 闯，王 翠

（天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津300457）

目的：研究襄荷乙醇提取物（extract of Zingiber mioga Rose，EZR）的体外抗氧化作用。方法：用50%乙醇制备襄荷提取物，以VC作为阳性对照，测定EZR的总还原力及清除DPPH自由基的能力，并用荧光化学发光法测定了EZR对活性氧自由基（·、·OH、H2O2）的清除能力。结果：EZR的总还原力为40.17±1.04mg VC/g，在实验浓度范围内，对DPPH·、·OH、O－2·、H2O2的清除率分别达到了70%、64%、77%、71%。结论：EZR具有明显的体外抗氧化活性，但其抗氧化能力小于VC。

襄荷，抗氧化活性，清除自由基，体外

襄荷（zingiber mioga Rose）又名阳荷（《黔志》）、山姜、观音花（《浙江中药资源名录》），为姜科姜属多年生草本植物，原产于中国南部，有特殊的芳香，驱虫效果明显，病虫害很少，极少使用农药，是理想的绿色食品。据李时珍《本草纲目》所载，襄荷具有活血调经，镇咳祛痰，消肿解毒，消积健胃等药用功效，是兼药理保健功能为一体的纯天然膳食纤维食品，对便秘、糖尿病等有着特殊功效。近年研究表明我国果蔬及中草药是非常有潜力的天然抗氧化资源，对果蔬抗氧化性研究更是层出不穷。襄荷作为一种绿色健康食品具有很大的开发价值。目前我国对襄荷的研究多集中在栽培、组织培养、快速繁殖和食用资源等方面，对其生物活性方面的研究甚少。本文以乙醇为溶剂从襄荷中提取大部分生物活性物质，并对其体外抗氧化作用进行研究，以期为襄荷在营养保健及药用方面的开发应用提供理论依据。

襄荷 产自湖北十堰郧县，经鉴定为襄荷果实部分；邻苯三酚、碳酸钠、碳酸氢钠、无水硫酸铜、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、抗坏血酸等 均为分析纯；DPPH·（1.1－二苯基－2－苦肼基自由基） 购于德国Fluka公司；鲁米诺（3－Aminophthalhydrazide，98%）美国ACROS ORGANICS产品。

UV mini－1240紫外/可见分光光度计 日本岛津；荧光化学发光分析仪（Fluoroskan Ascent FL），恒温水浴锅，植物粉碎机，电子天平等。

1.2 实验方法

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.2.1 襄荷醇提物的制备 将新鲜的襄荷用清水洗净，冷冻干燥后磨成细粉，用50%乙醇以1∶15的料液比在80℃浸提2h，将粗提液抽滤，50℃下减压浓缩，冷冻干燥，得到深棕色粉状物质，即襄荷醇提物，4℃保存备用。

1.2.2 总还原力的测定 标准曲线的制作：参考Lee的方法［1］，将标准样品VC配制成浓度为15、37.5、75、150、300!g/mL的溶液，取1mL样液于试管中，依次加入0.2mol/L的PBS缓冲液（pH6.6）2.5mL和l%六氰合铁酸钾［K3Fe（CN）6］溶液 2.5mL，50℃水浴20min后迅速冷却，加入10%三氯乙酸（TCA）溶液2.5mL，然后以 5000r/min的转速离心 10min，取2.5mL上清液，依次加入2.5mL蒸馏水，1mL 0.1%的三氯化铁溶液，充分混匀，静置10min后，于700nm处测吸光度值，根据吸光值对VC浓度做标准曲线。

样品总还原力的测定：按以上步骤测定EZR的总还原力。结果以每克样品所含的VC当量表示，记为mg VC/g。

1.2.3 DPPH·清除率的测定 按照文献［2］的方法测定EZR对DPPH·的清除率，以VC做阳性对照。

1.2.4 ·OH清除率的测定［3］采用鲁米诺化学发光法测定EZR及阳性对照VC对Fenton型反应产生的·OH的清除作用。具体步骤：向发光池中依次加入2mmol/L的抗坏血酸溶液 40!L，2mmol/L的CuSO4溶液70!L，pH7.8的磷酸缓冲液50!L，不同浓度的供试液20!L，最后加入10mmol/L的鲁米诺溶液15!L，立即启动反应，记录每6s内发光强度的积分，至出现峰值（CP1），以去离子水为空白测CP0。清除率按下式计算：

注：邻苯三酚溶液是由10mmol/L的HCl溶液配制，鲁米诺溶液是用 pH=10.16，0.1mmol/L的Na2CO3－NaHCO3缓冲液配制。

1.2.6 H2O2清除率的测定［5］采用H2O2－鲁米诺－碳酸缓冲液（pH9.5）体系测定EZR及阳性对照VC对H2O2的清除率。具体步骤：向发光池中分别加入不同浓度的供试液50!L，pH 9.5的碳酸盐缓冲液100!L，1mmol/L鲁米诺溶液50!L，最后加入0.15%的H2O2溶液50!L，立刻启动发光反应，测定12s内的发光强度CP1，用去离子水做空白对照，测其CP0。清除率的计算同1.2.4。

1.2.7 数据处理 所有实验均做3次平行，结果用EXCELL处理。

2 结果与讨论

2.1 EZR得率

依1.2.1的方法制备EZR，其得率为：11.62% ± 1.13%（n=3）。

2.2 EZR的总还原力

Yen［6］和Siddhuraju［7］认为，抗氧化剂的还原力与其抗氧化性之间存在联系，还原力越强，抗氧化性越强。实验根据吸光度值大小对VC做标准曲线，得到线性回归方程y=0.0041x+0.0783（R2=0.9997），计算得到EZR的总还原力为（40.17±1.04）mg VC/g。

2.3 对DPPH·的清除效果

DPPH·在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其孤对电子在517nm处有最大吸收，当抗氧化剂存在时，孤对电子被配对，吸收减弱或消失，通过测定吸收减弱的程度，可评价抗氧化剂清除DPPH·的效果［8］。EZR和VC对DPPH·的清除效果如图1所示。

图1 EZR和VC对DPPH·的清除作用

由图1可知，EZR对DPPH·的清除作用随着浓度的增加而增强，当浓度为1mg/mL时，清除率达到70%，显示出较强的清除作用。同等浓度下，EZR对DPPH·的清除作用均低于阳性对照VC，但随着浓度的升高，清除效果逐渐接近VC。

2.4 对·OH的清除效果

实验分别测定了浓度为 32.5、75、150、300、600!g/mL的EZR和VC对·OH的清除作用，结果如图2所示。

图2 EZR和VC对·OH的清除作用

由图2可知，EZR对由Fenton反应产生的·OH具有很好的清除作用，在30～300!g/mL的浓度范围内，随着浓度升高，清除效果显著增强，呈现出很好的量效关系；当浓度高于300!g/mL时，对·OH的清除效果趋于稳定，达到64%。同等浓度下，EZR对·OH的清除效果均低于VC。

2.5 对·的清除效果

不同浓度的EZR和VC溶液加入到·发生体系后，对·的清除作用如图3所示。

图3 EZR和VC对O－2·的清除作用

2.6 对H2O2的清除效果

不同浓度的EZR和VC溶液加入到H2O2发生体系后，对H2O2的清除作用见图4。

图4 EZR和VC对H2O2的清除作用

图4显示，EZR能够有效地清除H2O2，且清除率随浓度增大而增大，当浓度为0.25mg/mL时，清除率达到53%；之后随浓度升高清除效果增长缓慢，当浓度为1mg/mL时，清除率达到71%。同等浓度下，EZR的清除效果低于VC。

3 结论

襄荷醇提物具有较好的还原性及明显的清除自由基作用。在实验浓度范围内，EZR对DPPH·、·OH、·、H2O2的清除率分别达到了70%、64%、 77%、71%，显示出较强的体外抗氧化作用。虽然其抗氧化能力低于同等浓度的VC，但作为一种天然绿色植物的抗氧化粗提物，可进一步对其中的抗氧化活性物质进行分离纯化，以期获得更强的抗氧化活性物质，为襄荷在保健营养及药用方面的进一步开发利用提供基础。

［1］Lee S C，Jeong S M，Kim S Y.Effect of far－infrared radiation and heat treatment on the antioxidant activity of water extracts from peanut hulls［J］.Food Chemistry，2006，94（4）：489－493.

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Study on antioxidant activity of extract from Zingiber mioga rose in vitro

ZHANG Ze－sheng，WANG Yu－ben，HUANG Chuang，WANG Cui
（Tianjin University of Science&Technology，Tianjin 300457，China）

Objective：To study the antioxidant properties of extract of Zingiber mioga Rose（EZR）in vitro.Method：EZR was prepared by 50%ethanol.Using VCas a positive control，the reducing power and DPPH· scavenging activity of EZR were measured，and the scavenging activity of EZR against oxygen free radicals（·OH、O2－·、H2O2）was determined by fluorescent chemiluminescence method.Result：The reducing power of EZR was 40.17± 1.04mg VC/g.Within the concentration range，the scavenging rate against DPPH·，·OH，O2－·，H2O2reached to 70%，64%，77%，71%，respectively.Conclusion：EZR had obvious antioxidant activities in vitro，but was lower than that of VC.

Zingiber mioga rose；antioxidant activity；free radical scavenging；in vitro

TS201.1

B

1002－0306（2010）12－0282－03

2009－12－24

张泽生（1956－），男，博士（后），教授，博士生导师，研究方向：天然产物的开发与应用。