美洲大蠊提取物CⅡ-3对豚鼠离体回肠收缩活动的影响

甘 平，张旭强，郭 品，王 聪，彭 芳

（大理学院药学院，云南大理 671000）

美洲大蠊提取物CⅡ-3对豚鼠离体回肠收缩活动的影响

甘 平，张旭强，郭 品，王 聪，彭 芳*

（大理学院药学院，云南大理 671000）

目的：观察美洲大蠊提取物CⅡ-3对豚鼠离体回肠收缩活动的影响。方法：采用离体肠肌实验，用BL-420E+生物机能实验系统记录美洲大蠊提取物CⅡ-3对乙酰胆碱（Ach）、组胺（His）及BaCl2所致离体肠肌收缩活动的影响。结果：美洲大蠊提取物CⅡ-3对Ach、His及BaCl2引起的豚鼠离体肠肌痉挛有显著的解痉作用（P＜0．05）。结论：美洲大蠊提取物CⅡ-3对离体肠肌的收缩具有明显抑制作用，可能与其阻断了M受体、H1受体以及阻滞了Ca2+通道有关。

美洲大蠊；CⅡ-3；离体肠肌

自20世纪70年代以来，国内学者先后对美洲大蠊进行了研究，在消化系统方面美洲大蠊某有效部位所制成药物康复新，在临床上已被广泛应用于溃疡性结肠炎〔1-7〕、放射性食管炎〔8〕、消化性溃疡〔9-11〕、难治性胃食管反流病〔12〕、口腔粘膜溃疡〔13〕、糜烂性胃炎〔14-15〕、婴幼儿腹泻〔16〕、小肠外瘘〔17〕、痔疮〔18〕等，疗效较好。本实验研究的CⅡ-3是采用现代提取分离技术所获得的美洲大蠊另一有效部位，为了探讨此有效部位在消化系统方面是否和康复新有同样的效果，所以本实验观察了其对动物离体肠肌收缩活动的影响。

1 材料和方法

1．1 实验试剂及药品 乙酰胆碱（Acetylcholine，Ach），Sigma公司（批号：00011698）；硫酸阿托品，上海禾丰制药有限公司（批号：091102）；组胺（Histamine，His），Sigma公司（批号：00150816）；盐酸苯海拉明，广州明兴制药有限公司（批号：040702）；氯化钡（Barium Chloride，BaCl2），上海化工专科学校实验工厂（批号：830702）；盐酸维拉帕米，上海禾丰制药有限公司（批号：090201）；生理盐水，昆明南疆制药有限公司（批号：A0810005g2）；台氏液；美洲大蠊提取物CⅡ-3由大理学院药学院刘光明教授提供。

1．2 动物 普通级健康豚鼠14只，雌雄各半，体重400～500 g，由昆明医学院实验动物中心提供。合格证号：SCXK（滇）2008-0003。

1．3 器材 H W-400S恒温平滑肌槽（成都泰盟科技有限公司）、BL-420E+生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司）、张力换能器、手术器械、1 m L可调式微量移液枪等。

1．4 方法

1．4．1 CⅡ-3对豚鼠离体肠肌收缩活动的影响 分别观察CⅡ-3对Ach、His、BaCl23种物质诱导的肠肌收缩的抑制效果。健康豚鼠击头处死，迅速剖腹，取距回盲部10 cm处回肠的一段，置于盛有冷台氏液的器皿中，轻轻剥离回肠周围的脂肪组织，冲洗肠管，剪取1．5~2 cm长的肠段数节作为标本备用。标本一端穿线并固定于通气板背面的铁钩上，另一端通过蛙心夹连接到张力换能器并与BL-420E+生物机能实验系统连接，然后将标本放入恒温平滑肌槽的小槽内，立即通氧（1～2个气泡/s）。调整肠肌张力1．0 g，让标本在台氏液中稳定30min。待自主舒张活动稳定后，描记一段正常曲线，然后加入终浓度为1×10-6g/mL Ach，并描记收缩曲线，作用明显后，换液3次，待曲线恢复到用药前水平，再描记一段曲线；然后加入生理盐水，3 min后加入上述浓度的Ach并描记收缩曲线，作用明显后，换液3次，待曲线恢复到用药前水平，再描记一段曲线；如上操作，依次加入终浓度2．5×10-5g/mL、5×10-5g/mL、7．5×10-5g/mL的CⅡ-3以及1×10-6g/mL的工具药阿托品。如上操作，分别采用1×10-6g/mL His以及1×10-6g/mL BaCl2诱导肠肌收缩，观察CⅡ-3、1×10-6g/mL苯海拉明和1×10-6g/mL维拉帕米的抑制效果〔19〕。

2 结果

CⅡ-3三个剂量组对Ach所致肠肌收缩均有一定的抑制作用，抑制率分别为10．62%、13．67%、25．55%，呈一定的浓度依赖性。与生理盐水组比较仅有高剂量组具有统计学意义（P＜0．05），但是，CⅡ-3高剂量与阿托品比较效果相当（P＞0．05）。见表1。

表1 美洲大蠊提取物CⅡ-3对Ach所致肠肌收缩活动的抑制率（±s，n＝12）

表1 美洲大蠊提取物CⅡ-3对Ach所致肠肌收缩活动的抑制率（±s，n＝12）

注：与生理盐水组比较，*P＜0.05；与阿托品比较，#P＜0．05。

分组终浓度（g/m L）抑制率/%生理盐水—CⅡ-3（低）2.5×10-5CⅡ-3（中）5×10-5CⅡ-3（高）7.5×10-5阿托品1×10-61.05±0.56＃10.62±0.21#13.67±0.17＃25.55±0.17*44.06±0.11*

CⅡ-3三个剂量组对His所致肠肌收缩也有一定的抑制作用，抑制率分别为18．14%、18．02%、30．49%。与生理盐水组比较，CⅡ-3低、中、高剂量均具有统计学意义（P＜0．05），且其效果和苯海拉明效果相当（P＞0．05）。见表2。

表2 美洲大蠊提取物CⅡ-3对His所致肠肌收缩活动的抑制率（±s，n=12）

表2 美洲大蠊提取物CⅡ-3对His所致肠肌收缩活动的抑制率（±s，n=12）

注：与生理盐水组比较，*P＜0．05；与苯海拉明比较，＃P＜0.05。

分组终浓度（g/m L）抑制率/%生理盐水—CⅡ-3（低）2.5×10-5CⅡ-3（中）5×10-5CⅡ-3（高）7.5×10-5苯海拉明1×10-62.75±0.13＃18.14±0.13*18.02±0.12*30.49±0.10*40.80±0.12*

CⅡ-3三个剂量组对BaCl2所致肠肌收缩均有一定的抑制作用，抑制率分别为7．77%、27．93%、38．45%，具有一定的浓度依赖性。与生理盐水组比较，中剂量和高剂量的CⅡ-3具有统计学意义（P＜0．05），且高剂量CⅡ-3与维拉帕米效果相当（P＞0．05）。见表3。

表3 美洲大蠊提取物CⅡ-3对BaCl2所致肠肌收缩活动的抑制率（±s，n=12）

表3 美洲大蠊提取物CⅡ-3对BaCl2所致肠肌收缩活动的抑制率（±s，n=12）

注：与生理盐水组比较，*P＜0．05；与维拉帕米比较，＃P＜0．05。

分组终浓度（g/m L）抑制率/%生理盐水—CⅡ-3（低）2.5×10-5CⅡ-3（中）5×10-5CⅡ-3（高）7.5×10-5维拉帕米1×10-61.83±0.11＃7.77±0.12#27.93±0.13*#38.45±0.09*51.12±0.14*

3 讨论

M受体广泛分布在肠道平滑肌中并维持着平滑肌的收缩，其中，分布在肠道平滑肌纤维膜上的M受体主要是M2和M3，但M3是主要的功能受体。当Ach作用到平滑肌膜上的M3受体，M3受体耦联G蛋白（GP），使胞内三磷酸肌醇（IP3）和二酰基甘油（DG）第二信使浓度上升，进而引起C a2+释放和底物蛋白发生磷酸化，激发平滑肌产生收缩效应。

肠道平滑肌上还分布有大量的H1受体，当有大量His作用时，H1受体通过G蛋白偶联磷酯酶C促进磷酯酰肌醇代谢，增加IP3和DG，从而引起平滑肌的收缩。

BaCl2直接刺激回肠平滑肌释放细胞内的Ca2+而引起肠管平滑肌痉挛。

钙是胃肠道平滑肌的兴奋-收缩偶联者，引起肠道平滑肌收缩所需的大部分钙是在动作电位发生时从细胞外进入肌细胞的，小部分来源于肌浆网，当胞内Ca2+浓度升高到一定水平时，就会触发平滑肌收缩。

Ach、His、BaCl2分别通过激动M胆碱受体、H1受体及激活Ca2+通道来兴奋胃肠道，使其收缩幅度及张力增加，肠蠕动增加。本实验通过上述3个物质的拮抗剂的拮抗效果，与CⅡ-3的作用进行比较，以推测CⅡ-3可能的作用机制。实验结果表明，CⅡ-3对Ach、His、BaCl2所诱导的肠肌收缩均有抑制作用，且与相应的拮抗剂作用相当，提示CⅡ-3对肠肌收缩的抑制作用可能由胆碱受体、组胺受体介导或直接作用于肠道平滑肌，具有钙拮抗作用，但确切的作用机制还需要进一步探讨。

〔1〕潘红梅，周健，陈国强．康复新液保留灌肠治疗溃疡性结肠炎74例疗效观察〔J〕．云南中医中药杂志，2005，26（4）：13-14．

〔2〕樊悦，邓颖．康复新液保留灌肠治疗儿童溃疡性结肠炎22例〔J〕．华西药学杂志，2005，20（5）：465．

〔3〕李丽平.保留灌肠治疗儿童溃疡性结肠炎22例〔J〕．河南中医，2005，25（5）：54-55．

〔4〕王萌，董华英．中药内服加康复新液灌肠治疗慢性非特异性溃疡性结肠炎120例〔J〕．吉林中医药，2003，23（12）：24．

〔5〕丁建明，张爱民，郭守兵，等．思密达联合康复新治疗溃疡性结肠炎疗效观察〔J〕．医学文选，1999，18（6）：923-924．

〔6〕吕文，张莜凤，张啸．康复新液保留灌肠治疗溃疡性结肠炎临床疗效观察〔J〕．中国综合临床，2003，10（19）：912-913．

〔7〕洪砌．康复新治疗溃疡性结肠炎22例临床观察〔J〕．医学理论与实践，2003，16（9）：1044．

〔8〕樊林宏，许万松，周莉琴，等．康复新治疗放射性食管炎88例临床观察〔J〕．吉林医学院学报，1998，18（4）：82．

〔9〕钟毅，周红，钟灵，等．康复新液治疗难治性消化性溃疡50例临床观察〔J〕．深圳中西医结合杂志，2004，14（16）：333-338.

〔10〕梅坚．康复新液治疗消化性溃疡近期疗效观察〔J〕．河北医学，2002，8（3）：225．

〔11〕关云艳，刘万里，苏暾．康复新液联合法莫替丁治疗消化性溃疡82例〔J〕．中国中西医结合消化杂志，2003，11（2）：83-84．

〔12〕许国铭．重新认识，深入研究胃食管反流病〔J〕．中华消化杂志，2003，23（1）：5-6．

〔13〕刘霞．内外合治小儿口疮34例〔J〕．浙江中医杂志，1995，30（2）：64-65．

〔14〕武和平，李萍，郑昱．康复新液治疗糜性型胃炎112例疗效分析〔J〕．上海中医药杂志，2004，38（2）：28-29．

〔15〕彭阵雨．康复新液治疗糜烂性胃炎60例疗效观察〔J〕．医学临床研究，2003，20（10）：780-790．

〔16〕王建筑，刘宗银，吴顺芳．康复新灌肠治疗婴幼儿腹泻32例疗效观察〔J〕．中国乡村医生杂志，1990，7：34．

〔17〕周瑞堂．康复新外治小肠外瘘1例〔J〕．中医外治杂志，2002，11（2）：54．

〔18〕金建媚，丁云龙．痔疮术后康复新液创面换药疗效观察〔J〕．现代中西医结合杂志，2003，12（18）：1984．

〔19〕徐叔云，卞如濂，陈修，等．药理实验方法学〔M〕．2版.北京：人民卫生出版社，2002：1311-1312．

（责任编辑 蒋 康）

Effect of CⅡ-3 Extracted from Periplaneta americana on Isolated Guinea Pig Lieum Contraction

GAN Ping,ZHANG Xuqiang,GUO Pin,WANG Cong，PENG Fang*
（College of Pharmac，DaliUniversity，Dali Yunnan 671000，China）

Objective：To observe the effect of CⅡ-3 extracted from Periplaneta americana on the contraction activity in isolated guinea pig lieum.MethodsIn vitromyentericmotion testand the biological function analysis system were applied to record the CⅡ-3 effect on intestinal muscle spasm induced by Ach,His and BaCl2.ResultsCⅡ-3 extracted from Periplaneta americana can significantly inhibit the isolated guinea pig lieum constriction induced by Ach,His and BaCl2（P＜0.05）.ConclusionCⅡ-3 can significantly inhibit the constriction of the intestine muscle of guinea pig,and the mechanism of CⅡ-3 is probably related with blockage ofMreceptor,H1 receptor and calcium channels.

Periplaneta americana；CⅡ-3；isolated intestinalmuscle

Q969.25+3.1

A

1672-2345（2010）12-0020-03

2010-09-10

甘平，硕士研究生，主要从事药理学研究.

*通信作者：彭芳，教授，电话：0872-2257392.