原卟啉二钠对HCC细胞株体外放射增敏作用的研究

梁 勇 杨菊月 汪 耀

1 淮南联合大学医学系（232001）

2 南阳市第一人民医院（473065）

肝细胞癌（hepatocelluar carcinoma，HCC）是我国一种常见的消化道恶性肿瘤，其占原发性肝癌的90%，发病率仅次于胃癌和食道癌。目前治疗首选方法是手术切除，但术后的复发转移率是制约肝癌疗效进一步提高的重要因素之一；HCC对放疗并不敏感；其对化疗药物容易产生多药耐性（multidrug resistance，MDR）而降低治疗效果[1,2]。因此寻求新型的HCC分子靶向治疗药物成为当务之急。本研究对NAPP（Protoporphyrin Disodium，NAPP）在体外对HCC细胞系的毒性及其辐照增敏作用进行了探讨。

1 材料与方法

1.1 材料

药物及细胞：NAPP系安徽理工大学刘群红副教授惠赠（纯度97.3%），Chang肝细胞和SMMC-7721为本室保存。

1.2 方法

1.2.1 细胞毒性实验

复苏SMMC-7721及Chang细胞，取对数生长期细胞调整浓度为1× 105cell /mL，接种96孔板（100 μL/孔）。加入含有药物的完全培养基100μL。置细胞于37℃，5% CO2培养3d，每种浓度设5个复孔。实验设药物处理组、细胞对照组和空白对照组，加入NAPP终浓度分别为0、4.8、24、120、600、3000μg/mL，药物作用72h后用MTT法测OD值。每孔加入MTT（5mg/mL）20μL，37℃孵育4h后，每孔加入DMSO溶液150µL，570nm处测定其OD值。求出细胞抑制率及药物半数抑制浓度（IC50）。细胞抑制率（%）=（1-实验孔OD/对照组OD）×100%。

1.2.2 体外细胞抑制及放射增敏实验

取对数生长期SMMC-7721细胞，用含10%FBS的RPMI1640培养液调整细胞数为105个/mL，接种于96孔培养板，每孔100µL。同时加入药物NAPP（终浓度0～600μg/mL）100µL。置5%CO2培养箱内预培养4h后分两组：一组继续培养，另外一组用CO60射线照射，照射剂量分别为2、4和6Gy，照射后继续培养，于72h后MTT法测各组细胞OD值，方法同上。

1.2.3 统计学处理

采用SPSS 11.0进行ANOVA方差分析P＜0.05，差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 NAPP细胞抑制实验结果

见表1。

表1 NAPP对SMMC-7721和Chang细胞活性的影响(±s)

表1 NAPP对SMMC-7721和Chang细胞活性的影响(±s)

IC50：SMMC-7721=523.3μg/mL，Chang=8710.9μg/mL

组别 NAPP浓度(µg/mL)SMMC-7721OD值 Chang OD值对照 0 0.801±0.062 0.768±0.082 1 4.8 0.783±0.007 0.764±0.108 2 24 0.602±0.114 0.754±0.058 3 120 0.516±0.086 0.662±0.085 4 600 0.367±0.098 0.610±0.098 5 3000 0.260±0.008 0.576±0.054

2.2 NAPP辐照增敏实验结果

见表2。

表2 不同NAPP浓度在不同辐照剂量下对SMMC-7721的增敏作用(±s)

表2 不同NAPP浓度在不同辐照剂量下对SMMC-7721的增敏作用(±s)

*与未照射组比较 P＜0.05～0.01，▲●▼与单纯照射组比较P＜0.05～0.01

组别 0Gy 2Gy 4Gy 6Gy未照射组 0.801±0.062单纯照射组 0.810±0.083 0.780±0.069 0.554±0.102 24 0.602±0.114*0.623±0.127▲ 0.552±0.052● 0.501±0.043 120 0.516±0.086*0.492±0.068▲ 0.459±0.023● 0.404±0.059▼600 0.367±0.098*0.346±0.105▲ 0.301±0.059● 0.269±0.039▼

3 讨 论

NAPP可作为肝脏机能改善剂，以往对NAPP的研究都侧重其在保肝、护肝方面[3]，近年来主要在抗病毒方面，研究[4,5]发现NAPP可以在体外有效的抑制HBV和HCV复制。本文从NAPP对HCC细胞株辐照增敏角度研究了其新的药效作用。研究选取SMMC-7721和Chang细胞为对象，发现相同浓度NAPP对正常肝细胞Chang细胞毒性较小，而对HCC细胞毒性较大。根据毒性实验结果选取辐照增敏的浓度范围为24～600μg/mL，发现在此范围内照射与药物可协同抑制肿瘤细胞增殖；且其抑制作用呈现出辐照剂量和药物浓度依赖性。但NAPP对SMMC-7721的增敏效果更明显，范围更宽，浓度为24～600μmol。

本实验初步证明在一定浓度范围内NAPP体外对HCC 细胞其既有抑制肝癌细胞增敏作用，又具备对肝癌细胞体外放射增敏的作用，此为治疗HCC提供了新的途径；但其抑制HCC细胞系的具体机制仍需进一步研究。虽体外实验显示其有很好的应用前景，但其最终效果仍需要动物实验及临床验证。

[1]钟崇一,郭荣平,陈敏山,等.以手术为主治疗108例IIIA期肝细胞癌的疗效分析[J].癌症,2009,28(3)：274-278.

[2]钦伦秀,孙惠川,汤钊猷.原发性肝癌研究进展[J].中华外科杂志,2006,44(15)：1070-1074.

[3]张存春,蔡锡海.原卟啉钠治疗胆囊炎和胆石症100例[J].新药与临床,1989,6(2)：101-102.

[4]Li CP,Xu LF,Liu QH,et al.Extraction of protoporphyrin disodium and its inhibitory effects on HBV-DNA[J].World J Gastroenterol,2004,10(3)：433-436.

[5]梁勇,王克霞,王健.原卟啉钠抑制丙型肝炎病毒的体外实验研究[J].现代预防医学,2006,33(12)： 2248-2251.