高效液相色谱法测定红曲中洛伐他汀的含量

杜珊

（博福-益普生（天津）制药有限公司，天津 300384）

高效液相色谱法测定红曲中洛伐他汀的含量

杜珊

（博福-益普生（天津）制药有限公司，天津 300384）

目的：建立高效液相色谱法测定红曲中洛伐他汀含量的方法。方法：采用色谱柱AgilentZORBAXSB-C18(4.6×150mm，5μm)，流动相为甲醇-0.02%磷酸（75：25），流速为1.0mL/min，检测波长为237nm。结果：洛伐他汀在1.1936-3.5808μg范围内线性关系良好（γ=1），平均回收率为100.78%，RSD为1.40%。结论：本方法灵敏、准确，可作为红曲的质量控制方法。

高效液相色谱；红曲；洛伐他汀

红曲系通过现代生物工程技术分离出优质的红曲霉菌，经固体深层发酵精制而成一种纯天然绿色产品。本品性状为淡红色粉末，色调纯正，光热稳定性好，纯天然，安全无副作用，pH适用范围广，具有降血脂、血压、胆固醇、调节人体心脑血管健康、提高人体免疫力的医疗保健功效。近年来红曲霉的次级代谢物成为研究热点，从红曲中分离出优良的降血脂药物洛伐他汀是3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-COA)还原酶的抑制剂，这类化合物的化学结构中都有一个类似于HMG-COA的基团，其作用机理可能是通过对底物的竞争达到抑制酶的催化活性，从而具有显著的降血脂作用。本文进行了HPLC法测定红曲中洛伐他汀的研究，确定了最佳色谱条件和简便有效的样品处理方法，为红曲相关产品的研究开发提供参考。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

高效液相色谱仪：Waters2695SeperationsModule;Waters 717 Plus Auto Sample;Empower色谱工作站；Waters2487 Dual λ Absorbance Detercter。

超声清洗机：奥特塞恩斯 AS3120（120W、40KHz）（天津技术有限公司）。

天平：梅特勒－托利多AL204型电子分析天平。

1.2 试剂

甲醇：色谱纯（天津康科德科技有限公司）。

磷酸：分析纯（天津化学试剂三厂）。

洛伐他汀对照品：中国药品生物制品检定所（100600-200502）。

无水乙醇：分析纯（天津化学试剂二厂批号：20071204）。

2 实验条件的筛选

2.1 因素水平表

表1 因素水平表

2.2 正交实验表

表2 正交试验表

2.3 结论

从以上正交表的极差来看，B>A>C>D。即：影响此试验结果的最大因素为称样量。根据此数据分析所筛选出的最佳方案为A2B3C2，即用75%的乙醇为溶剂称样量为0.3g，超声30min为最佳方案。

3 方法与结果

3.1 色谱分析条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6×150mm，5μm)SN：USCM017738

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃；

进样量：20μL；

流动相：甲醇-0.02%磷酸（75：25）；

检测波长：237nm

3.2 对照品溶液的制备

精密称取洛伐他汀对照品14.92mg，置于50mL量瓶中，用75%乙醇溶解，定容，制成浓度为298.4mg/L的对照品溶液作为加样回收率的对照品；精密量取300mg/L的对照品溶液10mL，置于25mL容量瓶中，制成浓度为119.36mg/L的对照品溶液作为对照品溶液。

3.3 供试品溶液的制备

精密称取红曲样品0.3g，置10mL量瓶中，加入75%乙醇溶液，超声30min，放冷，定容，过0.45μm的滤膜，取续滤液，即得。

3.4 标准曲线的绘制

取298.4mg/L的对照品溶液，分别精密吸取2mL、3mL、10mL、5mL、15mL 于 10mL、10mL、25mL、10mL、25mL量瓶中，分别制成浓度为59.68mg/L、89.52 mg/L、119.36 mg/L、149.2 mg/L、179.04 mg/L的对照品溶液，分别取20μL注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。实验表明：洛伐他汀含量在1.1936～3.5808μg范围内呈良好线性关系，相关系数为γ=1，直线回归方程为y=3×106x-71635。

3.5 精密度实验

取119.36mg/L对照品溶液，按上述液相色谱条件，连续进样测定6次，计算出各峰面积RSD值为1.27%，测定结果见表3。

表3 仪器精密度试验结果

3.6 重复性实验

按“2.3”项下方法制备供试品溶液6份，进行测定，结果洛伐他汀平均含量的RSD值为0.76%，测定结果见表4。

表4 重复性试验结果

3.7 稳定性实验

取同一供试品溶液室温下放置，于第0、2、4、6、8、12h依次测定洛伐他汀含量，结果洛伐他汀含量的RSD值为0.81%，表明供试品溶液在12h内稳定，结果见表5。

表5 样品的稳定性试验

3.8 加样回收率实验

分别称取供试品约0.15g，精密称定，置于10mg容量瓶中，分别加入298.4mg/L对照品溶液各5ml，按“2.3”项下方法制备，在所述的色谱条件下测定，计算回收率，试验结果见表6。

表6 洛伐他汀回收率试验结果

3.9 样品测定

取三批红曲按“2.3”项下方法制备供试液，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图及面积，计算样品含量，结果为20070701含7.95 mg·g-1、20071101含 8.24 mg·g-1、20080201 含 8.23 mg·g-1。

4 讨论

应用高效液相色谱法作定量分析，前处理是一个非常重要的环节。据报道[3]，洛伐他汀含量测定多用甲醇或乙醇超声提取。本文也对溶剂以及超声时间做了比较。实验结果表明：用75%乙醇超声30min，可较完全提取红曲中的洛伐他汀，方法学验证说明该方法准确可靠。

在实验中发现，新配制的洛伐他汀对照品溶液只有一个吸收峰，是酯式的洛伐他汀。但室温下放置过夜后，再次测定时会出现2个吸收峰。因此建议试验时洛伐他汀对照品溶液及样品溶液均应新鲜配制。

［1］王春娜.HPLC法检测功能红曲中的洛伐他汀[J].北京农学院学报.2000,15(2):48-51.

［2］黄宏南.RP-HPLC法分离测定红曲中洛伐他汀[J].海峡预防医学杂志.2000,6(4):40-41.

Determination of lovastatin in red koji by HPLC

DU Shan
(Beaufour-Ipsen(Tianjin)Pharmaceutical CO.,LTD.,Tianjin 300384)

To establish a method for determination of Lovastatin in red koji.METHODS：ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5μm)column was used and the mobile phase was methanol-0.02%phosphoric acid (75:25).The detection wavelength was at 237nm,the flow rate was 1.0mL/min.RESULTS：The linear range was obtained between 1.1936-3.5808μg（γ=1）and the average recovery was 100.78%，with relative standard deviation(RSD)of 1.40%.CONCLUSION：This method is convenient,rapid and is suitable for determination of lovastatin in red koji.

HPLC;red koji;lovastatin

10.3969/j.issn.1008-1267.2010.03.019

O657.7+2

A

1008-1267（2010）03-053-03

2009-10-28