高效液相色谱法测定鬼臼毒素酊的含量

谢冬梅，刘 斐

(1.蚌埠医学院第一附属医院药剂科，安徽 蚌埠 233004; 2.合肥远志医药科技开发有限公司，安徽 合肥 230028)

鬼臼毒素属木脂素类化合物，主要存在于中药小檗科多年生草本类群鬼臼亚科八角莲属、桃儿七属、山荷叶属及足叶草属植物中，是一种具抗肿瘤活性的天然产物。鬼臼毒素能抑制正常皮肤的角朊细胞和宫颈癌细胞的分裂增殖，以及这些细胞对核苷酸的摄取和DNA的合成，临床上常用其酊剂治疗尖锐湿疣[1]。笔者用高效液相色谱法测定鬼臼毒素的含量，报道如下。

1 仪器与试药

LC-10ATVP型高效液相色谱仪(日本岛津)。鬼臼毒素酊(合肥远志医药科技开发有限公司，批号分别为080517，080518，080519);鬼臼毒素酊(辽宁华卫制药股份有限公司，批号为20071207);鬼臼毒素对照品(中国药品生物制品检定所);甲醇为色谱纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Shimpack VP-ODS柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇 -水(63∶37);流速:1.0 mL/min;检测波长:292 nm;柱温:室温;进样量:10 μL。在此条件下的色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

取经70℃减压干燥至恒重的鬼臼毒素对照品适量，用流动相溶解并定量稀释成0.5 g/L的溶液，即得对照品溶液。精密量取供试品1 mL，置10 mL量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。按处方比例取辅料制成空白样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密称取70℃下减压干燥至恒重的鬼臼毒素对照品25 mg，置25 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 2，3，4，5，6，7，8 mL，分别置10 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，分别取10 μL，注入高效液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积(A)为纵坐标、进样质量浓度(C)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 A=1.139×107C+2.869×105，r=0.999 93(n=7)。结果表明，鬼臼毒素质量浓度在0.201 2～0.804 8 g/L范围内与峰面积线性关系良好。

回收率试验:按处方比例，精密称取鬼臼毒素对照品20，30，40 mg各两份，分别置50 mL量瓶中，同时加入相应的辅料1 mL，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件每次进样10 μL。结果见表1。

表1 回收率试验结果(n=6)

精密度试验:取线性关系考察项下低、中、高质量浓度的对照品溶液，连续进样5次，测定峰面积。结果峰面积的 RSD分别为0.58% ，0.37% ，0.58%(n=5)。

稳定性试验:取回收率试验项下低、中、高3个质量浓度的溶液，分别于 0，2，4，6，8，12，24 h 时进样，记录峰面积。结果鬼臼毒素峰面积的 RSD分别为0.85%，0.83%，0.78%(n=7)。

重复性试验:精密量取样品(批号为080517)6份，按2.2项下方法制备供试品溶液，并按拟订的色谱条件测定峰面积，计算百分含量。结果鬼臼毒素含量的 RSD为0.54%(n=6)。

2.4 样品含量测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标法计算3批样品与1批已上市销售药品的鬼臼毒素含量。结果批号为 080517，080518，080519，071207的鬼臼毒素含量分别为标示量的100.60%，100.50%，100.30%，99.26%。

3 讨论

鬼臼毒素的最大吸收波长在292 nm，制剂中的辅料在此波长处无干扰，故选292 nm作为检测波长。以甲醇-水(63∶37)为流动相，鬼臼毒素与相邻杂质峰分离度好，保留时间为9.98 min，峰理论板数按鬼臼毒素峰计算为9 184.641，拖尾因子为0.978，符合2005年版《中国药典(二部)》[2]的要求。

高效液相色谱法简单、快速、回收率高、重现性好，并且可排除处方中辅料对鬼臼毒素含量测定的影响，适用于鬼臼毒素酊的质量控制。

[1]WS1-(X-044)-2002Z，国家药品标准[S].

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社，2005:附录29.