反相高效液相色谱法测定金荞麦片中槲皮素含量

项贵贤

(邢台医学高等专科学校药剂教研室，河北 邢台 054000)

金荞麦片具有清热解毒、排脓祛瘀、止咳平喘等功效，原药品标准中含量测定方法为分光光度法[1]，比较烦琐。该药现增加了一个薄膜衣的规格，为更好地控制药品质量，笔者采用反相高效液相色谱法测定了金荞麦中有效成分槲皮素的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC-10AVP型高效液相色谱仪，包括单元泵、紫外检测器、“浙大”N 2000色谱工作站;AS 3120 B型超声提取器。槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100018-200706);金荞麦片(河北国金药业有限责任公司);甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果[2]

2.1 色谱条件

色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇-0.4%磷酸(50∶50);流速:1.0 mL/min;柱温:40℃;检测波长:370 nm;进样量:20 μL;理论板数按槲皮素计算不低于2 500。

2.2 溶液制备

精密称取经120℃干燥4 h至恒重的槲皮素对照品适量，加甲醇配制成15 μg/mL的对照品溶液。取装量差异项下合格的药物，去除薄膜衣，研细，精密称取0.25 g，置250 mL磨口瓶中，加甲醇-25%盐酸溶液(4∶1)混合液50 mL，加热回流2 h，取出，放冷，滤过，弃去滤液，滤渣用甲醇分2次洗涤，每次10 mL，滤过，合并滤液，转移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。根据处方比例配制不含槲皮素的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

干扰试验:将制备的阴性对照品溶液依样品分析方法稀释并测定。结果在槲皮素对照品峰的位置上未发现干扰峰(图1)，表明其他组分不干扰槲皮素的测定。

线性关系考察:按对照品溶液制备方法制备质量浓度为100 μg/mL 的对照品贮备液，分别精密量取 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，分别进样20 μL，测定峰面积，以进样质量浓度(μg/mL)为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，得线性回归方程 Y=8 104.2 X-973.37，r=1.000(n=5)。结果表明，槲皮素质量浓度在10.0～50.0 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

图1 高效液相色谱图

精密度试验:取对照品贮备液20 μL，连续进样5次，测定峰面积值。结果的 RSD=0.28%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:分别精密吸取同一份供试品溶液20 μL，在1，2，3，4，5，6，7，8 h 时测定峰面积。结果的 RSD=0.35%(n=8)，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

重复性试验:取同一批供试品溶液5份，测定峰面积，计算出样品含量分别为 0.322，0.318，0.316，0.314，0.320 mg/片，平均0.32 mg/片，RSD=0.99%(n=5)，表明本方法的重复性良好。

加样回收试验:取同一批(批号为0804161)样品共6份，每份约0.12 g，精密称定，精密加入一定量槲皮素对照品贮备液，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 槲皮素加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

精密称取3批样品，依法测定含量。结果批号为0804161，0804231，0805061的3批金荞麦片中槲皮素含量分别为0.30，0.33，0.32 mg/片(n=2)。

3 讨论

取对照品溶液，在190～400 nm波长范围内扫描，最后选择槲皮素在此波长区域中吸收强度最大且无干扰的370 nm波长作为检测波长。常温下测定该产品时，易产生拖尾现象，峰的吸收不正常，把柱温设为40℃能消除此现象。试验中对供试品溶液进行了多次处理，从而达到净化目的。在用甲醇-0.4%磷酸溶液(50∶50)作为流动相洗脱时，所得槲皮素峰形较好，其他成分干扰较少，分离度令人满意。因此，反相高效液相色谱法具有专属、可靠、灵敏度高、干扰小等特点，可作为测定金荞麦片中槲皮素含量的方法。

[1]WS3-B-3612-98，卫生部药品标准·中药成方制剂(第19册)[S].

[2]何 勇.高效液相色谱法测定肾石通颗粒中槲皮素的含量[J].安徽医药，2006，10(2):119-120.