稳消颗粒对兔实验性动脉粥样硬化血清FIB和CRP表达的影响

霍清萍,梁 芳,孔 林,王宇新,李金菩

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是指脂质通过受损的内膜进入内膜下并能够沉积,同时伴有平滑肌细胞(SMC)及纤维成分增生,逐渐发展形成局限性的斑块,动脉壁因而增厚、变硬,斑块内部组织坏死崩解与沉积的脂质结合形成粥样物质,是严重危害人类健康的主要疾病之一。近年来,随着动脉粥样硬化基础研究的不断深入,越来越多的证据表明,炎症贯穿于AS病变发生、发展的始终。CRP不仅是反映炎症活动程度的一个炎症指标,还是预示动脉粥样硬化性疾病发病的一个独立危险因子。纤维蛋白原不仅反映血液的高凝状态,同时亦是AS活动性的标志。细胞因子CRP可上调纤维蛋白原(FIB)的合成。本实验通过喂饲高脂饲料的方法,建立兔AS模型,观察稳消颗粒对AS血清CRP、FIB水平的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物 36只体重2.2 kg～2.5 kg健康新西兰大白兔,月龄3个月～4个月,雌雄不限,购自上海市中科院实验动物中心,饲养条件为2级,室温保持在22℃～24℃,相对湿度50%,光照时间7:00～17:00。

1.2 实验药物 稳消颗粒为免煎颗粒,由江阴天江药业有限公司代为生产。水蛭、丹参、赤芍、半夏、石菖蒲、胆南星、丹皮、黄芩,各药按2∶2.5∶2.5∶1.5∶1.5∶1.5∶2.5∶1比例混合,批号:20070810。辛伐他汀:商品名舒降之,默沙东公司出品,批号:20070114。根据临床用药剂量,按人与动物体重比例折算,折合实验兔用量:水蛭660 mg/kg;丹参、丹皮、赤芍各825 mg/kg;石菖蒲、胆南星、半夏各495 mg/kg,黄芩330 mg/kg,辛伐他汀1.1 mg/kg,以上药物以蒸馏水溶解,混匀后灌胃。

1.3 实验试剂与仪器 C-反应蛋白试剂盒:美国DARE BEHRING公司;凝血全套试剂盒:日本Sysmex公司。

1.4 分组及给药方法 将 36只大白兔随机分为空白组(9只)、造模组(27只)。空白组给予150 g/d的标准饲料,造模组高脂饮食喂养8周,高脂饮食100 g/d,余由标准饲料补足,均自由饮水。高脂饲料喂养8周后,在造模组任取1只兔子,处死,于腹主动脉至髂总动脉分叉处(以左右髂动脉分叉为参照),向上留取2 cm标本,作石蜡切片,光镜下观察造模情况,确立造模成功。再将造模组随机分为稳消颗粒组、辛伐他汀组、模型对照组;稳消颗粒组、辛伐他汀组分别给予稳消颗粒、辛伐他汀干预;模型对照组、空白组均给予等体积蒸馏水灌胃;各组均标准饲料喂养,灌胃每日1次,均自由饮水,连续8周。试验结束。取材前夜禁食,经兔耳缘静脉采血,离心分离血清,-40℃冻存,用作测定CRP、FIB。

1.5 检测项目及检测方法 HE染色结果为:蓝色为细胞核,红色为细胞间质。采用酶联免疫法测定CRP;采用凝固比浊法测定FIB。

1.6 统计学处理 采用SPSS 11.5软件进行统计分析,数据以均数±标准差(±s)表示,组间比较采用单因素方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 对模型对照组动脉硬化斑块的观察 高脂饮食喂养8周后,大体观察兔腹主动脉均有不同程度的AS改变。HE染色显示实验兔腹主动脉内膜出现弥漫性、融合成片的黄色斑块。

2.2 各组血清CRP、FIB检测结果 与空白组比较,模型对照组、用药组CRP与FIB水平均有不同程度的提高(P＜0.05)。稳消颗粒组、辛伐他汀组CRP与FIB与模型对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),但稳消颗粒组、辛伐他汀组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。详见表1。

表1 各组血清CRP、FIB检测结果( ±s)

表1 各组血清CRP、FIB检测结果( ±s)

项目 组别 n 实验前 造模后 治疗后CRP 空白组 8 0.15±0.08 0.14±0.09 0.18±0.072)(mg/L) 稳消颗粒组 7 0.14±0.07 4.45±0.65 2.15±0.531)2)辛伐他汀组 7 0.13±0.06 4.48±0.72 2.16±0.511)2)模型对照组 8 0.12±0.11 4.46±0.84 4.49±0.891)FIB 空白组 8 1.49±0.15 1.52±0.20 1.54±0.262)(g/L) 稳消颗粒组 7 1.50±0.16 4.11±0.36 2.31±0.301)2)辛伐他汀组 7 1.48±0.14 4.12±0.41 2.54±0.611)2)模型对照组 8 1.51±0.17 4.13±0.38 4.14±0.401)与空白组比较,1)P＜0.05;与模型对照组比较,2)P＜0.05

3 讨 论

近年来研究发现[1]CRP是一个非特异性炎性标记物,炎症、感染、和组织损伤时均可使其浓度增高,取决于炎症刺激的程度。有研究表明[2,3]CRP是AS发生和发展中最具有标志性的,也是最具有敏感性的指标。大量研究显示[4,5],CRP不仅是反映炎症活动程度的一个炎症指标,还是预示动脉粥样硬化性疾病发病的一个独立危险因子。Paul等[6]的研究为CRP即直接参与动脉粥样硬化的理论提供了直接的证据,他们的研究证实以敲除ApoE为背景的CRP转基因大鼠,由于CRP过表达,主动脉粥样硬化病变加速。

FIB是目前为止知道的最为复杂的蛋白质,其分子组成不均一,正常血浆中的含量为2 g～4 g,半衰期为 3 d～4 d。FIB增高时,特别是其活性增强时能直接提高血浆黏度。而血浆黏度增高时又影响全血黏度,另外高纤维蛋白原的分子链结构也可使红细胞发生缗钱状聚集,从而也使血黏度增高。血浆纤维蛋白原浓度直接或间接导致动脉粥样硬化程度,动脉粥样硬化是一种慢性炎性疾病,从动脉硬化斑块生长、破裂构成其全部病理基础。斑块破裂使其粥样硬化核心接触动脉血而形成血栓。

中医学治疗动脉粥样硬化历史悠久。认为本病与体虚、年老、劳累、情绪、饮食、气滞、瘀血、痰浊、寒侵等因素有关。 病机为本虚标实。气虚(或阴虚)为本,血瘀、痰浊、寒凝、气滞为标,临证多虚实夹杂。“血瘀痰浊”之病机贯穿于动脉粥样硬化发病的整个过程。长期以来治疗多围绕活血化瘀、化痰通络、补虚而变化应用,活血化瘀为其治疗大法。但在长期实践中我们体会,本病患者非但痰湿瘀滞,且蕴而化热者也颇多见。痰湿瘀滞内结,血脉艰涩;瘀滞越久,蕴热愈盛。“热瘀互结,痰浊蕴聚”当是本病的中医学的基本病机之一;并以此拟定具有活血通络,温化痰浊,清热化瘀的稳消颗粒,在缓解临床症状、控制病情等方面均收到了较好的效果。近年来,我们对稳消颗粒的作用环节与药用机制进行了研究,发现稳消颗粒可抑制单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达,益于 AS斑块防治与稳定[7]。本次研究也发现,稳消颗粒组与辛伐他汀组的CRP和FIB水平均分别明显低于模型对照组(P＜0.05),尽管两组之间的差异无统计学意义。稳消颗粒可抑制CRP表达,降低FIB水平。再次显示利于稳消颗粒益于AS斑块的稳定,具体作用环节还待日后进一步深入研究。

[1] Koerig W.Inflammation and coronary heart disease:An overview[J].Cardiol Rev,2001,9:31-35.

[2] Albert M A,Ridker PM.The role of CRP in cardiovascular diseaserisk[J].Curr Cardiol Rep,1999,l:99-104.

[3] Yu H,Rifin N.High sensitivity CRP and atherosclerosis,from theo ry to therapy clinic[J].Biochemistry,2000,33:601-610.

[4] Ridker PM,Glynn RJ,Henneken CH,et al.C-reactive protein adds to the 36 predictive value of total and HDL cholesterol in determining risk of first myocardial infarction[J].Circulation,1998,97:2007-2011.

[5] Ridker PM,Hennekens CH,Buring JE,et al.C-reactive protein and other markers of inflammation in prediction of cardiovascular disease in women[J].N Engl J Med,2000,342:836-843.

[6] Paul A,Ko KW,Li L,et al.C-reactive protein accelerates the progression of atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient miee[J].Circulation,2004,109(5):647-655.

[7] 霍清萍,梁芳,孔林,等.稳消颗粒对兔实验性动脉粥样硬化单核细胞趋化蛋白-1及肿瘤坏死因子-α表达的影响[J].中国中医药信息杂志,2009,16(11):29-31.