顶空气相色谱法测定美罗培南中有机溶剂的残留量

宋更申，姜建国，刘红莉，孙 婷（河北省药品检验所，石家庄市 050011）

美罗培南（Meropenem）是在美国上市的第2个非肠道给药的半合成碳青霉烯类抗生素，其对肾脱氢酶（DHP-1）稳定，在临床上可以单独使用。美罗培南在合成过程中，使用了甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、正丁醇等有机溶剂，但关于其有机溶剂残留的研究，国内尚未见文献报道。笔者根据ICH[1]的指导原则和2005年版《中国药典》的相关规定[2]，并参考有关文献[3]，采用顶空气相色谱法，以水为溶剂，同时测定上述6种溶剂残留量。结果表明，本方法简单、准确、灵敏度高、重复性好，可用于美罗培南中有机溶剂残留量的测定。

1 仪器与试药

6890型气相色谱仪、7694E型顶空进样器均由美国Agilent公司提供；BP 211D型电子天平（德国Sartorius公司）。

美罗培南原料药（河北岩峰医药科技有限公司，批号：080601、080602、080603，含量分别为98.9%、99.0%、98.9%）；甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、正丁醇均为色谱纯（天津光复精细化工厂）；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DB-624石英毛细管柱（60 m×530 μm×1 μm）；柱温：采取程序升温，70℃维持10 min，以10℃·min－1的速度升至120℃，维持2 min；检测器：氢火焰离子化检测器（FID）；检测器温度：250 ℃；分流比：1∶1；进样口温度：200 ℃；载气：氮气；流速：3.0 mL·min－1；顶空进样，平衡温度：90 ℃，平衡时间：30 min；顶空瓶加压时间：0.2 min；进样时间：1 min；定量环体积：1 mL；定量环温度：100℃；传输线温度：110℃；水为溶剂。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品贮备液的制备：精密称取甲醇60 mg、乙醇100 mg、丙酮100 mg、乙腈 8.2 mg、二氯甲烷12 mg、正丁醇100 mg，置于同一100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。2.2.2 对照品溶液的制备：精密量取对照品贮备液10 mL，置于100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取对照品溶液5 mL，置于20 mL顶空进样瓶中，密封，摇匀，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备：精密称取本品约0.1 g，于20 mL顶空进样瓶中，精密加水5 mL，密封，振摇使溶解，即得。

2.3 系统适用性试验

精密量取“2.2”项下对照品、供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行分析，记录色谱，详见图1。

图1 顶空气相色谱图Fig 1 Headspace GC chromatography

由图1可知，甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、正丁醇分离良好，理论板数均不低于5 000。

2.4 标准曲线的制备

精密量取对照品贮备液10、10、5、5、5、2 mL，分别置于10、25、25、50、100、100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，分别精密量取5 mL，置于20 mL顶空进样瓶中，密封，摇匀，按“2.1”项下色谱条件进行分析，以峰面积（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，进行线性回归，结果见表1。

表1 线性关系考察结果（n＝6）Tab 1 Linear range（n＝6）

2.5 精密度试验

精密量取对照品溶液5 mL，置于20 mL顶空进样瓶中，共6份，密封，摇匀，按“2.1”项下色谱条件进行分析，计算甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、正丁醇峰面积的RSD分别为1.0%、2.2%、0.9%、2.2%、1.6%、1.1%。

2.6 重复性试验

精密称取本品（批号：080601）约0.1g，置于20 mL顶空进样瓶中，共6份，精密加水5 mL，密封，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件进行分析，检出本品中甲醇为0.1%，RSD＝1.5%；乙醇为0.4%，RSD＝1.2%；丙酮、乙腈、二氯甲烷、正丁醇均未检出。

2.7 稳定性试验

精密量取“2.2”项下对照品溶液，于室温下放置0、1、2、4、8、12 h，分别按“2.1”项下色谱条件进行分析。结果，甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、正丁醇在12 h内的RSD分别为0.5%、1.1%、1.0%、1.7%、2.0%、1.2%，表明本溶液在12 h内稳定。

2.8 回收率试验

精密称取已知各溶剂含量的样品（批号：080601）0.1 g，置于20 mL顶空进样瓶中，共9份，各精密加入对照品贮备液0.4、0.5、0.6 mL，各3份，再分别用水稀释至5.0 mL，密封，摇匀，按“2.1”项下色谱条件进行分析，以外标法计算，结果见表2。

表2 回收率试验结果（n＝9）Tab 2 Results of recovery tests（n＝9）

2.9 最低检出限

采用逐步稀释法进行测定，以信噪比约为3时计算甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、正丁醇的最低检出限。结果，最低检出限分别为0.41、0.43、0.09、0.08、0.06、0.25 ng。

2.10 样品中有机溶剂残留量的测定

取3批样品，按“2.2”项下方法制备对照品、供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行分析，再以外标法计算6种溶剂的含量。结果，样品中甲醇的残留量均为0.1%，乙醇的残留量为0.4%，其它溶剂均未检出，均符合2005年版《中国药典》中的相关要求。

3 讨论

本文采用了顶空进样法，可以通过控制温度使待测溶剂有效汽化，避免了直接进样时样品和水对进样口及色谱柱的污染，同时也减小了主成分对分离测定的干扰。美罗培南（阴性对照）在该顶空条件下不汽化，在色谱图中亦无响应，不干扰残留溶剂的测定。

笔者曾考察了不同的顶空温度和顶空时间对样品测定的影响。结果，样品在70、80、90℃的顶空温度下均稳定，为了提高检测灵敏度，本试验选择90℃作为顶空温度；本品在30、40 min的顶空平衡时间内得到的峰面积基本一致，故本试验选择30 min作为顶空平衡时间。

[1]周海钧主译.药品注册的国际技术要求（质量部分）[M].北京：人民卫生出版社，2001：343.

[2]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：54～57.

[3]李珂珂，谭丰苹.毛细管气相色谱法测定拉米夫定中有机溶剂的残留量[J].中国药房，2007，18（19）：1 502.