一枝黄花的提取工艺优选及质量控制

冯 华，邹孔强，王小东，张 强

（贵州省遵义市药品检验所，贵州 遵义 563000）

一枝黄花的提取工艺优选及质量控制

冯 华，邹孔强，王小东，张 强

（贵州省遵义市药品检验所，贵州 遵义 563000）

目的 筛选一枝黄花中有效成分芦丁提取工艺的最优条件及对芦丁进行含量测定。方法 采用正交试验法，以提取时间、提取次数、甲醇质量分数为考察因素，以芦丁含量为指标，对提取条件进行优选。采用高效液相色谱（HPLC）法对芦丁含量进行测定。结果 最佳提取工艺为提取时间30 min，提取次数3次，甲醇质量分数70%。含量测定以乙腈-甲醇-0.4%醋酸溶液(16∶8∶76)为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为360 nm，线性范围为0.687 6～1.604 4!g(r=0.999 5)，平均回收率为99.27%，RSD为0.69%(n=6)。结论 优选的工艺可行，具有操作性。用HPLC法测定含量简便、灵敏、准确。

提取工艺；正交试验；高效液相色谱法；含量测定

Abstract：ObjectiveTo optimize the extracting technology of the effective ingredient rutin from Solidago decurrens Lour and to establish its quality control.MethodsThe orthogonal test was used，with the extracting time，extracting times and methanol concentration as the factors，the content of rutin as the index for screening the extracting condition.Rutin content was determined by the HPLC methods.ResultsThe best optimized extracting procedure was：each time 30 min，extracting for 3 times and 70% methanol.The Diamonsil C18column was used with the mobile phase of CH3CN-methanol-0.4% acetic acid aqueous solution(16 ∶8 ∶76)，the detection wavelength was 360 nm，the flow rate was 1.0 mL/min.The good linear range of rutin was within 0.687 6-1.604 4!g，r=0.999 5.The average recovery rate was 99.27%and RSD was 0.69%(n=6).ConclusionThe optimized technology is feasible and easily operative.The HPLC determination method for the rutin content is simple，sensitive and accurate.

Key words：extacting technology；orthogonal design；HPLC；content determination

一枝黄花是菊科植物一枝黄花 Solidago virga-aure-aL.var.leiocarpa(Benth)A·Gray的干燥全草，为贵州省少数民族用药[1]，具有疏风散热、解毒消肿、退黄疸的功效，常用于治疗感冒、百日咳、黄疸型肝炎、扁桃体炎。本试验采用正交试验法，以有效成分芦丁为参考指标，对一枝黄花提取工艺进行优选及质量控制进行研究，为一枝黄花的开发利用及质量控制提供依据，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters1525型高效液相色谱仪；KQ-300DE型超声仪。芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号为0080-9705)；一枝黄花药材（采集于遵义县，经鉴定为菊科植物一枝黄花的干燥全草）；甲醇和乙腈为色谱纯，水为纯净水，其他均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 提取工艺优选

2.1.1 因素水平确定

分别选择提取时间（因素A）、提取次数（因素B）、甲醇质量分数（因素C）3个考察因素，以芦丁含量为考察指标，每个因素分3个水平，因素水平表见表1。

表1 因素水平表

2.1.2 正交试验与结果

用L9(34)正交试验表进行试验，结果见表2。方差分析见表3，可见提取时间、提取次数、甲醇质量分数对提取的芦丁含量无影响。直观分析结果显示，最佳提取工艺条件为A3B3C3，即提取时间为超声30 min，提取次数3次，甲醇质量分数为70%。

表2 正交试验结果表

表3 正交试验方差分析

工艺验证结果见表4，表明优选的提取工艺对芦丁提取效果较好、工艺稳定。

2.2 芦丁含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5!m)；流动相：乙腈 -甲醇 -0.4% 醋酸溶液(16 ∶8 ∶76)；流速：1.0 mL/min；柱温：25℃；检测波长：360 nm；进样量：10!L。理论塔板数按芦丁峰计应不低于2 500。高效液相色谱图见图1。

2.2.2 溶液制备

精密称取芦丁对照品11.46 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取一枝黄花药材粉末（过三号筛）约2.0 g，精密称定，每次加溶剂15 mL，按正交表进行超声试验，最后加相应质量浓度的溶剂定容到50 mL量瓶中，制得供试品溶液。

表4 一枝黄花正交试验的工艺验证结果

图1 高效液相色谱图

2.2.3 方法学考察

线性关系考察：精密吸取对照品溶液，分别进样6，8，10，12，14!L，测定峰面积，以芦丁质量浓度(!g)为横坐标、峰面积积分值(A)为纵坐标进行线性回归，回归方程为 Y=3.0×109X-125.3，r=0.999 5(n=5)。结果表明芦丁进样量在0.687 6～1.604 4!g范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：精密吸取对照品溶液，依法测定。结果平均峰面积为1 762 972，RSD=1.3%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：同一供试品溶液，分别于0，4，8，16，24 h时测定。结果平均峰面积为1 759 985，RSD为1.2%(n=5)，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

重现性试验：取样品粉末约2.0 g，精密称定，依法制备供试品溶液并测定。结果平均峰面积为1 765 923，平均含量为0.171%，RSD=1.0%(n=5)，表明方法重现性良好。

加样回收试验：取已知含量(0.169%)的样品6份，每份约为1.0 g，精密称定，精密加入芦丁对照品溶液(1.76 mg/mL)1.0，1.2，1.4 mL，置50 mL量瓶中，加相应溶剂至刻度，依法测定含量，计算回收率，结果见表5。

表5 芦丁加样回收试验结果（n=6）

2.2.4 含量测定

分别依法测定3批样品结果平均含量为0.173%。

3 讨论

一支黄花的有效成分芦丁可用甲醇或乙醇提取。为选择适合溶剂，以甲醇和乙醇为溶剂，以不同质量分数进行超声提取，结果以甲醇为溶剂的芦丁提取率明显高于以乙醇为溶剂，故本试验选择甲醇为提取溶剂。

优选的提取工艺可行、稳定。HPLC法简便、灵敏、准确，可对一枝黄花的开发利用及质量控制提供了一定的参考。

[1]DB52/YC001-2003，贵州省中药材、民族药材质量标准[S].

Study on Extracting Technology of Solidago Decurrens Lour and Its Quality Control

Feng Hua，Zou Kongqiang，Wang Xiaodong，Zhang Qiang
(Zunyi Institute for Drug Control，Zunyi，Guizhou，China 563000)

R284.2；R282.71

A

1006－4931(2010）08－0049－02

冯华，男，硕士研究生，主要从事药品检验及新药研 究 ，（电 话 ）0852-8928059（ 电 子 信 箱 ）fenghua781014@yahoo.com.cn。

2009－03－03；

2009－06－28）