MIF和VEGF在子宫内膜异位症组织中的表达及临床意义

刘晶华,冷维春,刘俊宝*,王 微

(1.上海市公共卫生临床中心,上海 201508;2.吉林大学中日联谊医院妇产科;3.吉林大学第四医院)

MIF和VEGF在子宫内膜异位症组织中的表达及临床意义

刘晶华1,冷维春2,刘俊宝2*,王 微3

(1.上海市公共卫生临床中心,上海 201508;2.吉林大学中日联谊医院妇产科;3.吉林大学第四医院)

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和血管内皮生长因子(VEGF)在子宫内膜异位症(Ems)组织中的表达情况及其两者的相关性。方法应用免疫组织化学技术对50例EMs组织中的MIF和VEGF蛋白的表达情况进行研究。结果MIF在Ems中异位内膜的表达明显高于在位内膜(P＜0.05),在位内膜中的表达明显高于正常对照内膜(P＜0.05);VEGF在Ems中异位内膜的表达同样明显高于在位内膜(P＜0.05),在位内膜中的表达高于正常对照内膜(P＜0.05);MIF和VEGF表达呈正相关。结论MIF和VEGF在异位内膜中的表达呈明显的正相关,提示MIF与VEGF协同促进异位内膜的生长。

Ems;MIF;VEGF

(Chin J Lab Diagn,2010,14:1405)

子宫内膜异位症(EMs)是指具有生长功能的子宫内膜组织(腺体和间质)出现在子宫腔被覆内膜及宫体肌层以外的其他部位[1],属良性疾病,但具有侵袭、扩散等恶性肿瘤的生长特征。MIF可从多方面促进子宫内膜在异位组织的生长。VEGF通过参与异位内膜组织的周围新生血管的形成,对EMS的发生、发展起重要作用。本文利用免疫组织化学的方法,研究MIF及VEGF在子宫内膜异位症的异位及在位内膜组织及正常内膜组织中的表达,探讨MIF及VEGF与子宫内膜异位症发生、发展的作用及两者的相关性。

1 资料与方法

1.1 资料

选取2006年3月-2007年12月期间吉林大学中日联谊医院子宫内膜异位症患者50例,患者年龄23-46岁,平均年龄33.8岁。取典型异位内膜组织50例,刮取在位内膜40例,另取同期非子宫内膜异位症(并排除其它妇科疾病)的正常人自愿刮宫所取正常子宫内膜组织30例作为对照,患者年龄26-49岁,平均年龄37.5岁。所有标本均经10%甲醛固定,常规石蜡包埋,4 μ m连续切片,每一标本取3张切片,其中1张做HE染色明确病理诊断,其余两张行MIF及VEGF免疫组化染色,试剂盒内已知阳性片作阳性对照。所有切片均经病理学专家盲法认定。

1.2 方法

采用SP免疫组织化学方法,DAB显色,苏木素复染细胞核。MIF(FL-115)为兔抗人多克隆抗体,购自美国Santa Cruz公司,兔抗人多克隆抗体VEGF、SP试剂盒和DAB显色液均购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 结果判定

MIF免疫组化染色以细胞质或细胞核中出现棕黄色颗粒为其阳性判定标准;VEGF免疫组化染色以细胞质或细胞膜中出现棕黄色颗粒为其阳性判定标准。根据细胞染色强度和染色细胞所占面积积分之和进行判断。染色强度评分标准:不着色为0分,黄色为1分,棕黄色为2分,黄褐色为3分。染色面积评分标准:无细胞染色为0分,＜25%为1分,26%-50%为2分,＞50%为3分。两种评分相加,0-1分为(-),2分为(+),3-4分为(++),5-6分为(+++)。≤2分的定为阴性,＞2分的定为阳性。

1.4 统计学方法

显著性检验采用 χ2检验。MIF和VEGF的相关性应用非参数统计中Spearman等级相关进行分析。所有数据统计均在SPSS11.5软件上进行。

2 结果

2.1 MIF在正常子宫内膜组织及EMs患者在位内膜及异位内膜中的表达情况(见表1)。在位内膜、异位内膜与正常子宫内膜表达率均有显著性差异(P＜0.05)。

表1 MIF在正常子宫内膜及EMs在位、异位内膜中的表达

2.2 VGEF在正常子宫内膜组织及EMs患者在位内膜及异位内膜中的表达情况(见表2)。异位内膜、在位内膜与正常子宫内膜表达率均有显著性差异(P＜0.05)。

表2 VEGF在正常子宫内膜及EMs在位及异位子宫内膜中的表达

2.3 MIF及VEGF在50例EMs异位内膜中表达的关系。

如表3所示,MIF阳性表达与VEGF阳性表达呈正相关(r=0.307,P＜0.05),提示两者具有协同作用,可能通过某种调控机制共同调控异位内膜的生长。

表3 MIF和VEGF在EMs异位内膜中表达的相关性

3 讨论

巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)是Bloom和Bennett等研究迟发性超敏反应时发现的一个细胞因子,是可溶性的淋巴因子[2]。参与多种生理生化过程,如:炎症反应、免疫应答、细胞增殖、血管生成以及肿瘤形成等过程。子宫内膜的异位生长必须依赖新生血管提供营养,新生血管的形成是内膜种植及发展的必要条件。研究发现,MIF可能通过以下两种途径促进血管生成:一是直接通过刺激血管内皮细胞增殖发挥作用;二是通过聚集巨噬细胞并分泌各种血管生成因子间接发挥血管生成作用。Eiji[3]等研究也证实,MIF能刺激内皮细胞形成内皮血管。另有研究[4]发现MIF在早期病变中表达增多,提示MIF可能在子宫内膜异位症早期血管形成中起重要作用。单志新[5]等通过分子克隆,定量PCR的方法在大肠杆菌中表达出MIF,MIF能特异性诱导人血管内皮细胞中血管生成相关基因(VEGF165、FGFR3、MMP9、TGF-a、PDGF-a等)的表达,参与血管形成。另MIF通过多种途径促进子宫内膜组织在异位的种植。MIF通过提高MMPs的能力,增强了内膜细胞的侵袭力,使内膜细胞易于植入。Harada[6]等进行了EMs在位及异位内膜与正常女性子宫内膜对凋亡敏感性的比较实验发现,EMs患者在位及异位内膜对凋亡的敏感性均明显下降,异位者较在位者下降更明显,且无周期性变化。因此,MIF在子宫内膜异位症的发生发展中起作用,其可通过多种机制参与内异症的发生发展。

血管内皮生长因子(VEGF)是迄今发现最强的促血管生成因子,在体内外均有特异性促进血管发生的作用。研究发现VEGF是一种多功能的血管生成因子,可直接刺激内皮细胞生长,促使血管生成;也可诱导细胞表达多种组织蛋白酶,降解细胞外基质,从而介导内皮细胞迁移和浸润,诱导血管生成;同时VEGF可以与其受体特异性结合,通过降解血管内皮细胞的基质、削弱血管的屏障作用,致使新生血管基底膜缺损加重,从而促进子宫内膜异位症的异位种植。血管生成在EMs的发生发展中占有重要位置[7],异位内膜在盆腔局部的种植与病灶的进一步发展需要新生血管提供营养[8,]Goteri等[9]通过研究得出血管新生(angiogenesis)在卵巢子宫内膜异位症中发挥重要作用;Oosterlynack等[10]研究显示:EMs患者腹腔液中VEGF等一些血管活性物质水平增高,使腹壁微血管生成增多,导致盆腔局部对异位内膜种植的接受能力增强。可见血管生成与EMs发生、发展密切相关,腹腔局部微环境内新生血管的形成为异位的子宫内膜的种植发展提供了营养和物质基础。

我们的研究发现,MIF与VEGF这两种因子在子宫内膜异位症的发生发展过程中起重要作用,间接提示了子宫内膜异位症的发生发展是多因素共同作用的结果,且两者在异位内膜中的表达水平呈明显的正相关性,提示这两个因子可能通过促进新生血管形成的途径协同促进了异位内膜的种植和生长,为以后进一步治疗MES提供了理论基础。

[1]丰有吉,沈 铿,等.子宫内膜异位症及子宫腺肌病.妇产科学[M].北京:人民卫生出版社,2005:357-366.

[2]Sun H W,Bernhagen J,Bueala R,et al.Crystal structure at 2.6 a resolution of human macrophage inhibitory factor[J].Proc Natl Acad Sci USA,1996,93(1):5191.

[3]Eiji H,Takashi O,Dipok K D.Over expression of macrophage migration inhibitory facforinduces angiogenesis and dete-riorates prognosis after radical resection for hepato-cellular carcinoma[J].Cancer,2005,103:588.

[4]Yang Y,Degranpre P,Kharfi A,et al.Identification of macrophagc migration inhibitory factor as a potent endothclial cell growth-promoting agent released by ectopic human endomctrial cells[J].J Clin Endocrinol Mcta,2000,85(12):4721.

[5]单志新,余细勇,等.巨噬细胞移动抑制因子诱导血管成生相关基因的表达[J].中山大学学报,2005,11,26(6):617.

[6]Harada T,Kaponis A,Iwabe T,et al,Apoptosis in human endomertium and endometriosis[J].Hum Reprod Update,2004,10(1):29.

[7]SlevinM,K rupinskiJ,Slow ik A,etal.Serialm easurement of Vascularendothelial growth factor and transforming growth factor-beta1 in serum of patients with acute ischemic stroke[J].Stroke,2000,31(8):1863.

[8]Guidi AJ,Abu-Jawdeh G,Tognazzi K,etal.Expression of vascular permeability factor(vascular endothelial growth factor)and its receptors in endometrial carcinoma[J].Cancer,1996,78:454.

[9]Goteri,G,Lucarini,G,Filosa,A,etal.Immunohistochemical analysis of vascular endothelial growth factor cellularexpression in ovarian endometriomata[J].Fertil Steril,2004,81(6):1528.

[10]Oosterlynack DJ,Menleman C,Sobis H,et al.Angiogenic activity of peritonealfluid from women with emdometriosis[J].Fertitl Steril,1993,59(4):779.

The Expression and clinical significance of MIF and VEGF in the the Occurence and Progress of Endometriosis

LIU Jinghua,LEN Wei-chun,LIU Jun-bao,et al.(Department of Obstetrics and Gynecology,Shanghai Public Health Clinical Center Affiliated toFudan University,Shanghai201508,China)

ObjectiveTo discussthe expression of macrophage migration inhibitory factor(MIF)and vascular endothelial growth factor(VEGF)in endometriosis(Ems)tissues and the correlation between MIF and VEGF.MethodsA research is conducted on the protein expressions of MIF and VEGF in 50 cases of EMs organizationswith the immunohistochemis-trical SP method.ResultsThe expression of MIF in the eutopic endometrial endometrial was significantly higher than that in the ectopic endometria in endometriosis(P＜0.05);the expression of MIF in the ectopic endometria in endometriosis was higher than that in the normal endometrium(P＜0.05);the expression of VEGF in the eutopic endometrial was also significantly higher than that in the ectopic endometria in endometriosis(P＜0.05);the expression of MIF in the ectopic endometria in endometriosis was higher than that in the normal endometrium(P＜0.05);so there was a positively correlation between MIF and VEGF.ConclusionThe expression of MIF and VEGF in ectopic endometrial was significantly positively correlated,suggesting thatMIF and VEGF playing an important role in the growth of ectopic endom.

EMs;MIF;VEGF

R392

A

1007-4287(2010)09-1405-03

*通讯作者

2009-11-15)