影响微柱凝胶法筛查血清抗体的因素

左立新

（株洲市人民医院检验科，湖南株洲 412000）

输血前对受血者血清行抗体筛查，既往检验方法多受质疑。近年来，用微柱凝胶法(MCT)筛查，受到医学界认同。我院自2003年以来，对2000例受血者血清进行MCT检测，现将检查结果进行分析。

1 材料与方法

1.1 标本来源

我院2003年1月～2008年12月在院拟受血者2000例，其中男1139例，女861例，年龄1.5～71岁。

1.2 仪器

孵育器Diamed-ID，ID-Incubator 37 SI专用孵育器。 离心机，Diamed-ID，ID-Centrifuge 12 SⅡ专用离心机。

1.3 试剂

瑞士达亚美公司ABO/Rh卡，Diluent2低离子缓冲液，瑞士达亚美公司A型抗体筛查细胞E、E、E号与抗体鉴定谱细胞E-O号和抗人球蛋白试剂，均购至上海市血液中心。

1.4 方法

①抽受血者血标本5mL，置37℃水浴10min，分离获得血清，在微柱凝胶卡上标记受血者姓名和抗体细胞筛查的编号。②分别吸取抗体筛查细胞悬液50μL，和受血者血清25μL，加入到微柱凝胶卡管腔上端，置37℃孵育15min，1000r/min离心10 min。肉眼观察其结果。红细胞均匀沉入管底者为阴性，悬于表面或中部者为阳性。对阳性标本再用试管法，做间接抗人球蛋白试验，以对照比较，对确认阳性标本，再做谱细胞抗体特异性鉴定。

试管法间接抗人球蛋白试验。在试管中加入受血者血清2滴和2%～5%试剂红细胞悬液1滴，混匀，在37℃孵育1h后，用生理盐水洗涤3次。于试管内加入抗人球蛋白试剂2滴，3000 r/min离心15s，观察结果，有凝集者为阳性，无凝集者为阴性。在阴性结果的试管内加入质控细胞1滴，3000r/min离心15 s，出现凝集者显示结果可靠。为防止试剂质量问题引起的假阳性和假阴反应，以及操作失误，在进行不规则抗体筛查试验同时做了阴阳性对照。

2 结果

2000例受血者血清中共检出不规则抗体6例（0.3%）。 单特异性抗体 D3850例 （42.5%）、抗C1290 例(14.5%)、抗 E570 例(28.5%)、复 合 性抗EC1290例 (14.5%)。同时有非特异性反应7例(0.35)，而经过各种方法进行筛查，最终证实上述非特异性反应，为非特异性假阳性反应。

3 讨论

Lapiere等报道他们发明的凝胶离心技术的良好重复性和敏感性[1]。Hitzler等在试管法中加入了酶试剂[2]。在抗体筛查的实验研究中，必需对未经选择的病人血清，用凝胶离心技术与试管法作对比研究。本组结果显示，在2000例受血者血清中，筛查出6例不规则抗体，都为Rh血型系统免疫型抗体（均有输血史或反复输血史），与杨世明的研究结果大致相似[3]。说明受血者的血清中的不规则抗体，绝大多数是Rh血型系统的免疫性抗体，而其它血型系统的免疫性抗体较少。

我国临床输血技术规范记载:凡遇到交叉配血不合,有输血史、妊娠史或短期内需要多次输血的病人，必须进行不规则抗体筛选试验。MCT检测，是现今最好、最灵敏的检测方法之一。

在Rh血型系统里，D抗原的抗原性最强，因此对受血者和献血员进行RbD抗原的检测，是有必要的。但是这一检测方法，在国内开展还不是十分普遍。正因为如此，Rh血型系统的其它抗原(E、C、c、e)也是没有开展。致使一些Rh阴性者，首次输血时，接受Rh阳性血，机体被处于致敏状态，当再次输入Rh阳性血时，出现免疫记忆，导致溶血性输血反应。而这种免疫产生的抗体必须采用凝聚胺或抗人体球蛋白试验才能检测出来。因此，用特异性强、敏感性高的检验方法，对受血者和孕产妇，在输血和产前及产妇在输血进行血型免疫性不规则抗体筛查，和抗体特异性鉴定，对预防溶血性输血反应，和新生儿溶血病，具有现实的临床意义。

MCT的原理是，通过凝胶的浓度，控制凝胶间隙的大小，使间隙只能让游离的红细胞通过，从而使游离的红细胞与聚集红细胞分离，通过离心的红细胞沉在凝胶管底部，这表明红细胞未凝集(阴性反应)。若红细胞在凝胶带上部，则表明红细胞发生凝集(阳性反应)。该方法已逐渐用于血型鉴定、交叉配血实验、抗体特异性鉴定，以及抗人球试验等血清、血型学检查中来。

总之，MCT即便对初学者而言，结果判断上也比试管法可靠。且省时、操作简单，试剂消耗少，成本低，环境污染少。特别是对输血病人和妊娠妇女抗体的筛查，MCT的敏感性更有利于早期检出这些抗体。

[1]Lapierre Y,Rigal D,Adam J,et al.The gel test:a new way to detect red cell antigen-antibody reactions[J].Transfusion,1990,30(2):109-113.

[2]Hitzler W,Bauernfeind U,Schomig-Brekner J,et al.The gel centrifugation test in serologic compatibility testing[J].Beitr Infusionsther,1990,26:358-361.

[3]杨世明,崔颖,张勇萍,等.微柱凝胶法在抗体筛查中的应用及其影响因素探讨[J].现代检验医学杂志,2006,21(4):55-57.