康胰汤对大鼠慢性胰腺炎的防治作用

么国旺，张淑坤，崔乃强,李东华

康胰汤对大鼠慢性胰腺炎的防治作用

么国旺1，张淑坤2，崔乃强1,李东华2

目的：探讨康胰汤对大鼠慢性胰腺炎模型的防治作用。方法：体重180～200 g雄性Wistar大鼠30只，随机分为3组,模型组大鼠尾静脉注射DBTC溶液(7 mg/Kg)，对照组尾静脉注射相同体积的DBTC的溶解液，中药治疗组尾静脉注射DBTC溶液(7 mg/Kg)，自第2 d起给予康胰汤灌胃（生药量14 g/Kg）,对照组、模型组给予同等体积生理盐水。3组连续灌胃28 d,常规饲养，28 d后取材。行尿BT-PABA试验，经下腔静脉取血，用于血清淀粉酶、脂肪酶检测；完整切取大鼠胰腺组织，用于组织学观察。结果:与模型组比，中药治疗组纤维组织的含量明显减少（P＜0.05）；胰腺外分泌功能明显改善（P＜0.05）。结论:康胰汤对大鼠慢性胰腺炎纤维组织生成及改善胰腺外分泌有明显防治作用。

康胰汤；慢性胰腺炎；防治

慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)是指多种原因所致的胰腺局部、节段性或弥漫性的慢性炎症,伴临床上表现有胰腺内、外分泌功能的进行性减退等多种临床特征，病理上以胰腺腺泡萎缩、小叶周纤维化和最终全小叶瘢痕及钙化为特征[1]。中医认为[2-10]：CP病机是本虚标实，本虚主要为脾虚，标实主要表现为气滞血瘀、湿热、食积、痰湿等。其中，脾虚是形成气滞血瘀的主要原因，而肝失疏泄、气机郁滞、血瘀不行，又可加重脏腑功能失调，加快脾虚进程。我们在此基础上以“健脾活血、理气止痛”立法，以法立方“康胰汤”，探讨本方对大鼠CP模型的防治作用及机理。

1 材料与方法

1.1 实验动物体重180～200 g的健康雄性Wistar大鼠30只（中国医学科学院放射医学研究所实验动物中心SCXK津2005-0001）。

1.2 主要试剂和仪器二氯二丁基酯(Dibutyltin dichloride，DBTC，Sigma公司)；N-本甲酰-L-酪氨酰-对氨基苯甲酸(N-Benzoyl-L-tyrosyl-Paminobenzoic Acid,BT-PABA，Sigma公司)；Masson三色染色试剂盒(上海新奥生物有限公司)；722分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)。中药“康胰汤”:柴胡、陈皮、黄芩、丹参、元胡等各6 g，购于南开医院中药房。加8倍量水浸泡4 h，加热煎煮l h，药渣再加6倍水，煎煮l h，过滤，两次滤液合并，浓缩成浓度为1∶1(即l mL水煎剂含1 g生药)的水煎剂。

1.3 实验方法

1.3.1 动物模型制备[11]

1.3.1.1分组30只体重180～200 g雄性Wistar大鼠，随机分为3组,每组10只，分别为模型组、对照组、中药组。

1.3.1.2给药方式模型组大鼠尾静脉注射DBTC溶液(7 mg/kg)，对照组尾静脉注射相同体积的DBTC溶解剂（乙醇、甘油、二甲亚砜(比例1∶2∶2)），中药治疗组尾静脉注射DBTC溶液(7 mg/kg)，自第2 d起给予“康胰汤”灌胃（14 mL/（kg·d））；对照组、模型组给予同等比例的生理盐水，3组连续灌胃28 d。

1.3.1.3方法28 d之后行尿BT-PABA试验，后各组大鼠腹腔注射10%水合氯醛（3 mL/kg）麻醉,开腹经下腔静脉取血，用于血清淀粉酶、脂肪酶检测；完整切取大鼠胰腺组织，10%的福尔马林溶液固定,用于组织学观察。

1.3.2 尿BT-PABA试验参照Smith改良Bratton-marshallf法。PABA在酸性介质中经重氮化后与N-1-萘乙二胺盐酸盐产生偶联反应，生成的偶氮染料，与标准液比较，即可求出尿中PABA含量。

1.3.3 血清淀粉酶、脂肪酶检测由天津南开医院检验科全自动生化仪测定。

1.3.4 病理学检查10%的福尔马林溶液固定，常规石蜡切片,HE染色,观察组织病理学变化。

1.3.5 胰腺组织胶原纤维染色采用Masson三色染色法，纤维化程度及评价方法按试剂盒说明标准进行。

1.4 统计学分析采用SPSS 12.0软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差±s)表示,组间比较采用方差分析，计数资料采用χ2检验，以P<0.05为差异显著性标准。

2 结果

2.1 一般观察大鼠尾静脉注射DBTC溶液后，第2 d开始出现倦卧、少动、食量减少、背毛蓬松失去光泽等，部分大鼠出现便稀、肛周污染，有时出现烦躁不安，体重增加缓慢；中药组在灌胃后10 d左右，前面所述症状有所减轻，体重增加加快(见表1)。

表1 3组大鼠不同时期体重±s，g，n=10)

表1 3组大鼠不同时期体重±s，g，n=10)

注：与对照组比较，*P＜0.01；与模型组比较,▲P＜0.01

组别对照组模型组中药治疗组实验前192.8±7.6 192.0±7.1 193.5±7.3实验后290.7±20.0 211.5±20.1*292.4±16.2▲

2.2 大体观察模型组：胰腺组织出现不同程度萎缩,表面不规则、粗糙，呈淡红色或灰白色，胆总管出现不同程度的扩张；对照组：胰腺呈白色、饱满、表面光滑，胆总管及胰管分布均匀；中药组：与对照组胰腺组织比较无明显改变。

2.3 病理组织学观察

2.3.1HE染色对照组：胰腺腺泡呈嗜碱性，腺细胞呈锥体形，胞浆丰满细胞核呈圆形位于基底部，细胞大小一致，排列整齐，胰腺小叶轮廓清晰，分布均匀，小叶间结缔组织中可见胰导管及血管等；模型组：纤维组织增生明显，腺泡萎缩变形，有的形成炎性包裹，部分腺泡萎缩坏死，形成炎性肉芽肿。小叶结构不清，部分消失；中药组：未见明显的纤维组织增生，炎细胞浸润明显减少(见图1)。每个切片随机选取一个视野，统计病变组织情况(见表2)。

表2 3组大鼠胰腺组织HE染色结果阳性率对照表(n=10，%)

2.3.2Masson三色染色法染色对照组：未见纤维组织，胰腺组织良好；模型组：胰腺小叶轮廓消失，大量纤维组织增生，其内散在较多炎细胞浸润；中药治疗组：胰腺小叶内及血管周围见少量纤维组织（见图2）。每个切片随机选取一个视野，统计病变组织情况(见表3)。

表3 3组大鼠胰腺组织Masson染色结果阳性率（n=10，%）

3.4 尿BT-PABA试验血清淀粉酶、脂肪酶测定模型组PABA排除率明显下降，中药组排除率下降不明显；模型组、中药组血清淀粉酶测试结果无明显差异，中药治疗组较模型组PABA排除率升高、血清脂肪酶水平亦升高（表4）。

表4 3组大鼠PABA排除率、血清淀粉酶、脂肪酶（n=10,±s）

表4 3组大鼠PABA排除率、血清淀粉酶、脂肪酶（n=10,±s）

注：与模型组比较，*P<0.05，**P＜0.01；与对照组比较，＃P＜0.05

组别对照组模型组中药治疗组n 10 10 10排除率（%）85.49±6.51 46.52±8.06＃78.21±10.21**血清淀粉酶（u/L）190 1.4±208.0 190 1.4±209.6 190 0.3±214.0血清脂肪酶（u/L）24.2±19.6 2.1±3.0＃24.6±21.0*

图1 3组HE染色图片

图2 3组Masson染色图片

3 讨论

CP属于中医“胃脘痛”、“腹痛”、“泄泻”、“痞证”、“癥瘕积聚”等范畴。中医学的脏腑理论中对“胰”的概念没有明确的记载，所以在中医文献中没有CP相关中医病名及专门论述，故CP的中医证候属性并无定论。而与该病相关的临床表现及证治的论述散见于脾心痛、肝脾郁热、腹痛、胁痛、结胸、内痈、痰凝血癖、癥瘕积聚等篇章论述之中。

中医所提到的“脾”与现代医学的“脾”不是等同的关系，中医认为[12]，脾为水谷之海，气血生化之源，脏腑经络之枢，疾病发生之由，故称脾为后天之本。按现代医学的解释，中医学的脾脏是一个包括现代医学的消化系统及相关多脏器协同完成以消化吸收为主的生理功能单位。现代医学的胰腺是消化系的重要器官之一，是兼有内分泌和外分泌功能的腺体。胰腺外分泌部分由腺泡和导管组成，其分泌液有很强的消化能力，是所有消化液中消化食物最全面、消化力最强的一种消化液。胰腺内分泌即胰岛，在调节营养物质代谢方面起着积极的作用。从胰腺的内外分泌功能来看，主要是对食物的消化及营养物质代谢有着重要作用，而这正是脾主运化功能的一部分。由此可见，胰腺的功能蕴涵于中医的脾的生理功能之中。

大鼠尾静脉注射DBTC后，大鼠出现倦卧、少动、食量减少、被毛蓬松失去光泽等，部分大鼠腹部出现包块、便稀、肛门污染等一系列类似脾虚证症状的表现。HE和Masson染色显示，胰腺的腺泡萎缩明显，大量纤维增生及炎性细胞浸润，证实了胰腺的外分泌破坏严重，导致其外分泌功能的下降。同时PABA排除率明显下降，更加进一步证实胰腺外分泌功能下降。而这正符合了CP诊断标准。从该模型的症状、体征来看，符合脾虚证的判断标准；从组织形态学角度来看，与CP病理改变基本相符。尿中PABA排除率明显下降，证实胰腺外分泌功能下降。把三者结合起来就证明大鼠尾静脉注射DBTC建立的大鼠脾虚型CP动物模型是成立的。

我们认为，脾虚始终贯穿CP全过程，CP病机是本虚标实，本虚主要为脾虚，标实主要表现为血癖气滞。具体而言，脾虚则中气失于健运，影响肝的疏泄功能，导致气机郁滞，气滞则血行不畅，不通则痛。脾为后天之本，气血生化之源；气为血之帅，气行则血行，气滞则血瘀，故脾虚肝郁气滞日久会导致血瘀，血瘀则痛。因此，提出“健脾活血理气止痛”法，作为治疗本病的基本法则，以法立方“康胰汤”。

方中[13]陈皮性苦，味辛、温，归肺、脾经，理气健脾，燥湿化痰；现代药理学研究，陈皮具有陈皮挥发油，能促进大鼠正常胃液的分泌,有助于消化；可增加胆汁及胆汁内固体物的排泄量，抗炎作用。黄芩性寒，味苦，归肺、胆、脾、大肠、小肠经，有清热燥湿之功；现代药理学证实，有抗炎作用，对免疫、消化等系统均有保护作用。元胡辛、苦，温，归肝、脾经，活血，理气止痛；现代药理学证实，其有降低胃酸、胃蛋白酶的量及止痛作用。丹参苦，微寒，归心、肝经，祛瘀止痛，活血通经；现代药理学证实，丹参能够促进血液循环，增加血流量，防止血小板凝结作用。纵观本方，陈皮、黄芩燥湿健脾为君，丹参等药活血祛瘀为臣，佐以元胡共同发挥理气活血止痛作用，相互配合起到健脾活血理气止痛功效。

模型组血清淀粉酶未发生变化及血清脂肪酶下降，与有些文献报道不一致，可能是由于本模型表现出的慢性胰腺炎对碳水化合物的消化与吸收尚有一定功能，而血脂肪酶下降则是CP的主要病理特征，考虑和胰腺外分泌功能受损有关。

本研究结果显示，康胰汤对改善CP大鼠胰腺外分泌功能恢复有良好的作用，其机制可能是康胰汤能减轻胰腺腺泡的萎缩、纤维组织的增生及炎性浸润。

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（收稿：2009-09-02修回：2010-05-20）

（责任编辑刘洪斌田在善）

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Preventive and Therapeutic Effects of Kangyi(康胰)Decoction on Chronic Pancreatitis in Rats

Yao

Guowang,Zhang Shukun,Cui Naiqiang,et al.The Biliopancreatic Center,Tianjin Nankai Hospital,Tianjin (300100),China

ObjectiveTo prove the preventive and therapeutic effect of Kangyi（康胰）decoction in rat models of chronic pancreatitis.MethodsThirty male Wistar rats weighing 180～200 g were randomly divided into three groups.Dibutyltin dichloride(DBTC)solution was injected into the caudal vein of the model rats at a dose of 7 mg/kg body weight.The control group was injected into the caudal vein with DBTC lytic agent at the same volume.In addition to being injected like model group,the medicinal herbal group has been lavaged with JianYi decoction at a dose of 14 mL/kg body weight for 28 days,these rats were bred with routine method for 28 days and weighted.Urine BT-PABA was tested to evaluate exocrine of the pancreas.Blood was collected through the inferior vena cava to detect serum amylase and lipase.Complete pancreas tissue was taken for histologic observation.ResultsJianyi decoction could reduce the content of fibrous tissue much less than the model group.(P<0.05);and improve the exocrine function of pancreas(P<0.05).ConclusionJianyi decoction is valuable in the prevention and treatment of rat model of chronic pancreatitis.

Kangyi decoction,chronic pancreatitis

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1.天津市南开医院胆胰中心（天津300100）

2.天津市中西医结合急腹症研究所（天津300100）

崔乃强，Tel：022-27435292；E-mail:nctsui@126.com

R657.5+1;Q95-33

A

1007-6948(2010)05-0565-04

10.3969/j.issn.1007-6948.2010.05.016

的