VEGF和CD147在宫颈癌组织中的表达及意义

邸丽双 王德华

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，尤其晚期及复发宫颈癌对患者危害更大。肿瘤的侵袭转移是一个多因素、多步骤的复杂过程，涉及肿瘤细胞与宿主之间复杂的相互作用，多个基因及其产物参与了这一过程的调控。CD147分子是一种表达于多种组织的单次跨膜糖蛋白，其在肺癌、乳腺癌等恶性肿瘤组织中表达增高，在肿瘤浸润、转移中起重要作用。血管内皮生长因子（VEGF）可直接参与诱导血管生成，在肿瘤生长中发挥重要作用。本研究探讨CD147和VEGF蛋白在宫颈癌发生发展中的作用，为宫颈癌的发病机制及预后判断提供理论基础。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集天津医科大学总医院2006年10月—2008年10月门诊活检或住院手术病理标本100例，其中宫颈癌组织59例、宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）组织21例、正常宫颈组织20例。宫颈癌按FIGO分期（2000年）：Ⅰ期12例，Ⅱa期14例，Ⅱb期18例，Ⅲ期13例，Ⅳ期2例。宫颈癌患者手术31例：Ⅰ期12例，Ⅱa期14例，Ⅱb期5例（新辅助化疗）；手术病理发现淋巴结转移者10例，未发现淋巴结转移者21例。所有切片经病理专家复核。宫颈癌组、CIN组、正常宫颈组平均年龄分别为（47.06±11.49）岁、（44.37±11.76）岁及（49.15±6.17）岁，差异无统计学意义（F=2.563，P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 试剂和方法 兔抗人CD147多克隆抗体、兔抗人VEGF单克隆抗体，稀释浓度匀为1∶50，即用型免疫组化试剂盒，均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。采用免疫组化SP法，DAB显色，具体操作按说明书进行。用PBS代替一抗作为阴性对照，采用生物公司提供的阳性切片为阳性对照。

1.2.2 结果判断VEGF和CD147分别以胞浆和胞膜中出现棕色或棕黄色颗粒为阳性细胞。按半定量积分法判断两者表达情况，根据染色强度及阳性细胞所占比例分别记为0～3分。染色强度:未着色或与背景一致浅棕色为0分，浅着色为1分，中度着色为2分，深着色为3分。阳性细胞百分率:高倍镜（×400）下随机抽取10个视野，每个视野计数100个细胞，计算其平均阳性百分率。根据平均阳性细胞百分率分为：阳性细胞数＜5%为0分，5%～24%为1分，25%～49%为2分，≥50%为3分。两项指标相加，0分为阴性（－），1～2分为弱阳性（＋），3～4分为阳性（＋＋），5～6分为强阳性（＋＋＋）。

1.3 统计学分析 采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学处理，多组有序分类变量采用Kruskal-Wallis检验，各组之间两两比较采用Mann-Whitney检验；按不同临床病理指标进行分组，各组间率的比较采用χ2检验及精确概率法检验。CD147和VEGF相关性分析采用Spearman等级相关。采用双侧检验，检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 CD147和VEGF在不同病变宫颈组织中的表达 宫颈癌组中CD147表达（91.53%）高于正常宫颈组（35.00%）及CIN组（76．19%），差异有统计学意义 （P<0．05）。宫颈癌 组 织 中VEGF的表 达（76.27%） 高于正常宫颈组（10.0%）、CIN组（57．14%），差异有统计学意义（P<0．05），而在CIN组与宫颈癌组之间差异无统计学意义（P＞0．05），见表1。

表1 CD147及VEGF在正常宫颈、CIN及宫颈癌组织中的表达 （例）

2.2 不同临床病理情况宫颈癌患者组织中CD147和VEGF的表达情况 伴有淋巴结转移的宫颈癌组织中CD147、VEGF阳性表达较无淋巴结转移者升高（P<0.05）。不同年龄、大体类型、组织类型、分化程度的患者CD147和VEGF的表达差别均无统计学意义（均P>0.05），见表2。

表2 不同临床病理情况宫颈癌患者CD147和VEGF的表达情况 （例）

2.3 宫颈癌组织中CD147和VEGF两者表达相关性CD147与VEGF呈正相关（rs=0.268，P<0.05），见表3。

表3 CD147与VEGF在宫颈癌中表达的关系 （例）

3 讨论

CD147分子属于免疫球蛋白超家族,在多种肿瘤细胞中表达升高，并刺激肿瘤细胞和间质细胞分泌基质金属蛋白酶（MMP），促进肿瘤的侵袭和转移[1]。Belton等[2]发现Basigin-2可作为可溶性CD147的受体起作用，激活ERK1/2信号途径导致MMP-1、MMP-2等表达。本研究结果显示，CD147的阳性表达率随宫颈病变加重呈逐渐升高趋势。且伴有淋巴结转移的宫颈癌组织中CD147的表达明显高于无转移者，提示在宫颈癌的演变过程中，CD147可能通过刺激肿瘤细胞和基质细胞分泌、活化MMPs，导致细胞间质和基底膜成分降解，促进宫颈癌的发生、发展及转移。

VEGF是一类特异性作用于内皮细胞的生长因子，可促进血管腔化及新生血管形成，并参与维持淋巴管内皮细胞的存活，与肿瘤细胞淋巴结转移有关[3]。本研究结果表明，VEGF在正常宫颈、CIN、宫颈癌组织中的阳性表达率逐渐升高，且在有淋巴结转移的宫颈癌组织中VEGF的表达明显升高，这与Hammes等[4]研究结果基本一致，说明VEGF的表达升高可能与宫颈癌的发生浸润有关，在宫颈癌中血管形成可能是一个早发事件。

本研究表明CD147和VEGF在宫颈癌中的表达呈正相关，但两者之间的作用机制尚不完全明确。王冬等[5]发现VEGF和MMP-9的表达与宫颈癌密切相关。CD147的高表达可促进MMP-9 mRNA的表达，进而使刺激产生的MMPs降解周围细胞外基质，有利于VEGF发挥作用促进新生血管的形成。Tang等[6]认为CD147促进VEGF的表达可能是通过PI3K-Akt信号途径完成，说明CD147可间接或直接地促进VEGF表达进而促进血管内皮增生，为肿瘤的生长及转移所需营养奠定了基础。

[1]Biswas C,Zhang Y,DeCastro R,et al.The human tumor cell-derived collagenase stimulatory factor(renamed EMMPRIN)is a member of the immunoglobulin superfamily[J].Cancer Res,1995,55(2):434－439.

[2]Belton Jr,Chen L,Mesquita FS,et al.Basigin-2 is a cell surface receptor for soluble basigin ligand[J].J Biol Chem,2008,283(26):17805－17814.

[3]Saharinen P,Tammela T,Karkkainen MJ,et al.Lymphatic vasculature:development,molecular regulation and role in tumor metastasis and inflammation[J].Trends Immunol,2004,25(7):387－395.

[4]Hammes LS,Tekmal RR,Naud P,et al.Up-regulation of VEGF,cfms and COX-2 expression correlates with severity of cervical cancer precursor(CIN)lesions and invasive disease[J].Gynecol Oncol,2008,110(3):445－451.

[5]王冬，王占东，任宝红.VEGF、MMP-9和CIV在宫颈癌中的表达及与转移性潜能的相关性研究[J].天津医药，2003，31（7）：417－419.

[6]Tang Y,Nakada MT,Rafferty P,et al.Regulation of vascular endothelial growth factor expression by EMMPRIN via the PI3K-Akt signaling pathway[J].Mol Cancer Res,2006,4(6):371－377.