紫外可见分光光度法测定不同产地柴胡中多糖含量

李棣华，刘俊红，伍孝先

（天津市南开医院中西医结合急腹症研究所，天津 300100）

《中国药典》（2005版）规定供药用的柴胡为伞形科柴胡或狭叶柴胡功能具有和解退热、疏肝解郁、升举阳气。为中医治疗少阳证的首选中药。笔者通过建立柴胡多糖的含量测定方法及测定11个不同产地的柴胡中多糖含量，以便初步考察不同产地柴胡有关多糖含量方面的质量状况。

1 仪器与试药

UV—160型SHIMADZU紫外分光光度仪；十万分之一天平Sartorius BP211D;无水葡萄糖对照品（批号：110833-200302）购自中国药品生物制品检定所；试剂均为分析纯；

2 方法[1]与结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称取无水葡萄糖对照品22.60 mg，置于25 mL容量瓶中，加蒸馏水使溶解，稀释至刻度，摇匀；精密吸取上述溶液3.0 mL，置于25 mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀即得对照品溶液。

2.2 对照品溶液最大吸收波长测定 精密吸取无水葡萄糖对照品溶液，按标准曲线项下操作，于200～800 nm进行全波长扫描，无水葡萄糖在487 nm处有最大吸收，故确定检测波长为487 nm。

2.3 线性关系考察 精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL 分别置于 10 mL 容量瓶中，分别加蒸馏水至1.0mL，再分别加入5%苯酚1.6mL，混匀，然后加浓硫酸7.0 mL，混匀，放置10 min，再于冷水中冷却15 min，加水至刻度，摇匀，随行空白，于487 nm处测定吸光度；以葡萄糖重量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。得回归方程为：C＝16.259ABS－0.0169，r＝0.9986，表明无水葡萄糖在10.848～75.936 μg 之间线性关系良好。

2.4 供试品溶液的制备方法考察

2.4.1 乙醇回流次数考察 取柴胡粉末0.25 g，精密称定，置于100 mL圆底烧瓶中，每次加入乙醇50 mL，按设定提取次数水浴回流提取，每次1 h，滤过，滤液弃去。残渣挥干乙醇，连同滤纸一起加入60 mL蒸馏水，回流提取1 h，滤过，用热水洗涤残渣3次，定容至100 mL容量瓶中，摇匀。再精密吸取5.0 mL置于25 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀即可，按标准曲线项下操作进行测定。结果提取次数分别为1、2、3次时，多糖含量分别为65.993、62.985、61.689 g/kg生药。根据结果，同时考虑操作时间，以提取2次为宜。

2.4.2 水提取用量考察 取柴胡粉末0.25 g，精密称定，置于100mL圆底烧瓶中，每次加入乙醇50mL，水浴回流提取2次，每次1 h，滤过，滤液弃去。残渣挥干乙醇，连同滤纸一起加入按设定用量蒸馏水，回流提取1 h，以下同2.4.1操作。结果水用量分别为45、60、75 mL 时，多糖含量分别为 59.824、62.985、60.539 g/kg生药。结果表明水提取用量以60 mL为佳。

2.4.3 水提取时间考察 取柴胡粉末0.25 g，精密称定，置于100mL圆底烧瓶中，每次加入乙醇50mL，水浴回流提取2次，每次1 h，滤过，滤液弃去。残渣挥干乙醇，连同滤纸一起加入60 mL蒸馏水，按设定回流时间提取，以下同2.4.1操作。结果提取时间分别为 0.5、1.0、1.5 h，多糖含量分别为 60.097、62.985、63.282 g/kg生药。结果表明，水提取时间以1.5 h为佳。

2.4.4 结论 根据上述实验可确定柴胡药材多糖供试品溶液制备的主要步骤为乙醇回流提取2次，残渣加入60 mL蒸馏水，水提取1.5 h。

2.5 稳定性实验 精密吸取无水葡萄糖对照品溶液，按标准曲线项下操作，每30 min测定吸光度，共测定5次。柴胡多糖吸光度的相对均数标准±偏差值（RSD）为0.69%，说明供试品溶液在2 h内稳定。

2.6 重复性实验 按照供试品溶液制备方法，取同批柴胡药材，制备6份供试品溶液，按标准曲线项下操作测定，柴胡多糖含量的RSD%为3.08%。

2.7 加样回收率实验 取已知含量柴胡药材，按照供试品溶液制备方法制备6份，加入适量对照品溶液，按标准曲线项下操作测定，计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率结果（n=6）Tab.1 Results of spotting recovery（n=6）

2.8 样品含量测定 按2.4项下制备11种不同产地柴胡药材供试品溶液，平行取样3份，按标准曲线项下操作测定，计算多糖含量。结果见表2。

3 讨论

柴胡多糖的加样回收率实验过程中发现，柴胡药材中加入无水葡萄糖进行回收率实验，测定值比理论值减少近50%，经分析表明无水葡萄糖溶于95%乙醇中，乙醇提取时损失。曾采用先以95%乙醇提取柴胡药材，再加入无水葡萄糖进行回收率实验，结果回收率仍不合格，为找原因进行了无水葡萄糖耐热实验，发现无水葡萄糖损失率达62.94%。表明无水葡萄糖对热不稳定。因此本实验采用在最后定容时加入无水葡萄糖标准品进行加样回收率实验。

表2 柴胡药材多糖含量测定结果（n=3）Tab.2 Results of quantification of polysaccharide（n=3）

在实验过程中，发现柴胡多糖供试品放置一定时间后含量下降，经分析认为可能是供试品中含有的细菌分解多糖之故。供试品经蒸汽灭菌后，再进行稳定性实验，结果显示含量稳定，表明上述假设正确。这提示含多糖的样品若需要一定时间后在测定或进行动物实验，必须灭菌保存。

[1] 余 晖,陆兔林.柴胡不同炮制品多糖含量测定[J].时珍国医国药，1997，8（5）：447-448.