Leica CM3050S冰冻切片机的使用和维护

席超 刘进

（北京师范大学生命科学学院实验技术中心，北京100875）

组织切片技术是医学和生命科学领域中的重要技术，主要有石蜡切片、震动切片和冰冻切片等技术。其中冰冻切片技术的应用越来越广泛，其优点就是快速、便捷，且能较完整的保存抗原活性，如细胞的某些抗原成分，特别细胞膜抗原，受体抗原，酶及肽类抗原在石蜡切片的处理过程中，不可避免的受到破坏或失去抗原活性，而且对于原位分子杂交等核酸探针杂交实验，冰冻切片技术也成为首选切片技术。冰冻切片机的应用也相应的越来越广泛，本文以Leica CM3050S为例，探讨了如何更好的使用和维护冰冻切片机，为科研和临床更好的服务。

Leica CM3050S具有电动和手动切片功能，可实现3种自动切片模式，速度可调，厚度范围0.5-300μm；还具有自动修块功能，厚度范围：5-150μm；冷冻室温度范围0℃至-40℃，具有独立的样本制冷系统，样本头制冷温度-10℃至-50℃。

1 仪器操作

1.1 仪器的操作系统主要由总开关、操纵面板1、操纵面板2、手轮和冷冻箱组成。总开关控制仪器的供电，仪器开机运行后，无特殊原因不要关闭总开关，若由于断电或其他原因关闭总电源后，则必须要对冷冻箱及其附件进行除菌和干燥处理后才能重新启动仪器。

1.2 操纵面板1主要控制冷冻箱照明、温度、除霜、时间设定等功能，并显示切片厚度、切片模式等信息。

温度调节包括箱体温度（CT）和样品头温度（OT），OT温度设定可比CT略高。不同的组织选用不同的温度进行切片，过高或过低的温度均会影响切片的质量，表1中是一些常用组织的参考切片温度，具体采用的温度还需操作者在实践中进行摸索。除霜是冰冻切片机每天均需进行的操作，用于除去仪器运行过程中，箱体内部产生的霜。Leica CM3050S具有三种除霜模式：箱体自动除霜、箱体手动除霜和样品头手动除霜模式。箱体自动除霜每24小时自动进行一次，具体时间可以人为设定（最好设定在00:00左右），除霜结束后仪器自动降温到设定值。自动除霜时程的默认设置是8分钟，如果仪器长时间使用后，除霜8分钟无法使箱体完全解冻，可以通过增加除霜时程来解决。箱体手动除霜和样品头手动除霜模式可以通过选择手动除霜键来进行（一般不使用）。

1.3 操纵面板2主要控制电动切片、样品头升降、切片厚度和修片厚度。

电动切片有三种模式：间歇模式、连续模式和单次模式。电动切片速度可以手动调节，电动切片的开启和中断可以手控或者通过脚踏板控制。样品头升降主要用来调节样品和刀片之间的距离，具有粗调和细调两种模式。

1.4 仪器使用后的操作。日常使用后需进行一些处理：将OT设为0℃，CT设为-10℃,这样既可以延长压缩机的寿命又利于除霜过程的进行；取出刀片并进行除菌、干燥以备下次使用；清除箱体中的切片废弃物；取出未使用的组织样本另行保存；锁定手轮和控制面板1。长时间不使用仪器可以将总开关关闭，但箱体和所有有关切片的附件均需进行除菌和干燥处理。

1.5 包埋剂的使用。包埋剂主要用于将组织与样品台固定在一起，并包被组织以利于展片。包埋剂可选用常见的生理盐水或PBS等缓冲液，近年来一种混合型包埋剂OCT，使用的越来越广泛，OCT包埋后，组织切片更加平整。OCT是一种聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物，可以直接用于组织包被，也可以对组织进行切片预处理后再切片。预处理方法：组织浸蔗糖后放入蔗糖与OCT 1:1体积比的混合液中，室温2小时；放入OCT中室温4小时（具体时间视组织大小而定）。

2 仪器保养：

冰冻切片机的日常保养主要包括除菌、清洁、更换荧光灯管等工作。

仪器的除菌有多种方法，一些文献中也介绍了一些除菌方法，如：熏蒸法：取甲醛、高锰酸钾、水相混合，进行氧化消毒；喷雾法：用过氧化氢喷雾；擦拭法：用戊二醛或乙醇擦拭物品表面[1]。但是用这些方法除菌后，需关闭仪器并将箱体和所有附件充分干燥后才能重新使用，这就对仪器的正常使用带来一定的影响。这里推荐一种方法，可以在-20℃时，即不关闭仪器的情况下进行消毒作业，从而不影响使用者的正常使用。1) 将温度设为-20℃或更高；2) 从箱体中移走标本组织并妥善储存；3) 小心将刀片从刀架上取下；4) 将切片废弃物清出；5)Leica cryofect (50%-100%乙醇+0.1%-0.25%葡萄糖酸氯已定)喷洒在箱体和附件表面，持续约15min；6) 用纸巾擦干箱体和附件表面的液体；7) 将温度重新设定为需要温度正常使用。

仪器的清洁主要包括仪器表面、玻璃窗、冷却系统的进风口和出风口以及仪器背板的散热口。清洁方式可以用乙醇或水进行擦拭。

更换荧光灯管时，需先将玻璃窗取下，灯管安装在防眩罩后面，更换完灯管后再将玻璃窗装上，更换灯管时不需关闭仪器，但要尽量快速操作，以避免箱体结霜。

3 错误信息：

Leica CM3050S具有自检功能，当仪器出现功能异常时会显示一些错误信息。1) “POWER FAILURE”：仪器断电后重新启动即会显示此信息，几秒后会自动消失；2) “?”：样品头升降功能异常，检查样品头升降电缆插头是否正确连接；3) “#”：温度探头损坏或发生局部短路；4) “DRY MICROTOME”: 仪器断电重新启动后可能出现此信息，若出现此信息不要马上开机，待箱体和附件均需充分干燥后才可重新开机[2]。

4 常见问题、原因及解决方法：

制作高质量的组织切片，需要在长期的练习、实践中摸索经验，表2中总结了在使用此仪器时出现的常见问题、产生原因及解决方法。

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[1]王关娥，王红，舒清明，丁红，杨传辉，冰冻切片机的消毒与保养，中华医院感染学杂志2008,18(6):876。

[2]Leica, CM3050S Instruction manual, 2008, V1.3.