HPLC法测定夜宁糖浆中大黄素的含量

赵斌（南京医科大学附属南京市妇幼保健院药剂科，江苏南京210004）

HPLC法测定夜宁糖浆中大黄素的含量

赵斌
（南京医科大学附属南京市妇幼保健院药剂科，江苏南京210004）

目的建立夜宁糖浆中大黄素的含量测定方法。方法HPLC法，色谱柱C18，流动相：甲醇－0.1%磷酸溶液85∶15（V／V），流速：1.0mL／min，检测波长：254 nm。结果大黄素在0.010 12～0.121 44μg范围内呈良好的线性关系（r＝0.999 5），平均回收率为97.05%，RSD为1.98%（n＝3）。结论本方法简便、准确、专属性好，能有效控制夜宁糖浆的质量。

夜宁糖浆；大黄素；高效液相色谱法

夜宁糖浆［1］是由合欢皮、灵芝、首乌藤、大枣、女贞子、甘草、浮小麦等药组成，具有安神养心的功效。临床上用于神经衰弱、头昏失眠、血虚多梦，该方现已收载于2005版《中国药典》一部［1］。其质量控制方法简单，只有检查项目，没有含量测定。为了更方便有效地控制该制剂的质量，确保疗效，本文对首乌藤中主要成分大黄素的含量采用HPLC法［2］进行测定，实验结果令人满意。

1 仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪（四元泵、脱气机、紫外检测器），HypersilODS柱（5μm，250×4.6mm）（均为Agilent公司），N2000色谱工作站（浙江大学智能信息研究所），FA1004电子分析天平（上海第二天平仪器厂），PHS-3C精密酸度计（上海雷磁仪器厂），KQ-50B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）等。甲醇为色谱纯，磷酸、乙醚等为分析纯，注射用水（自制）。样品和阴性对照液均由制药厂提供，大黄素对照品（含量测定用）、大黄酸对照品（含量测定用）、大黄酚对照品（含量测定用）、大黄素甲醚对照品（供鉴别用）均由中国药品生物制品检定所提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：Hypersil ODS柱（5μm，250× 4.6mm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）（在使用前均经孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，超声处理）；流速：1.0 mL／min；检测波长为254 nm；柱温：室温；进样量为10μL，在上述色谱条件下大黄素峰与其它峰分离良好，阴性无干扰，其保留时间为8.2 min，理论塔板数按大黄素计算为10 000，色谱图见图1～3。

图1 空白样品HPLC色谱图

图2 对照品HPLC色谱图

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液精密称取大黄素对照品25.3mg～250mL于容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取2～50 mL于容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液精密量取夜宁糖浆25mL，加水50mL，摇匀，加乙醚振摇提取4次（40，30，30，20mL），分取乙醚液，挥干，残渣加甲醇溶解，转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 空白样品溶液取缺首乌藤的1／10处方量的药材，按夜宁糖浆生产工艺制备空白阴性样品，然后精密量取此液25 mL按供试品溶液的的制备方法制备不含首乌藤的的空白阴性样品溶液。

2.3 线性关系的考察精密称取大黄素对照品25.3mg～250mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取此液1，2，4，8，12 mL至100mL容量瓶中，摇匀，分别量取10μL注入液相色谱仪，以峰面积积分值为纵坐标，以进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，结果表明大黄素在0.010 12～0.121 44μg范围内呈良好的线性关系，线性方程为：Y＝21.997 736＋6 334 493.527X，r＝0.999 5。

2.4 精密度试验精密量取对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积积分值，结果RSD为1.92%。

2.5 稳定性试验精密供试品溶液10μL，分别在0，2，4，6，8 h进样1次，测峰面积积分值，结果RSD为1.95%，表明供试品溶液中大黄素在8 h内基本稳定。

2.6 重复性试验取样品5份，按3.2项下方法制备供试品溶液，测定大黄素的含量，结果平均含量为2.4μg／mL；RSD为1.68%，结果表明重复性良好。

2.7 加样回收率试验精密量取样品25mL，共4份，其中1份为原样，另3份分别加入1.012μg／mL的大黄素对照品溶液10，20，50mL，混匀，按3.2项下方法制备所需溶液后，测定大黄素的含量，计算加样回收率。结果平均回收率为97.05%，RSD为1.98%，n＝3。

2.8 样品测定按上述色谱条件的3批样品进行含量测定，结果每毫升含首乌藤以大黄素计算分别为0.0028，0.0032，0.0035mg，均符合成品质量标准。

3 讨论

3.1 色谱条件的确定夜宁糖浆中化学成分复杂，检测时易受干扰，本法以大黄素为测定指标，选用甲醇-0.1%磷酸溶液85∶15（V／V）作为流动相有较好的分离度，能使样品中所含成分得到较好地分离，不干扰大黄素测定。

3.2 样品的处理选择样品处理方法时，参考文献资料［2-4］，比较了几种处理方法，实验证明，本文采用的样品处理方法，其分离度较好，峰信号较强。

3.3 色谱图中峰位的确认笔者曾用大黄酚、大黄素甲醚对照品制成对照溶液，在同一色谱条件下，注入液相色谱仪，发现大黄酚、大黄素甲醚对照液中大黄酚、大黄素甲醚峰的保留时间分别与夜宁糖浆供试品溶液中10.0，14.6 min峰的保留时间一致，并且同时也采用此两种标准液直接加入至供试品溶液中，在同一色谱条件下，注入液相色谱仪，发现10.0，14.6min两峰的峰面积明显增加，因此，笔者认为夜宁糖浆供试品溶液中10.0，14.6min出现的两峰为大黄酚、大黄素甲醚峰，可进一步对此两峰进行鉴别与含量测定。

［1］国家药典委员会编.中国药典［M］.一部.北京：化学工业出版社，2005，附录33-35.

［2］何建华，沈宇清，韦昌桂，等.高效液相色谱法测定通解口服液中大黄素的含量［J］.中国医院药学杂志，2006，26（12）：1483-1485.

［3］雷光，王登旭.HPLC法测定健脑宁合剂中大黄素的含量［J］.齐鲁药事，2006，25（3）：152-153.

［4］曾卫阳，侯小明，段早红.高效液相色谱法测定复方儿茶酊中大黄素的含量［J］.医药论坛杂志，2006，27（20）：67-68.

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1007－4813（2010）05－0661－02

2010－06－11）