GC-MS法对哈蟆油中甾体类化合物的分析

陈燕超，胡岩，王诗涵，王永生*（.长春中医药大学，吉林长春307；.辽宁中医药大学，辽宁沈阳003）

GC-MS法对哈蟆油中甾体类化合物的分析

陈燕超1，胡岩1，王诗涵2，王永生1*
（1.长春中医药大学，吉林长春130117；2.辽宁中医药大学，辽宁沈阳110032）

目的测定哈蟆油中甾体类化合物的成分及含量。方法将粉碎后的药材用皂化法预处理，以乙醚萃取未皂化物——甾体类成分，水浴蒸干，利用气质联用色谱法对甾体类化合物进行鉴别及含量测定。结果哈蟆油中共鉴定出8个化合物，即胆固醇（32.236%）、胆甾-3-酮（0.925%）、胆甾-3，5二烯-7-酮（2.811%）、菜油甾醇（0.611%）、胆甾-4-烯-3-酮（7.657%）、胆甾-4，6-二烯-3-酮（1.395%）、豆甾醇-22，23-二氢（0.316%）、胆甾-8-烯-7-酮（0.768%）。结论本法可用于哈蟆油中甾体类化合物的成分与含量的测定研究。

哈蟆油；甾体类；气相色谱-质谱法（GC-MS）

哈蟆油（Oviductus Ranae）是蛙科动物中国林蛙（Rana temporaria chensinesis David）雌蛙的干燥输卵管。始载于明代《本草纲目》，其性平，味甘、咸，入肺、肾经，具有补肾益精、养阴润肺之功效。临床用于身体虚弱、病后失调、精神不足、心悸失眠、盗汗不止、痨嗽咳血等症。哈蟆油为名贵的滋补品，主产于东北三省，尤以吉林省为主，目前，哈蟆油已发展成为我国东北长白山区域特产的一味道地药材，因其具有极高的经济价值，作为国家北药基地的吉林省已将其列为中药材规范化生产基地（GAP）首批的10个品种之一。近年来，哈蟆油中甾体类化合物已被试验证实为哈蟆油中具有独特药理作用的一类化合物，因此开展对哈蟆油中甾体类化合物的研究具有重大意义［1－3］。本文利用气相色谱-质谱法对哈蟆油中甾类化合物进行初步研究，报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂安捷伦7890／5975C气相色谱-质谱联用仪（安捷伦科技有限公司），JJ600型精密电子天平（美国双杰兄弟有限公司），高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）。

哈蟆油药材经本校中药鉴定教研室姜大成教授鉴定为蛙科动物中国林蛙Rana temporaria chensinensis David.雌蛙的输卵管，经采制干燥而得，符合《中国药典》2005年版一部哈蟆油项下规定。

1.2 皂化样品的制备将哈蟆油药材粉碎，过60目筛，精密称取10 g样品，加氢氧化钾7 g（适量蒸馏水溶解），90%乙醇40 mL振摇混匀，皂化2 h。皂化液放冷后加蒸馏水50 mL稀释，用乙醚萃取4次，收集乙醚层于水浴锅上挥干，用甲醇定容，备用。

1.3 气相色谱和质谱条件色谱条件：采用程序升温：初始温度60℃，保留1 min，以18℃／min升至250℃，保留5 min，再以2℃／min升至280℃，保留20 min；DB25石英毛细管柱（30 m×0.25 mm），进样口温度为280℃，气化室的温度为270℃，载气为氦气，分流比为5∶1。

质谱条件：EI离子源，离子源温度：250℃，轰击电子能量70 eV，质量扫描范围35～500amu。

2 结果与分析

将皂化后的供试品溶液按照上述色谱条件进行试验，结果从哈蟆油药材中共分离鉴定出8个化合物（化合物编号见图1），通过NIST谱库检索，对该8种化合物进行鉴别并利用面积归一法对其进行含量测定研究。气相色谱结果见图1，分析结果见表1。

图1 哈蟆油药材皂化后的气相色谱图

表1 皂化后的哈蟆油药材化学成分及相对含量分析表

3 讨论

本研究通过对哈蟆油药材进行皂化处理，利用气相色谱-质谱法对处理后的哈蟆油药材进行分析，从中共分离鉴定出8种甾体类化合物。其中，胆甾-3-酮（峰号2）、胆甾-3，5二烯-7-酮（峰号3）、菜油甾醇（峰号4）、胆甾-4-烯-3-酮（峰号5）、胆甾-4，6-二烯-3-酮（峰号6）、豆甾醇-22，23-二氢（峰号7）、胆甾-8-烯-7-酮（峰号8）为首次从哈蟆油药材中分离得到。

本实验采用GC-MS联用技术分析了哈蟆油中甾体类的成分及其含量，操作简单方便，可信度高，为日后对哈蟆油药材中甾体类化合物的分离鉴定提供了新的方法和手段。

［1］范玉林.蛤士蟆油成分研究的进展［J］.吉林农业大学学报，1996，18（3）：105.

［2］谭任祥.甾体化学［M］.北京：化学工业出版社，2009：98.

［3］郭澄.超临界萃取蝼蛄脂肪酸成分及其气相色谱-质谱分析［J］.分析化学研究报告，2006，9（34）：15-18.

R966

A

1007－4813（2010）05－0660－02

2010－07－07）

吉林省科技发展计划项目（课题编号：20080915）。

陈彦超（1985－），硕士研究生。研究方向：中药有效成分与应用开发研究。

*通信作者：王永生，博士，教授。Tel：0431-86172298 E-mail：mikewangwys＠163.com。