三黄汤对慢性肾功能不全大鼠血肌苷尿素氮影响的实验研究

吴强，孙昕，冯桂梅（吉林大学中日联谊医院，吉林长春130033）

三黄汤对慢性肾功能不全大鼠血肌苷尿素氮影响的实验研究

吴强，孙昕，冯桂梅
（吉林大学中日联谊医院，吉林长春130033）

目的通过观察慢性肾功能不全大鼠血肌苷（Scr）尿素氮（BUN）的变化，探讨三黄汤治疗肾功能不全的机理。方法用三黄汤0.5 g／次加自来水灌注。每日1次，连用21 d。检测Scr、BUN变化。结果与包全氧化淀粉对照组相比，治疗组血Scr、BUN明显降低，有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）。结论三黄汤治疗慢性肾功能不全有明显的效果。

三黄汤；慢性肾功能不全；血肌苷；尿素氮；大鼠

三黄汤由大黄、黄芪、银黄等15味中药组成，具有清热解毒、活血化瘀之功能，临床用于治疗慢性肾功能不全。本研究通过观察其对肾功不全大鼠Scr、BUN的变化，探讨其治疗肾功能不全的机理。

1 实验材料

1.1 实验动物选用健康Wistar大鼠60只雌雄各半，体重180～200 g。由吉林大学实验动物中心提供。

1.2 实验用药三黄汤每克约相当于生药6.4 g，配方为银黄15 g，三七粉5 g，黄芪20 g（吉林大药房供应）。腺嘌呤（Adenine）：造模用药，分子式C5H5N5，分子量135.14，（欣经科生物技术有限公司，批号20060078）。包醛氧淀粉（coated aldehyde oxystarch）：天津太平洋化学制药有限公司，国药准字：H12021136。

1.3 试剂与仪器肌醉试剂盒：上海绿谷有限公司，批号：040522。尿素氮试剂盒：上海绿谷有限公司，批号：040827。日本岛津CL-770型生化分析仪。成都仪器厂生产锥板黏度计。代谢笼；离心机；恒温箱。

2 实验方法

2.1 分组与制作模型将大鼠随机分为空白对照组（正常组）、预防组、中药组（治疗组）、包醛氧淀粉组（包醛组）和病理组，动物自由摄食。参考Takako Yokozawa的方法［4］制作慢性肾功能不全大鼠模型，预防组、治疗组、包醛组和病理组每只大鼠按150 mg／（kg／d）的剂量将腺嘌呤加自来水灌胃，1次／d，连用21 d。

2.2 防治方法预防组大鼠除每日灌服腺嘌呤外，还以三黄汤0.5 g／次加自来水灌胃，每日2次，连用21 d。治疗组大鼠灌服腺嘌呤21 d后，以三黄汤0.5 g／次加自来水灌胃，正常组和病理组则以等量自来水灌胃，每日2次，连续30 d。包醛组大鼠灌服腺嘌呤21 d后，给予包醛氧淀粉混悬液（0.25 g／mL），每只大鼠每日2 mL灌胃，连续30 d。

2.3 检验项目与方法实验结束时，用代谢笼收集大鼠24 h尿液，考马斯亮法测定24 h尿蛋白定量（UPQ），酶联免疫吸附测定法（ELISA法）测定24h尿视黄醇结合蛋白定量（RBP），大鼠眼眶后静脉丛穿刺取2 mL血液，离心取血清送检检验，血清尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、血浆纤维蛋白原（FI）水平用全自动生化分析仪测定，血黏度用黏度计测定。

2.4 统计学方法所有计量资料都以均数±标准差（¯x±s）表示，数据用SPSS 7.0统计软件分析，计数资料用四格表确切概率法分析。

3 结果

3.1 各组一般情况正常组大鼠毛色光泽，双目有神，反应灵敏，食欲旺盛，体重增加，大便正常，小便约每日15～20mL，色淡黄。其他组大鼠灌服腺嘌呤3周后，病理组、包醛组、治疗组大鼠倦怠少动，反应迟钝，摄食较少，体重增加较慢，甚至体重下降。预防组大鼠较前述3组大鼠活跃，精神状态良好，毛色光泽，摄食量较好。实验进行到51 d时，病理组大鼠日渐衰弱、消瘦，双目呆滞，精神萎靡，嗜卧，喜扎堆，反应迟钝加重，皮毛蓬松，无光泽，有严重脱毛现象，食欲极差。预防组与治疗组大鼠较包醛组表现稍活跃，反应较灵活，易动，毛色光泽，体重增加较快。病理组、包醛组、治疗组大鼠饮水量与排尿量较预防组与正常组多，尤以病理组多饮、多尿等肾小管功能异常表现为重。实验过程中，各组死亡大鼠数为：包醛组2只，病理组4只，治疗组1只。

3.2 各组对损伤的肾小管-间质及肾功能的影响见表1。

3.3 各组对血脂和血流动力学的影响见表2。

表1 三黄汤对肾小管-间质病变及肾功能的影响（±s）

表1 三黄汤对肾小管-间质病变及肾功能的影响（±s）

注：各组与正常组比较，1）P＜0.01；预防组与包醛组比较，2）P＜0.01；治疗组与病理组比较，3）P＜0.01；包醛组与病理组比较，4）P＜0.01；预防组与治疗组比较，5）P＜0.01；治疗组与包醛组比较，6）P＜0.05。

组别24 h RBP／g 24 h UPQ／g BUN（mmol／L）Scr／（μmol／L）正常组0.078±0.012 13.8±2.11 5.77±0.25 45.01±6.09包醛组7.72±0.861）106.18±11.51）16.54±4.351）114.18±8.541）病理组8.96±1.131）4）1.57±15.521）4）28.12±1.011）4）185.3±24.091）4）预防组4.87±1.231）2）5）43.37±5.881）2）5）9.7±2.21）2）5）76.75±9.541）2）5）治疗组7.01±1.681）3）6）88.3±14.451）3）6）14.02±0.761）3）6）103.65±19.321）3）6）

表2 三黄汤对各组血黏度和血脂的影响（¯±s）

表2 三黄汤对各组血黏度和血脂的影响（¯±s）

注：各组与正常组比较，1）P＜0.01；预防组与包醛组比较，2）P＜0.01，8）P＜0.05；治疗组与病理组比较：3）P＜0.01；包醛组与病理组比较，4）P＜0.01；预防组与治疗组比较，5）P＜0.01；治疗组与包醛组比较，6）P＜0.05，7）P＜0.01。

组别全血黏度／（mPa／s）高切低切血浆粘度／（mPa／s）红细胞压积／%FI／（g／L）TH／（mmol／L）TC／（mmol／L）正常组3.856±0.29 6.932±0.56 2.704±0.367 42.87±2.85 3.57±0.25 1.331±0.237 4.286±0.489包醛组6.32±0.531）10.731±0.7321）3.535±0.4191）40.15±3.03 6.1±1.011）1.764±0.2861）6.123±0.2581）病理组7.576±0.5871）4）11.35±0.7561）4）4.158±0.4011）4）36.32±9.791）7.61±1.031）4）1.854±0.4031）7.009±0.4771）4）预防组4.574±0.3071）2）9.304±0.6431）3.051±0.2982）8）41.02±1.81 3.7±0.642）1.5±0.195 4.876±0.3871）2）治疗组5.13±0.4361）3）5）6）9.35±0.491）3）5）6）3.46±0.4391）3）5）6）40.4±2.08 4.79±0.821）3）7）1.72±0.1571）5.56±0.6191）3）5）7）

3.4 结果分析由表1可以看出，治疗后，各组大鼠的24 h尿视黄醇结合蛋白定量、24 h尿蛋白定量、血尿素氮、血肌酐等指标与正常组比较均有显著差异（P＜0.01），预防组、包醛组和中药组大鼠上述指标较病理组有下降，预防组降低最明显，治疗组大鼠指标较包醛组降低明显，提示包醛氧淀粉虽能改善大鼠肾功能，但不如三黄汤疗效显著。

由表2可以看出，治疗后大鼠的全血黏度与正常组比较均有显著差异（P＜0.01），预防组、包醛组和中药组大鼠上述指标较病理组有下降，预防组降低最明显。纤维蛋白原（FI）是影响全血黏度的重要因素，治疗后预防组与正常组比较无明显差异（P＞0.05），包醛组与治疗组较病理组指标下降明显（P＜0.05或0.01），治疗组优于包醛组。提示三黄汤能改善慢性肾功能不全大鼠的血黏度。正常情况下，血黏度指标越高，红细胞压积相应增加，在治疗后，各组与正常组比较红细胞压积变小，病理组下降明显（P＜0.01），其余各组间差异不大（P＞0.05），分析与肾功能不全大鼠贫血有关。三酰甘油和胆固醇在治疗后各组之间两两比较，除三酰甘油在预防组和正常组比较无明显差异外（P＞0.05），各组与正常组比较均有显著差异（P＜0.05或0.01），提示三黄汤能显著改善大鼠的高脂血症。

4 讨论

4.1 肾功能不全动物模型的建立大鼠被灌服腺嘌呤后，在体内经消化道吸收入血，在肝内经黄嘌呤氧化酶的作用转变2，8～二经基腺嘌呤，从肾小球滤过后，在肾小管内形成针状结晶物沉积，阻塞、压迫肾小管，引起肾小管上皮细胞损伤及肾间质肉芽肿性炎症反应，间质中出现异物肉芽肿、中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞浸润以及纤维化增生［1-2］，出现肾小管间质纤维化，使肾功能受到损害。同时引起高脂血症、蛋白尿等病理改变。目前研究认为慢性肾小管-间质病变，中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞在间质中浸润，并分泌大量的细胞因子，刺激成纤维细胞的增殖和胶原的合成，使肾间质纤维化，使小管间毛细血管狭窄，血管阻力增加，肾血流量减少，导致进行性肾功能损害［3-4］。而损伤和再生的肾小管上皮细胞也能合成并分泌大量的肿瘤坏死因子（TNFa），促进成纤维细胞的增殖，促进间质纤维化［5］。此外，腺嘌呤会引起黄嘌呤氧化酶介导的自由基增加，使生物膜受到攻击，也导致肾实质损害。近年研究表明，高脂血症与高黏血症相关，也是引起肾功能持续恶化的重要因素，降低过高血脂与血黏度，可改善肾内微循环，有助于延缓肾间质纤维化。

本实验大鼠给予腺嘌呤后，大鼠倦怠少动，反应迟钝，日渐衰弱、消瘦，双目呆滞，精神萎靡，嗜卧，喜扎堆，皮毛蓬松，无光泽，有严重脱毛现象，食欲极差。有多饮、多尿等肾小管功能异常表现。

4.2 三黄汤方剂疗效评价中医理论治疗慢性肾功能不全主要以补气活血，健脾益肾为治疗原则，因此本实验选用黄芪、三七、银黄组成方剂，进行实验研究。结果表明治疗组大鼠一般情况优于包醛组，血尿素氮、肌酐含量也低于包醛组，预防组的肾功能指标低于治疗组与包醛组，并有显著性差异（P＜0.01）。实验完成时，治疗组上述指标均低于病理组（P＜0.01）。包醛组上述指标低于病理组（P＜0.01）。预防组明显低于治疗组（P＜0.01）。血液流动力学指标，病理组较包醛组为高，病理组和包醛组均较预防组和治疗组为高（P＜0.05或0.01）。治疗组较预防组高（P＜0.01）。

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R285.5

A

1007－4813（2010）05－0646－02

2010－07－09）

吉林省科技厅基金项目（2007科技字0781号）。

吴强（1959－），男，医学硕士，副主任医师。研究方向：内科临床。