高胆固醇血症患者血浆对氧磷酯酶1活性变化的研究

蒋兴亮 刘素兰 张均 王光华

(川北医学院附属医院检验科,四川 南充 637000)

高胆固醇血症是导致动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)的危险因素之一。高胆固醇导致体内自由基代谢平衡失调,脂蛋白极易被自由基及脂质过氧化物氧化修饰,其结构和功能发生改变有关[1]。对氧磷酯酶1(paraoxonase1,PON1)是肝脏合成和分泌的一种能够水解脂质过氧化物的抗氧化酶[2],本研究测定高胆固醇血症患者PON1活性及血脂、氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)和丙二醛(MDA)水平,了解PON1活性在高胆固醇血症患者中的变化及与高胆固醇血症之间的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象 2007年10月—2008年10月在我院门诊就诊的高胆固醇(TC)[血浆 TC≥6.22 mmol◦L-1,三酰甘油(TG)＜1.70 mmol◦L-1)]患者109例。其中男性71例,女性38例,年龄35～6957.8±8.1岁。正常胆固醇[血浆TC ＜5.18 mmol◦L-1,且低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)＜3.37 mmol◦L-1,TG ＜1.70 mmol◦L-1]组为 66例健康体检者,其中男性43例,女性23例,年龄34～65岁,平均55.1±7.7岁。所有受检者均无影响脂肪代谢的疾病(如糖尿病、甲状腺功能减低或肝肾功能不全等);近2个月无急性心肌梗死、心绞痛和脑血管意外,血压稳定在正常水平;至少1个月内未用过降脂药、抗血小板药及钙离子拮抗剂。

1.2 方法

1.2.1 标本收集 所有受检者禁食12 h,于清晨采集静脉血液,肝素抗凝,分离血浆,置-20℃保存备检。

1.2.2 血浆PON1活性测定 以对氧磷为底物,通过测定对氧磷的水解产物对硝基苯酚的产生速率来计算PON1活性[3]。

1.2.3 血浆MDA测定 用硫代巴比妥酸法。试剂盒由南京建成生物工程公司提供。

1.2.4 血浆ox-LDL的测定 用单抗ELISA法。试剂盒由上海荣盛生物技术有限公司提供。

1.2.5 血脂测定 采用酶法测定TG、TC,用一步酶法分别测定高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),透射免疫浊度法分别测定载脂蛋白A(apoA)、载脂蛋白B(apoB)和脂蛋白(a)[LP(a)]。试剂盒由浙江东瓯生物工程公司提供。所有生化项目均在日立7170S生化分析仪上完成。

2 结 果

2.1 高胆固醇血症组和对照组血脂水平的比较高胆固醇血症组TC、LDL-C浓度显著高于对照组(P＜0.01),LP(a)、apoB高于对照组(P＜0.05),其他血脂指标差异无统计学意义(表1)。

表1 高胆固醇血症组与对照组血脂水平的比较()

表1 高胆固醇血症组与对照组血脂水平的比较()

注:与对照组比较,*P＜0.05,**P＜0.01

项目 高T C组(n=109)对照组(n=66)TG(mmol◦ L-1) 1.39±0.52 1.32±0.44 TC(mmol◦L-1) 6.98±1.38** 4.49±0.51 HDL-C(mmol◦L-1) 1.24±0.30 1.26±0.32 LDL-C(mmol◦L-1) 5.02±0.92** 2.50±0.71 apoA(g◦L-1) 1.20±0.21 1.22±0.24 apoB(g◦L-1) 1.18±0.51* 0.81±0.32 LP(a)(mg◦L-1) 192.3±129.0* 160.3±103.1

2.2 高胆固醇血症组与对照组血浆PON1、MDA、ox-LDL的水平 高胆固醇血症组患者血浆PON1活性显著低于对照组(P＜0.01),而血浆MDA、ox-LDL水平显著高于对照组(P＜0.01)(表2)。

表2 高胆固醇血症患者血浆PON1、ox-LDL、MDA()

表2 高胆固醇血症患者血浆PON1、ox-LDL、MDA()

注:与对照组比较,*P＜0.05

组别 例数 PON1(kU◦L-1)MDA(μmol◦L-1)ox-LDL(μg◦L-1)对照组 66 171.4±66.2 9.7±2.3 455.1±178.2高 TC组 109 138.1±62.4*12.8±3.8*589.1±198.2*

2.3 高胆固醇血症患者血浆PON1与 ox-LDL、MDA的关系 PON1分别与血脂、ox-LDL、MDA进行直线相关分析,结果显示PON1活性与MDA(r=-0.441,P＜0.01)及 ox-LDL(r=-0.402,P＜0.01)呈显著负相关,与血脂无相关性。

3 讨 论

高胆固醇血症通过多种机制诱导心脑大血管和微血管系统的致炎症和致血栓状态、氧化应激损伤、损害血管内皮细胞代谢和功能,最终导致As的发生和发展[4]。高胆固醇血症时抗氧化能力下降,氧自由基(OFR)生成增加,通过损伤血管内皮细胞结构及功能,诱导血管内皮细胞粘附分子基因表达,促进局部炎性反应和细胞增殖,增强白细胞与内皮细胞的粘附,灭活一氧化氮(NO)生物活性,从多方面作用参与 As的发生发展。本研究采用MDA及ox-LDL作为评价高胆固醇血症氧化应激的指标,检测MDA及ox-LDL水平可间接反映体内过氧化物的水平及受氧化损伤的程度。结果显示,高胆固醇血症患者血浆MDA及ox-LDL水平较正常对照组显著升高(P＜0.01),提示在高胆固醇血症状态时体内氧化与抗氧化的平衡被破坏,导致脂质过氧化物的聚积。

本研究结果显示,高胆固醇血症组患者血浆PON1活性较对照组显著降低(P＜0.01),且PON1活性与MDA水平及ox-LDL水平呈显著负相关(P＜0.01)。PON1作为一种抗氧化酶,与体内其他抗氧化酶或物质一样,在水解过氧化物的过程中活性逐步下降,机体抗氧化能力降低,使其直接参与血中脂质过氧化物的水解能力减弱,不能有效清除过氧化物,特别是脂质过氧化物。过氧化物使 LDL、HDL发生氧化修饰,其结构和功能发生改变,尤其是低密度脂蛋白氧化后,通过多种机制可引发及促进As病变,这是As的始动和关键环节[5]。因此,在高胆固醇血症的治疗中,不仅要加强血脂的调节,而且应重视提升包括PON1在内的机体的抗氧化能力。

总之,高胆固醇血症患者产生大量的过氧化物,使包括PON1在内的抗氧化酶活性降低,导致机体的抗氧化能力下降,氧化与抗氧化平衡被打破,最终对机体造成不利影响。

1 T aniyama Y,G riendling KK.Reactive oxygen species in the vasculature:M olecular and cellular mechanisms[J].Hypertension,2003,42(6):1075-1081.

2 Mackness B,Hine D,McElduff P,et al.High C-reactive protein and low paraox onase 1 in diabetes as risk factors for coronary heart disease[J].Atherosclerosis,2006,186(2):396-401.

3 蒋兴亮,龚国忠,周京国,等.血浆对氧磷酯酶1活性在各类肝损害病程中的变化及意义[J].中国临床医学,2006,13(4):584-586.

4 Kitayama J,Faraci M R,Lentz SR,et al.Cerebral vascular dysfunction during hypercholesterolemia[J].Stroke,2007,38(7):2136-2141.

5 Shimada K,M okuno H,Matsunaga E,et al.Circulating oxidized low-density lipoprotein is an independent predictor for cardiac event in patients with coronary artery disease[J].A therosclerosis,2004,174(2):343-347.